一種具有降尿酸活性的側(cè)柏葉多酚及其制備方法和應(yīng)用
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種具有降尿酸活性的側(cè)柏葉多酚及其制備方法和應(yīng)用
[0001]
技術(shù)領(lǐng)域
[0002]本發(fā)明涉及天然提取物領(lǐng)域，具體涉及一種具有降尿酸活性的側(cè)柏葉多酚的制備方法及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0003]側(cè)說(shuō)IPlatycIadus orientails (L.) Franco),別名香柯樹(shù)、香樹(shù)、扁檜、香柏、黃柏，隸屬于裸子植物門(mén)(Gymnospermae)^松柏綱(Coniferopsida)、松杉目(Ctwi/kraJes)、柏科(側(cè)柏屬6.)。下級(jí)分類(lèi)有金塔柏、金黃球柏、千頭柏、窄冠側(cè)柏。側(cè)柏嫩枝、葉及果皆可入藥，其味苦、濕，性微寒，入肺、肝、大腸經(jīng)，有涼血止血、烏須發(fā)、止咳喘的功效。在古代，側(cè)柏的枝葉是備受道家推崇的延年上品，具有重要的食療養(yǎng)生價(jià)值。明代李時(shí)珍《本草綱目》記載側(cè)柏葉“治風(fēng)痹關(guān)節(jié)作痛”。若感受風(fēng)熱之邪，與濕相并，而致風(fēng)濕熱合邪為患。風(fēng)濕熱痹，癥見(jiàn)關(guān)節(jié)疼痛、灼熱紅腫、發(fā)熱、口渴等，可用側(cè)柏葉，苦寒清熱，祛風(fēng)降濕而通絡(luò)止痛。
[0004]側(cè)柏葉所含的主要成分為多酚類(lèi)化合物、黃酮類(lèi)化合物、鞣質(zhì)及揮發(fā)油類(lèi)等，相關(guān)活性研究包括抗腫瘤作用、抗炎作用、抑菌作用、改善睡眠作用、神經(jīng)保護(hù)作用、抗紅細(xì)胞氧化作用等。
[0005]蔣繼宏等對(duì)側(cè)柏葉、種皮及種子的揮發(fā)油進(jìn)行了抗人肺癌細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，結(jié)果表明側(cè)柏葉、種皮和種子的揮發(fā)油對(duì)肺癌細(xì)胞NC1-H 460有明顯抑制作用，抑制率分別為86.24%、47.80%和97.73% ;并且可從側(cè)柏葉揮發(fā)油中重結(jié)晶得到純度高達(dá)97.06%的雪松醇，其對(duì)人肺癌細(xì)胞NC1-H 460半致死濃度為44.98 μ g/mL (林業(yè)科學(xué)研究，2006，19 (3):311-315)。該論文與本發(fā)明所報(bào)道內(nèi)容差異較大，所用原料部位及目標(biāo)成分不同。
[0006]梁統(tǒng)等以二甲苯致炎小鼠耳片腫脹及角叉菜膠誘發(fā)大鼠足爪腫脹模型研究了側(cè)柏總黃酮的抗炎作用及機(jī)制，發(fā)現(xiàn)側(cè)柏總黃酮具有較強(qiáng)的抗炎作用，其對(duì)中性粒細(xì)胞花生四烯酸代謝產(chǎn)物白三烯B4 (LTB4)、5-羥廿碳四烯酸(5-HETE)生物合成及β -葡糖苷酸酶釋放具有抑制作用(中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2005，19(12): 1407-1410)。該論文主要關(guān)注側(cè)柏總黃酮的抗炎作用，與本
【發(fā)明內(nèi)容】
差異較大。
[0007]李園園等采用菌絲生長(zhǎng)速率法測(cè)定了側(cè)柏葉、小枝、球果和種子4個(gè)不同部位乙醇提取物對(duì)21種植物病原真菌的抑菌活性，其中側(cè)柏葉提取物的抑菌效果最好，對(duì)供試葡萄白腐病菌、葡萄黑痘病菌、番茄綿腐病菌和青霉病菌的EC5。分別為:5.424,3.186,8.913和19.000 g/L (西北植物學(xué)報(bào)，2008，28(5): 1056-1060)。該論文主要研究側(cè)柏不同部位(葉、枝、果和種子等)，活性重點(diǎn)為抑菌活性，不同于本
【發(fā)明內(nèi)容】
。
[0008]王連萍研究了側(cè)柏葉黃酮的提取和純化工藝，優(yōu)化得到的工藝條件為:以70%乙醇提取側(cè)柏葉黃酮，利用溶劑萃取法將側(cè)柏葉醇提取液分為4個(gè)部位，測(cè)定α -葡萄糖苷酶抑制活性，結(jié)果發(fā)現(xiàn)乙酸乙酯部位活性最高；并利用中低壓柱層析法對(duì)乙酸乙酯部位進(jìn)行成分分析，得到2個(gè)化合物即槲皮苷和穗花杉雙黃酮，測(cè)定α -葡萄糖苷酶抑制活性，結(jié)果顯示槲皮苷抑制作用不明顯，而穗花杉雙黃酮活性較高(吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)2012年碩士學(xué)位論文)。該論文與本發(fā)明所報(bào)道提取方法及純化方法不同，目標(biāo)化學(xué)成分亦不同。
[0009]專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)號(hào)為CN104069135Α的專(zhuān)利公開(kāi)了 “一種側(cè)柏葉總黃酮的提取工藝”，公開(kāi)日期為2014-10-01，申請(qǐng)人為南京澤朗醫(yī)藥科技有限公司。該專(zhuān)利發(fā)明一種勻漿-微波協(xié)同提取側(cè)柏葉總黃酮的方法，其特點(diǎn)是以勻漿法除去脂溶性物質(zhì)，再采用微波提取側(cè)柏葉總黃酮，該公開(kāi)專(zhuān)利與本發(fā)明所用提取方法不同，目標(biāo)化學(xué)成分亦不同，且未涉及降尿酸功效。
[0010]專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)號(hào)為CN201310102863.5的專(zhuān)利公開(kāi)了 “一種扁柏雙黃酮的制備方法”，公開(kāi)日期為2013-06-05，申請(qǐng)人為南京中醫(yī)藥大學(xué)。方法如下:取側(cè)柏葉，加入其質(zhì)量5-8倍量體積的石油醚加熱回流1~3小時(shí)，濾過(guò)，取濾渣加水后投入微波萃取裝置中進(jìn)行萃取、過(guò)濾、濃縮，通過(guò)大孔吸附樹(shù)脂吸附，水洗脫除雜，然后以60~80%乙醇洗脫，洗脫液減壓回收乙醇并濃縮，加到聚酰胺層析柱上，以比例為3:1的二氯甲烷甲醇混合溶劑作為洗脫劑洗脫，收集對(duì)應(yīng)于聚酰胺薄膜上Rf= 4-4.5的流份，回收溶劑，加入丙酮結(jié)晶，洗滌、干燥。該公開(kāi)專(zhuān)利與本發(fā)明所用提取方法不同，目標(biāo)化學(xué)成分亦不同，且未涉及降尿酸功效。
[0011]專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)號(hào)為CN201310360308.2的專(zhuān)利公開(kāi)了 “一種高從側(cè)柏葉中提取扁柏雙黃酮的方法”，公開(kāi)日期為2013-12-18，申請(qǐng)人為南京標(biāo)科生物科技有限公司。該發(fā)明公開(kāi)了一種從側(cè)柏葉中提取扁柏雙黃酮的方法:取側(cè)柏葉粉碎加入飽和石灰水浸泡提取，提取液用超濾膜超濾，透過(guò)液再用納濾膜濃縮；濃縮液調(diào)節(jié)PH至3~5后加入大孔樹(shù)脂柱吸附，乙醇溶液梯度洗脫，洗脫液濃縮調(diào)節(jié)pH3~5結(jié)晶；濾出結(jié)晶用50%~80%甲醇溶液溶解，濃縮至醇濃度至10°/『30%，加入大孔樹(shù)脂吸附，乙醇溶液梯度洗脫，洗脫液濃縮結(jié)晶，結(jié)晶物再用70%乙醇溶液重結(jié)晶、干燥。該公開(kāi)專(zhuān)利與本發(fā)明所用提取方法不同，目標(biāo)化學(xué)成分亦不同，且未涉及降尿酸功效。
[0012]專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)號(hào)為US 5773005的美國(guó)專(zhuān)利公開(kāi)了“一種從側(cè)柏中提取純化具有5 α -還原酶(5α -reductase)抑制活性的黃酮和二蔽的方法”，公開(kāi)日期為1998-06-30，申請(qǐng)人為T(mén)akahashi, Hidehiko等。方法如下:取側(cè)柏葉粉，按料液比1:5加入正己燒混合后加熱回流，過(guò)濾后真空濃縮；濾餅用初始原料2倍體積的60%乙醇溶解后過(guò)濾，將濾液真空濃縮得到組分A。正己烷萃取后的濾餅，加入5倍體積的60%乙醇，加熱回流然后過(guò)濾；取濾餅加入3倍體積的純凈水，加熱回流然后過(guò)濾；真空濃縮濾餅即得組分B，濾液回收濃縮即得組分C。因此，該公開(kāi)專(zhuān)利與本發(fā)明所用提取方法不同，目標(biāo)化學(xué)成分及功效功效。
[0013]專(zhuān)利申請(qǐng)公開(kāi)號(hào)為US 20100112107的美國(guó)專(zhuān)利公開(kāi)了“一種具有睡眠促進(jìn)作用的側(cè)柏提取物的制備方法”，公開(kāi)日期為2010-05-06，申請(qǐng)人為Xie，Xueji等。該專(zhuān)利發(fā)明了一種具有緩解生理睡眠障的側(cè)柏提取物及其組合物。該組合物還可以包括睡眠促進(jìn)功效的酸棗仁提取物、遠(yuǎn)志提取物或它們的混合物的至少一個(gè)?；钚缘脑u(píng)價(jià)方法為小鼠動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，研究巴比妥鈉催眠的睡眠時(shí)間誘發(fā)、對(duì)小鼠自由活動(dòng)的副作用、牽引試驗(yàn)以及斜板爬坡試驗(yàn)。因此，該公開(kāi)專(zhuān)利與本發(fā)明所用提取方法不同，目標(biāo)化學(xué)成分及功效亦不同。
[0014]綜上所述，目前關(guān)于以側(cè)柏葉為原料，依次經(jīng)過(guò)超高壓浸提、常壓高溫浸提、過(guò)濾濃縮、大孔吸附樹(shù)脂純化，并用分離純化后的側(cè)柏葉多酚進(jìn)行降尿酸活性的報(bào)道尚無(wú)。而本發(fā)明提供了一種具有降尿酸活性的側(cè)柏葉多酚的制備方法及其應(yīng)用，為側(cè)柏葉的深加工及其高效利用奠定了理論基礎(chǔ)和技術(shù)基礎(chǔ)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0015]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題在于對(duì)側(cè)柏葉中的多酚進(jìn)行有效提取和分離純化，并對(duì)分離純化后的側(cè)柏葉多酚的降尿酸活性進(jìn)行研究，提供一種具有降尿酸活性的側(cè)柏葉多酚及其制備方法和應(yīng)用。
[0016]本發(fā)明的具體技術(shù)方案如下。
[0017]一種具有降尿酸活性的側(cè)柏葉多酚的制備方法，以側(cè)柏葉為原料，經(jīng)過(guò)如下工藝制備:超高壓低溫浸提、常壓高溫浸提、過(guò)濾濃縮、大孔吸附樹(shù)脂純化后獲得。
[0018]進(jìn)一步地，所述制備方法具體包括以下步驟:
(1)將側(cè)柏葉于50-90 ° C下干燥3 ~ 6 h，然后用打粉機(jī)粉碎，得側(cè)柏葉粉末；
(2)將側(cè)柏葉粉末與溶劑按料液比混合攪拌均勻，進(jìn)行超高壓浸提，得浸提液，將浸提液離心，收集濾液，并將濾渣進(jìn)行常壓高溫浸提，再次離心，合并兩次浸提濾液；
(3)采用抽濾法或離心法去除不溶物，取濾液或上清液進(jìn)行真空旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮；
(4)利用大孔吸附樹(shù)脂純化步驟(4)濃縮后的粗提取液，洗脫溶劑為乙醇水溶液，以洗脫液中總酚含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，收集側(cè)柏葉多酚洗脫峰；
(5)對(duì)大孔吸附樹(shù)脂