穩(wěn)定醫(yī)藥組合物的制作方法【
技術(shù)領(lǐng)域：
】[0001]本發(fā)明是關(guān)于一種含有穩(wěn)定存在的亞丁基苯酞（n-butylidenephthalide，BP)的穩(wěn)定醫(yī)藥組合物，尤其關(guān)于一種可經(jīng)由鼻內(nèi)投藥的含有穩(wěn)定存在的亞丁基苯酞的穩(wěn)定醫(yī)藥組合物，其有效于治療惡性腦瘤?！?br>背景技術(shù)：
】[0002]星狀細(xì)胞瘤（astrocytoma)、退行性星狀細(xì)胞瘤（anaplasticastrocytoma)、及多型惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤（glioblastomamultiforme，GBM)為常見的成人惡性腦瘤，其中又以多型惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤最常見、惡性度最高、侵犯能力最強(qiáng)。[0003]惡性腦瘤具有高浸潤性及高復(fù)發(fā)率、高致死率等特性，其治療至今仍為醫(yī)學(xué)上亟待解決的問題。目前治療方式包括有外科手術(shù)、放射治療及化學(xué)藥物治療等三種。以外科手術(shù)切除腫瘤雖可消滅大部分的腫瘤，但會傷害到其他正常腦組織，進(jìn)而影響病患的行動和語言能力；放射治療可局部殺死腫瘤，但亦會影響周遭的正常組織細(xì)胞；化學(xué)藥物治療則常常因血腦障壁（bloodbrainbarrier，BBB)限制、毒性副作用大、或耐藥性（drugresistance)等問題，無法獲致良好治療效果。鼻內(nèi)投藥方式為藥物治療中的新興投藥方法，其為非侵入式投藥方法，可降低患者感染的風(fēng)險(xiǎn)，且藥物經(jīng)鼻腔吸入后，可經(jīng)由鼻黏膜快速吸收而產(chǎn)生藥效，不會受到肝臟首渡效應(yīng)（first-passeffect)的代謝排除作用，此外自鼻粘膜吸收的藥物能繞行血腦障壁直達(dá)中樞神經(jīng)系統(tǒng)，因而降低藥物全身性毒性，效果優(yōu)于口服投藥或靜脈注射投藥。[0004]亞丁基苯酞（n-butylidenephthalide，BP)為目前治療惡性腫瘤的潛力新藥，其為一種源自當(dāng)歸（Angelicasinensis)萃取物的成分，沸點(diǎn)為139°C至142°C(5毫米萊柱），因此在一般情況下為呈油狀液體。目前已知亞丁基苯酞可用于治療多種惡性腫瘤，包括多型惡性神經(jīng)膠質(zhì)瘤及乳腺惡性腫瘤。另有研究顯示亞丁基苯酞亦可用于抑制運(yùn)動神經(jīng)元的自體吞噬（autophagy)，例如US2014/0045765Al即揭露亞丁基苯酞及其代謝物可用于抑制運(yùn)動神經(jīng)元的自體吞，且可用于治療肌萎縮側(cè)索硬化癥（amyotrophiclateralsclerosis，ALS)〇[0005]然而，亞丁基苯酞雖可提供藥效，但其為脂溶性物質(zhì)而非水溶性物質(zhì)，因此目前在應(yīng)用上仍多有限制，包括在口服配方、注射配方及鼻內(nèi)投藥配方應(yīng)用上的限制、臨床應(yīng)用的限制、以及在使用諸如大鼠等小動物的動物研究上的限制。[0006]鑒于此，目前臨床上需要一種亞丁基苯酞可穩(wěn)定存在或溶解于其中的劑型，以提高亞丁基苯酞于生物體的利用率與改善其遞送情況，并促進(jìn)亞丁基苯酞的臨床研究。本發(fā)明即針對前述需求所為的研發(fā)成果，通過一種介質(zhì)系統(tǒng)以有效穩(wěn)定亞丁基苯酞，從而更有效應(yīng)用亞丁基苯酞?！?br/>發(fā)明內(nèi)容】[0007]因此，本發(fā)明的一目的，在于提供一種醫(yī)藥組合物，包含：(a)-介質(zhì)系統(tǒng)，包含第一成分、第二成分、及第三成分，該第一成分為磷酸鹽緩沖液（phosphatebufferedsaline)，該第二成分選自以下群組：植物油、動物油、脂肪酸及其組合，且該第三成分選自以下群組：聚乙二醇、二甲亞砜（DMS0)、乙醇、聚丙二醇、聚山梨醇酯、聚氧乙基化蔬菜油(polyoxyethylatedvegetableoil)、乙酸乙酯、12-羥基硬酯酸輕乙酯（2-hydroxyethyl12-hydroxyoctadecanoate)、維生素E聚乙二醇琥泊酸酯（tocopherylpolyethyleneglycolsuccinate)、及其組合；以及（b)存在于該（a)介質(zhì)系統(tǒng)中的亞丁基苯酞(n-butylidenephthalide，BP)〇[0008]本發(fā)明的詳細(xì)技術(shù)內(nèi)容及部分實(shí)施態(tài)樣，將描述于以下內(nèi)容中，以供本發(fā)明所屬領(lǐng)域具通常知識者據(jù)以明了本發(fā)明的特征?！靖綀D說明】[0009]圖IA為根據(jù)本發(fā)明的一實(shí)施態(tài)樣的醫(yī)藥組合物的倒立式顯微鏡（頂）圖（400倍；比例尺：50微米）；[0010]圖IB為根據(jù)本發(fā)明的一實(shí)施態(tài)樣的醫(yī)藥組合物之掃描式場發(fā)射電子顯微鏡(FE-SEM)圖（10000倍；比例尺：1微米）；[0011]圖IC為根據(jù)本發(fā)明的一實(shí)施態(tài)樣的醫(yī)藥組合物的穿透式電子顯微鏡（TEM)圖(80000倍；比例尺：200納米）；[0012]圖2A為根據(jù)本發(fā)明的不同實(shí)施態(tài)樣的醫(yī)藥組合物及比較醫(yī)藥組合物于4°C低溫下長時(shí)間儲存前的照片；[0013]圖2B為根據(jù)本發(fā)明的不同實(shí)施態(tài)樣的醫(yī)藥組合物及比較醫(yī)藥組合物于4°C低溫下長時(shí)間儲存后的照片；[0014]圖3顯示根據(jù)本發(fā)明的不同實(shí)施態(tài)樣的醫(yī)藥組合物（其中的介質(zhì)系統(tǒng)組合不同）及比較醫(yī)藥組合物的活性的統(tǒng)計(jì)圖，其中，縱軸為GBM8401細(xì)胞（S卩，人類惡性腫瘤細(xì)胞株）的存活率（以控制組，即不含亞丁基苯酞的態(tài)樣為100%計(jì)），橫軸為活性成分亞丁基苯酞的處理濃度；[0015]圖4顯示儲存時(shí)間對于根據(jù)本發(fā)明的醫(yī)藥組合物的活性的影響的統(tǒng)計(jì)圖，其中，縱軸為GBM8401細(xì)胞的存活率（以控制組，即不含亞丁基苯酞之態(tài)樣為100%計(jì)），橫軸為亞丁基苯酞的處理濃度；[0016]圖5為Franz擴(kuò)散裝置示意圖；[0017]圖6顯示施以不同投藥治療的大鼠存活率統(tǒng)計(jì)圖；[0018]圖7A顯示大鼠于種植腫瘤后施以不同治療，在死亡之日或治療第37天后的腫瘤生長情形的照片，其中，（A)未經(jīng)藥物處理（大鼠死亡之日所取得）（B)BP原液160毫克/公斤（第37天）（C)BP原液320毫克/公斤（第37天）（D)醫(yī)藥組合物580毫克/公斤(第37天）（E)醫(yī)藥組合物5160毫克/公斤（第37天）；[0019]圖7B顯示大鼠于種植腫瘤后施以不同治療，在治療第37天后的腫瘤重量統(tǒng)計(jì)圖；以及[0020]圖7C顯示大鼠于種植腫瘤后施以不同治療，在治療第37天后的腫瘤體積統(tǒng)計(jì)圖。【具體實(shí)施方式】[0021]以下將具體地描述根據(jù)本發(fā)明的部分具體實(shí)施態(tài)樣；但是，在不背離本發(fā)明精神下，本發(fā)明尚可以多種不同形式的態(tài)樣來實(shí)踐，不應(yīng)將本發(fā)明保護(hù)范圍解釋為限于說明書所陳述者。此外，除非文中有另外說明，于本說明書中（尤其是在后述專利申請范圍中）所使用之「一」、「該」及類似用語應(yīng)理解為包含單數(shù)及復(fù)數(shù)形式；以及在本說明書中「烴基」是指飽和直鏈或支鏈烴基，或具有一或多個鍵的不飽和直鏈或支鏈烴基。[0022]對于具有治療效果的活性成分而言，其一通常應(yīng)用型態(tài)為以液體劑型的方式投藥，液體劑型中包含活性成分及介質(zhì)，活性成分可溶于介質(zhì)中或穩(wěn)定存在于介質(zhì)中。更具體言之，配合不同的投藥途徑需求（如口服、體細(xì)胞導(dǎo)入、或外用），將活性成分溶于介質(zhì)中(若其可溶）或懸浮于介質(zhì)中（若其不可溶）而形成一適合投藥的溶液、懸浮液或乳化液(emulsion)。此外，就制備含有少量活性成分的固體劑型而言，通常先將活性成分溶解或懸浮于液體介質(zhì)中，而后再以該溶有或懸浮有活性成分的液體介質(zhì)進(jìn)行固體劑型制備，以準(zhǔn)確控制最終產(chǎn)物中的活性成分濃度（含量）。[0023]本案發(fā)明人研究后發(fā)現(xiàn)，亞丁基苯酞對于乙醇之溶解度最高，乙醇為其極佳的溶劑。其中，亞丁基苯酞于乙醇中的溶解度超過222毫克/毫升，但于聚乙二醇400、聚乙二醇300或聚丙二醇中的溶解度則僅為約70至120毫克/毫升。然而，有研究顯示，嬰幼兒因?yàn)榇济摎涿福╝lcoholdehydrogenase)尚未成熟，并沒有辦法如成人般有效的代謝乙醇（可參見ZuccottiGV,FabianoV.Safetyissueswithethanolasanexcipientindrugsintendedforpediatricuse.ExpertOpinDrugSaf2011;10(4):499_502,該文獻(xiàn)全文并于此處以供參考）。因此，若能以其他溶劑取代乙醇作為亞丁基苯酞的介質(zhì)，或者可于介質(zhì)中減少乙醇的用量，則將可大幅提高亞丁基苯酞的應(yīng)用范圍。[0024]本發(fā)明人進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，亞丁基苯酞可穩(wěn)定存在于一特定介質(zhì)系統(tǒng)中，即使長時(shí)間儲存（室溫下儲存三天；4°C下儲存三十天）仍可穩(wěn)定存在于該介質(zhì)系統(tǒng)中并保持活性，該介質(zhì)系統(tǒng)進(jìn)一步還可以提高亞丁基苯酞于生物體中的利用率，從而在相對低的亞丁基苯酞用量下提供所欲治療效果，減緩或免除不必要的副作用。[0025]因此，本發(fā)明提供一種穩(wěn)定醫(yī)藥組合物，該醫(yī)藥組合物包含（a)-介質(zhì)系統(tǒng)以及(b)穩(wěn)定存在于該（a)介質(zhì)系統(tǒng)中的亞丁基苯酞。[0026]亞丁基苯酞可由商業(yè)上購得（例如可購自長弘生物科技股份有限公司，臺灣）、化學(xué)合成或由天然材料（例如：當(dāng)歸）中萃取分離而得。此外，于使用萃取分離所得的亞丁基苯酞以前，可進(jìn)一步通過例如驟沸塔層析法（flashcolumnchromatography)、高效液相層析法、或結(jié)晶法的純化方法，以提高亞丁基苯酞的純度。[0027]于本發(fā)明醫(yī)藥組合物中，（a)介質(zhì)系統(tǒng)包含第一成分、第二成分、及第三成分。該第一成分為磷酸鹽緩沖液（phosphatebufferedsaline)，該第二成分選自以下群組：植物油、動物油、脂肪酸及其組合，且該第三成分選自以下群組：聚乙二醇、二甲亞砜、乙醇、聚丙二醇、聚山梨醇酯、聚氧乙基化蔬菜油（polyoxyethylatedvegetableoil)、乙酸乙酯、12-羥基硬酯酸輕乙酯（2-hydroxyethyl12-hydroxyoctadecanoate)、維生素E聚乙二醇琥I白酸酯（tocopherylpolyethyleneglycolsuccinate)、及其組合。[0028]作為（a)介質(zhì)系統(tǒng)的第一成分，磷酸鹽緩沖液對細(xì)胞而言是等壓的且無毒的?？捎诒景l(fā)明醫(yī)藥組合物中采用任何合宜的磷酸鹽緩沖液，其實(shí)例包括NaCl(137mM)與KCl(2.7mM)的組合的水溶液及Na2HPO4(IOmM)、KH2P04(1.8mM)、NaCl(137mM)與KCl(2.7mM)的當(dāng)前第1頁1 2 3 4