一種高穩(wěn)定性的鼠尾草精油納米脂質(zhì)體抗菌劑及制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物制劑或者化妝品領(lǐng)域，具體涉及一種高穩(wěn)定性的鼠尾草精油納米 脂質(zhì)體抗菌劑及制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 鼠尾草（Salviaofficinalis)，又名藥用鼠尾草、撒爾維亞，是唇形科鼠尾草屬的 一種芳香性植物；現(xiàn)今醫(yī)學(xué)實驗證明，鼠尾草含有苯酸和崔柏酮成分，可殺菌預(yù)防感冒、活 潑腦細胞，增強記憶力，鼠尾草精油的主要化學(xué)成分為3,7_二甲基-2,6_辛二烯，3,7_ 二甲基-2,6_辛二烯，其次是6-甲基-1，5_庚二烯、3-甲基-2-戊烯、崔柏酮等揮 發(fā)物質(zhì)，鼠尾草精油有強烈的香草氣味，有助于緩解悲痛和重新振奮精神，還能刺激循環(huán)系 統(tǒng)，幫助解決女性問題，包括不育癥、更年期癥，鼠尾草對于皮膚有一定的治療作用，比如減 小皮膚的毛孔大小。鼠尾草精油屬天然產(chǎn)物，有著低殘留、低毒副作用、無污染等特點，其殺 菌、保健等功能越來越引起人們的關(guān)注。
[0003] 國內(nèi)外關(guān)于鼠尾草精油的專利申請并不多；CN103340952A公開了一種改善女性 月經(jīng)不調(diào)的鼠尾草復(fù)方精油；CN103349354A公開了一種鼠尾草提取物及其制備方法和作 為煙草制品添加劑的用途；CN103750545A公開了一種摻配迷迭香和鼠尾草的煙葉陳化方 法；CN103960508A公開了一種鼠尾草螃蟹飼料；韓國專利KR101456287B1公開了一種鼠尾 草葉子制備抗氧化劑和抗炎功能茶產(chǎn)品的方法。
[0004] 雖然鼠尾草精油有著低毒副作用，殺菌性能較強等特點，但是對空氣和溫度十分 敏感；鼠尾草精油在和空氣接觸的過程中極容易被氧化，即使是在密封的條件下，精油依然 會受到光照的影響而變質(zhì)，而且，鼠尾草精油極易揮發(fā)，本專利發(fā)明了一種鼠尾草精油納米 脂質(zhì)體的制備方法，可以有效地改善這些問題。
[0005] 納米脂質(zhì)體是由磷脂雙分子層構(gòu)成的雙分子層囊泡，具有類生物膜結(jié)構(gòu)。納米脂 質(zhì)體屬于一種緩釋制劑，可以使被包裹的物質(zhì)緩慢釋放，并且保護所包埋的物質(zhì)，避免了鼠 尾草精油的揮發(fā)和光照，另外，鼠尾草精油納米脂質(zhì)體由于其納米尺寸還具有高附著力的 特點，極大地增加了鼠尾草精油與細菌的接觸，從而提高了鼠尾草精油的殺菌活性，但由于 脂質(zhì)體的緩釋作用，包裹精油的脂質(zhì)體保質(zhì)期受限，所以，選用殼聚糖和明膠制成穩(wěn)定性高 的多層脂質(zhì)體，鼠尾草精油多層納米脂質(zhì)體有效地提高了精油的利用率和貯藏期。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是公開一種高穩(wěn)定性的鼠尾草精油納米脂質(zhì)體及其制備方法，通過 將鼠尾草精油包裹在納米脂質(zhì)體中，以實現(xiàn)減少鼠尾草精油在使用過程中的揮發(fā)，從而減 少鼠尾草精油的浪費，達到高效利用的目的。
[0007] -種高穩(wěn)定性的鼠尾草精油納米脂質(zhì)體，鼠尾草精油包裹在磷脂雙分子層中，其 特征在于：磷脂雙分子層為第一層納米脂質(zhì)體，還設(shè)有第二層納米脂質(zhì)體，第二層由殼聚糖 組成。
[0008] 進一步地，所述的一種高穩(wěn)定性的鼠尾草精油納米脂質(zhì)體，其特征在于：還設(shè)有第 三層納米脂質(zhì)體，第三層由明膠組成。
[0009] 進一步地，第二層納米脂質(zhì)體中殼聚糖的濃度為0? 2mg/mL。
[0010] 進一步地，第三層納米脂質(zhì)體中明膠的濃度為0. 4mg/mL。
[0011] 本發(fā)明由鼠尾草精油，大豆卵磷脂，膽固醇、表面活性劑，殼聚糖和明膠制成鼠尾 草精油納米脂質(zhì)體。
[0012] 大豆卵磷脂、膽固醇是構(gòu)成脂質(zhì)體的組要成分，膽固醇均有調(diào)節(jié)膜流動性的作用， 所以考察其兩者的配比變化，對構(gòu)成的脂質(zhì)體分散性等參數(shù)有無影響；表面活性劑是增加 脂質(zhì)體穩(wěn)定性；鼠尾草精油濃度是根據(jù)包封率來確定的；醋酸鹽溶液的PH是為了最佳溶解 殼聚糖；殼聚糖和明膠都可以增加穩(wěn)定性。
[0013] 本發(fā)明的制備方法是將鼠尾草精油，大豆卵磷脂，膽固醇混合于有機溶劑，減壓蒸 干形成光滑的薄膜，加入水相介質(zhì)和表面活性劑組成的混合溶液溶解薄膜并超聲成乳、離 心后取上層液體過濾得到單層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體，其特征在于：將單層鼠尾草精油納 米脂質(zhì)體與殼聚糖溶液攪拌均勻，通過離心和微孔濾膜過濾，得到粒徑為納米級的雙層鼠 尾草精油納米脂質(zhì)體。
[0014] 進一步地，將雙層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體與明膠溶液攪拌均勻，通過離心和微孔 濾膜過濾，得到粒徑為納米級的多層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體。
[0015] 進一步地，本發(fā)明的大豆卵磷脂和膽固醇的質(zhì)量比例為5:1;表面活性劑、鼠尾草 精油與膽固醇的質(zhì)量比為：1:4:4,此條件下可以得到最高的包封率。
[0016] 進一步地，表面活性劑為PVP，混合溶液中PVP的濃度為I. 0mg/mL。
[0017] 單層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體與殼聚糖溶液的體積比為1:10 ;雙層鼠尾草精油納 米脂質(zhì)體與明膠溶液的體積比為1:10。
[0018] 本發(fā)明中所述的有機溶劑是氯仿。
[0019] 本發(fā)明中所用的水相介質(zhì)是根據(jù)中國藥典2000版標(biāo)準(zhǔn)配制的醋酸鹽緩沖溶液， pH值 3. 5~4. 0。
[0020] 所述的殼聚糖溶液為殼聚糖的醋酸鹽溶液，濃度為0.2mg/mL，醋酸鹽溶液是根 據(jù)中國藥典2000版標(biāo)準(zhǔn)配制的醋酸鹽緩沖溶液，pH值3. 5~4. 0,優(yōu)選3. 6,能夠最佳溶解殼 聚糖。
[0021] 所述明膠溶液為明膠的醋酸鹽溶液，濃度為0. 4mg/mL，醋酸鹽溶液是根據(jù)中國藥 典2000版標(biāo)準(zhǔn)配制的醋酸鹽緩沖溶液，pH值3. 5~4. 0。
[0022] 本發(fā)明中脂質(zhì)體的第一層是磷脂雙分子層，即人工細胞膜層。
[0023] 本發(fā)明中脂質(zhì)體的第二層由殼聚糖組成，濃度為0.2mg/mL。
[0024] 本發(fā)明中脂質(zhì)體的第三層由明膠組成，濃度為0.4mg/mL。
【附圖說明】
[0025] 圖1為鼠尾草精油納米脂質(zhì)體的包封率。
[0026]圖2為鼠尾草精油納米脂質(zhì)體的粒徑與多分散系數(shù)roi。
[0027] 圖3為多層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體熒光顯微圖。
[0028] 圖4為多層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體原子力顯微圖。
[0029]圖5多層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體對大腸桿菌的抗菌性能。
[0030]圖6多層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體對金黃色葡萄球菌的抗菌性能。
[0031] 表1為鼠尾草精油納米脂質(zhì)體的Zeta電位。
【具體實施方式】
[0032] 通過下面實例說明本發(fā)明的【具體實施方式】，但本發(fā)明的保護內(nèi)容，不僅局限于此。
[0033] 實施例1多層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體的包封率 1實驗材料 (1)大豆卵磷脂；BR;國藥集團化學(xué)試劑有限公司。
[0034] (2)膽固醇；AR;國藥集團化學(xué)試劑有限公司。
[0035] (3)三氯甲烷；AR;國藥集團化學(xué)試劑有限公司。
[0036] (4)鼠尾草精油；AR;法國fIorihana精油。
[0037] (5)PVP;GR;國藥集團化學(xué)試劑有限公司。
[0038] (6)殼聚糖；BR;國藥集團化學(xué)試劑有限公司。
[0039] (7)明膠；BR;國藥集團化學(xué)試劑有限公司。
[0040]1)單層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體的制備 ①稱取Ig大豆卵磷脂，0. 2g膽固醇和200mg的鼠尾草精油，加50mL氯仿使其溶 解。
[0041] ②在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中蒸發(fā)至溶劑蒸干，蒸發(fā)溫度為10~30 °C，圓底燒瓶內(nèi)壁會形 成光滑的薄膜；然后將所得產(chǎn)品放入真空干燥箱中，30 °C，真空狀態(tài)下干燥24小時。
[0042] ③稱取0. 05g的PVP于50mL醋酸鹽緩沖液中，超聲波條件下擴散，然后將PVP 的醋酸鹽緩沖液加入圓底燒瓶中進行超聲波條件下水化， ④ 將水化后的混合液于細胞超微粉碎儀中以工作10s，間隙5s的頻率粉碎30 min〇
[0043] ⑤將所得產(chǎn)品進行離心，4000rpm，15min，取上層液體。
[0044] ⑥將所得液體用0. 22ym濾膜進行過濾，得濾液，為單層鼠尾草精油納米脂質(zhì) 體。
[0045] 2)雙層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體的制備 ①按照上述單層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體的制備方法，制備含200mg鼠尾草精油的單 層納米脂質(zhì)體。
[0046] ②將單層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體分散在含0. 2mg/mL殼聚糖的醋酸鹽溶液中混 合均勻；單層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體與殼聚糖的醋酸鹽溶液的體積比1 :1〇。
[0047] ③將所得混合液于細胞超微粉碎儀中以工作10s，間隙5s的頻率粉碎30 min〇
[0048] ④將所得產(chǎn)品進行離心，4000rpm，15min，取上層液體； ⑤ 將所得液體用0.22ym濾膜進行過濾，得濾液，為雙層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體。
[0049] 3)多層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體的制備 ①按照上述雙層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體的制備方法，制備含200mg鼠尾草精油的雙 層納米脂質(zhì)體。
[0050] ②將雙層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體分散在含0.4mg/mL明膠的醋酸鹽溶液中使其 混合均勻；雙層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體與明膠的醋酸鹽溶液的體積比為1 :1〇。
[0051] ③將所得混合液于細胞超微粉碎儀中以工作10s，間隙5s的頻率粉碎30 min〇
[0052] ④將所得產(chǎn)品進行離心，4000rpm，15min，取上層液體。
[0053] ⑤將所得液體用0. 22ym濾膜進行過濾，得濾液，為多層鼠尾草精油納米脂質(zhì) 體。
[0054] 4)包封率的測定 用無水乙醇稀釋鼠尾草精油，逐級稀釋成濃度分別為0.l、〇. 2、0. 4、0. 6、0. 8mg/mL的 標(biāo)準(zhǔn)溶液，然后，分別吸取IyL標(biāo)準(zhǔn)溶液進行GC-MS分析，對其主要成分乙酸芳樟酯的譜 峰面積進行自動積分，繪制乙酸芳樟酯峰面積-鼠尾草精油濃度標(biāo)準(zhǔn)曲線；首先取ImL鼠尾 草精油納米脂質(zhì)體樣品，13500rpm，離心3h，倒掉上清液。接著加入ImL乙醇破乳劑，超 聲3h，最后以10000rpm的轉(zhuǎn)速離心15min，取上清液，用于GC-MS分析，制備好的脂質(zhì)體 樣品，對精油主成分的峰面進行自動積分，再根據(jù)步驟1中繪制的標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算出脂質(zhì)體 中植物精油的含量。
[0056] 3鼠尾草精油納米脂質(zhì)體的包封率 包封率是評價脂質(zhì)體制劑質(zhì)量好壞的最重要的指標(biāo)，也是脂質(zhì)體能否發(fā)揮較普通制劑 高效、低毒等特點的關(guān)鍵；由圖1可看出，單層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體的包封率為32. 7%，雙 層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體的包封率為55. 1%，多