層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體的包封率最大，為 89. 7%，因此制備多層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體可以明顯提高脂質(zhì)體的包封率。
[0057] 實(shí)施例2多層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體的粒徑與多分散系數(shù)roi 1實(shí)驗(yàn)材料 ①單層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體。
[0058] ②雙層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體。
[0059] ③多層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體。
[0060] 2實(shí)驗(yàn)方法 用美國(guó)布魯克海文儀器公司產(chǎn)的，型號(hào)為BI-9000的高濃度激光粒度儀測(cè)定鼠尾草精 油納米脂質(zhì)體的粒徑和多分散系數(shù)PDI值，所測(cè)樣品放入樣品池直接測(cè)量即可。
[0061] 3鼠尾草精油納米脂質(zhì)體的粒徑與多分散系數(shù)roi 多分散系數(shù)PDI直接反映鼠尾草精油納米脂質(zhì)體的穩(wěn)定性，因此是主要參考指標(biāo)，月旨 質(zhì)體的PDI在0~0. 3范圍內(nèi)屬于最好，在0. 3~0. 7范圍內(nèi)較差，但可以接受，當(dāng)roi>0. 8時(shí)， 不予考慮；如圖2所示，單層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體的粒徑為146.lnm、PDI為0. 303,雙層 鼠尾草精油納米脂質(zhì)體的粒徑為194. 2nm、PDI為0. 241，多層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體的粒 徑為241. 6nm、PDI為0. 197 ;多層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體的多分散系數(shù)PDI最小，因此制備 多層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體可以明顯提高脂質(zhì)體的穩(wěn)定性。
[0062] 實(shí)施例3鼠尾草精油納米脂質(zhì)體的Zeta電位 1實(shí)驗(yàn)材料 ①單層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體。
[0063] ②雙層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體。
[0064] ③多層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體。
[0065] 2實(shí)驗(yàn)方法 用英國(guó)馬爾文儀器有限公司生產(chǎn)的型號(hào)為ZetasirernanoZSZeta的電位儀測(cè)量，直 接將待測(cè)脂質(zhì)體樣品放入電位儀中測(cè)量即可。
[0066] 3鼠尾草精油納米脂質(zhì)體的Zeta電位
Zeta電位也可以直接反映鼠尾草精油納米脂質(zhì)體的穩(wěn)定性，因此也是主要參考指標(biāo)， 脂質(zhì)體的Zeta電位的絕對(duì)值越大說(shuō)明脂質(zhì)體越穩(wěn)定性，Zeta電位的絕對(duì)值在0~30范圍內(nèi) 屬于不穩(wěn)定，在大于30時(shí)脂質(zhì)體較穩(wěn)定性；如表1所示，三種鼠尾草精油納米脂質(zhì)體均帶負(fù) 電，單層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體的Zeta電位為-25. 4mV，其絕對(duì)值小于30脂質(zhì)體不穩(wěn)定，雙 層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體的Zeta電位為-29. 2mV，其絕對(duì)值小于30脂質(zhì)體不穩(wěn)定，多層鼠 尾草精油納米脂質(zhì)體的Zeta電位為-54.lmV，其絕對(duì)值最大，脂質(zhì)體最穩(wěn)定。
[0067]實(shí)施例4多層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體的熒光顯微鏡觀察 1實(shí)驗(yàn)材料 多層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體。
[0068] 2實(shí)驗(yàn)方法 用德國(guó)徠卡儀器公司生產(chǎn)的型號(hào)為T(mén)CS-SP5的熒光顯微鏡，直接將待測(cè)脂質(zhì)體樣品放 入熒光顯微鏡中觀察。
[0069]熒光顯微鏡樣品前處理方法： (1)多層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體樣品的制備（A液):取ImL鼠尾草精油脂質(zhì)體，0.5mL甲醇和0. 5mL氯仿混合。
[0070] (2)熒光染料DIL的制備（B液）：0?ImL的DIL溶于0?ImL的二氯甲烷中。
[0071] (3)取A液0? 5mL和B液50yL放入小離心管混合，震蕩均勻。
[0072] (4)將上述混合液體放入真空干燥箱，干燥一夜。
[0073] (5)取已干燥的離心管，加入0? 5mL超純水，在振蕩器上震蕩30min。
[0074] (6)室溫放置3h。
[0075] (7)滴在載玻片上進(jìn)行觀察。
[0076] 3多層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體的熒光顯微鏡觀察 由以上熒光顯微鏡拍攝到的顯微照片可以看出，脂質(zhì)體染色后，呈現(xiàn)圓形，分散較均 勻。
[0077] 實(shí)施例5多層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體的原子力顯微鏡觀察 1實(shí)驗(yàn)材料 多層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體。
[0078] 2實(shí)驗(yàn)方法 用美國(guó)安捷倫科技公司生產(chǎn)的型號(hào)為Agilent5500的原子力顯微鏡，直接將待測(cè)脂質(zhì) 體樣品放入原子力顯微鏡中觀察，原子力前處理方法是取植物精油脂質(zhì)體樣品10yL滴在 云母片上10min，然后用移液槍吸除表面的液體，再滴上10yL超純水30s，重復(fù)清洗3 次，通風(fēng)處?kù)o置3h，放置于原子力顯微鏡下觀察。
[0079] 3多層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體的原子力顯微鏡觀察 由以上原子力顯微鏡拍攝到的顯微照片可以看出，脂質(zhì)體呈現(xiàn)圓形，分散較均勻。
[0080] 實(shí)施例6多層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體的抗菌性能 1實(shí)驗(yàn)材料 ①單層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體(保存7天、30天、60天、90天)。
[0081] ②雙層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體(保存7天、30天、60天、90天)。
[0082] ③多層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體(保存7天、30天、60天、90天)。
[0083] 2實(shí)驗(yàn)方法 采用平板菌落計(jì)數(shù)法，以大腸桿菌（Escherichiacoli)和金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)為模式菌測(cè)定鼠尾草精油納米脂質(zhì)體的殘存菌數(shù)，將大腸桿菌 和金黃色葡萄球菌接種到液體培養(yǎng)基中，分別置于氣浴搖床中在37°C、150rpm條件下震蕩 培養(yǎng)24~48h，獲得對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)菌，取適量處于對(duì)數(shù)期的大腸桿菌和金黃色葡萄球菌分 別加入含有一定量無(wú)菌磷酸緩沖液的試管中（菌濃度約為105~106cfu/mL)，然后再向試管 中加入濃度為10%的各種鼠尾草精油納米脂質(zhì)體，同時(shí)另取兩個(gè)分別含有以上兩種菌的試 管并向其中加入等量無(wú)菌水（不加鼠尾草精油納米脂質(zhì)體）作為對(duì)照，將各試管均置于氣 浴搖床中在37°C、150rpm條件下震蕩反應(yīng)24h，分別于不同時(shí)間點(diǎn)的取適量培養(yǎng)液進(jìn)行十 倍梯度稀釋到合適的濃度，然后移取1〇〇yL稀釋液滴到無(wú)菌固體平板培養(yǎng)基上，涂布均 勻，之后放入37°C恒溫恒濕培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)，24~48h后進(jìn)行平板菌落計(jì)數(shù)，從而對(duì)評(píng)價(jià) 各鼠尾草精油納米脂質(zhì)體的抗菌活性，做三次重復(fù)，結(jié)果取平均值。
[0084] 3多層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體的抗菌性能 不同保存期的鼠尾草精油納米脂質(zhì)體的抗菌活性的變化也可以間接反映脂質(zhì)體的穩(wěn) 定性，因此對(duì)保存7天、30天、60天、90天的各種鼠尾草精油納米脂質(zhì)體進(jìn)行了抗菌性能評(píng) 價(jià)，結(jié)果如圖5、圖6所示；保存時(shí)間為7天時(shí)，單層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體、雙層鼠尾草精 油納米脂質(zhì)體、多層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體的抗菌活性均相同，對(duì)大腸桿菌和金黃色葡萄 球菌均顯示了良好的抗菌效果；保存時(shí)間為30天時(shí)，單層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體的抗菌效 果明顯降低、而雙層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體和多層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體均顯示良好的抗 菌效果；保存時(shí)間為60天和90天時(shí)，單層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體沒(méi)有顯示抗菌效果，雙層 鼠尾草精油納米脂質(zhì)體的抗菌效果明顯降低，而多層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體一直保持良好 的抗菌效果。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種高穩(wěn)定性的鼠尾草精油納米脂質(zhì)體，鼠尾草精油包裹在磷脂雙分子層中，其特 征在于：磷脂雙分子層為第一層納米脂質(zhì)體，還設(shè)有第二層納米脂質(zhì)體，第二層由殼聚糖組 成，以提高包封率、穩(wěn)定性和抗菌性能。2. 如權(quán)利要求1所述的一種高穩(wěn)定性的鼠尾草精油納米脂質(zhì)體，其特征在于：還設(shè)有 第三層納米脂質(zhì)體，第三層由明膠組成，進(jìn)一步提高包封率、穩(wěn)定性和抗菌性能。3. 如權(quán)利要求1所述的一種高穩(wěn)定性的鼠尾草精油納米脂質(zhì)體，其特征在于：第二層 納米脂質(zhì)體中殼聚糖的濃度為0.2 mg/mL。4. 如權(quán)利要求2所述的一種高穩(wěn)定性的鼠尾草精油納米脂質(zhì)體，其特征在于：第三層 納米脂質(zhì)體中明膠的濃度為0.4 mg/mL。5. 如權(quán)利要求1所述的一種高穩(wěn)定性的鼠尾草精油納米脂質(zhì)體的制備方法，是將鼠尾 草精油，大豆卵磷脂，膽固醇混合于有機(jī)溶劑，減壓蒸干形成光滑的薄膜，加入水相介質(zhì)和 表面活性劑組成的混合溶液溶解薄膜并超聲成乳、離心后取上層液體過(guò)濾得到單層鼠尾草 精油納米脂質(zhì)體，其特征在于：將單層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體與殼聚糖溶液攪拌均勻，通過(guò) 離心和微孔濾膜過(guò)濾，得到粒徑為納米級(jí)的雙層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體。6. 如權(quán)利要求5所述的一種高穩(wěn)定性的鼠尾草精油納米脂質(zhì)體的制備方法，其特征在 于：進(jìn)一步地，將雙層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體與明膠溶液攪拌均勻，通過(guò)離心和微孔濾膜過(guò) 濾，得到粒徑為納米級(jí)的多層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體。7. 如權(quán)利要求5所述的一種高穩(wěn)定性的鼠尾草精油納米脂質(zhì)體的制備方法，其特征 在于：大豆卵磷脂和膽固醇的質(zhì)量比例為5:1 ;表面活性劑、鼠尾草精油與膽固醇的質(zhì)量比 為：1:4:4,此條件下可以得到最高的包封率；所述的有機(jī)溶劑是氯仿。8. 如權(quán)利要求5所述的一種高穩(wěn)定性的鼠尾草精油納米脂質(zhì)體的制備方法，其特征在 于：表面活性劑為PVP，混合溶液中PVP的濃度為I. 0 mg/mL ;所用的水相介質(zhì)是根據(jù)中國(guó)藥 典2000版標(biāo)準(zhǔn)配制的醋酸鹽緩沖溶液，pH值3. 5~4. 0。9. 如權(quán)利要求5所述的一種高穩(wěn)定性的鼠尾草精油納米脂質(zhì)體的制備方法，其特征在 于：?jiǎn)螌邮笪膊菥图{米脂質(zhì)體與殼聚糖溶液的體積比為1:10 ;所述的殼聚糖溶液為殼聚 糖的醋酸鹽溶液，濃度為0.2 mg/mL，醋酸鹽溶液是根據(jù)中國(guó)藥典2000版標(biāo)準(zhǔn)配制的醋酸 鹽緩沖溶液，pH值3. 5~4. 0,優(yōu)選3. 6,能夠最佳溶解殼聚糖。10. 如權(quán)利要求6所述的一種高穩(wěn)定性的鼠尾草精油納米脂質(zhì)體的制備方法，其特征 在于：雙層鼠尾草精油納米脂質(zhì)體與明膠溶液的體積比為1:10 ;所述明膠溶液為明膠的醋 酸鹽溶液，濃度為〇. 4 mg/mL，醋酸鹽溶液是根據(jù)中國(guó)藥典2000版標(biāo)準(zhǔn)配制的醋酸鹽緩沖 溶液，pH 值 3. 5~4.0。
【專利摘要】本發(fā)明屬于藥物制劑或者化妝品領(lǐng)域，具體涉及一種高穩(wěn)定性的鼠尾草精油納米脂質(zhì)體抗菌劑及制備方法。本發(fā)明由鼠尾草精油，大豆卵磷脂，膽固醇，表面活性劑，殼聚糖，明膠制成鼠尾草精油納米脂質(zhì)體。其方法是將鼠尾草精油，大豆卵磷脂，膽固醇混合于有機(jī)溶劑，減壓蒸干形成光滑的薄膜，再加入水相介質(zhì)和表面活性劑溶解膜狀物并超聲成乳，再分別與殼聚糖，明膠溶液攪拌均質(zhì)均勻，通過(guò)離心和微孔濾膜過(guò)濾，得到粒徑為納米級(jí)的脂質(zhì)體。本發(fā)明制備工藝重現(xiàn)性好，鼠尾草精油多層納米脂質(zhì)體包封率最高可達(dá)89.7%，且產(chǎn)品形態(tài)完整，粒徑均一，具有良好的穩(wěn)定性與抗菌性。
【IPC分類】A61P31/04, A61K36/537, A01N25/28, A01P1/00, A01N65/22, A61K9/127
【公開(kāi)號(hào)】CN105030679
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510485281
【發(fā)明人】崔海英, 周慧, 林琳
【申請(qǐng)人】江蘇大學(xué)
【公開(kāi)日】2015年11月11日
【申請(qǐng)日】2015年8月10日