最大，溶解性最好，故在步驟S3之前將所述膠原蛋白 溶液的PH值調(diào)節(jié)至4. 0~6. 0。
[0067] 為了延遲膠原蛋白溶液中微生物的生長或膠原蛋白溶液發(fā)生化學變化引起的腐 敗，向膠原蛋白溶液中加入醫(yī)用防腐劑溶液用以防治膠原蛋白溶液腐敗，優(yōu)選的，本發(fā)明實 施例所采用的醫(yī)用防腐劑溶液為苯氧乙醇，可以理解的是該苯氧乙醇只是本發(fā)明實施例的 一種可選實現(xiàn)方式，并不對向膠原蛋白溶液中加入醫(yī)用防腐劑溶液構成任何限制，在實際 操作中可以根據(jù)需要去選擇醫(yī)用防腐劑溶液。
[0068] 為了提高膠原蛋白敷料貼的保存時間，在對膠原蛋白溶液灌入無菌鋁箱袋中，封 口保存前需要嚴格無菌，在將用于附著所述膠原蛋白溶液的基質放入鋁箱袋后，可以對基 質進行滅菌處理。優(yōu)選的，所述滅菌方法包括：將所述基質經(jīng)過折疊后裝入鋁箱袋中并使用 C〇6。福照滅菌。
[0069] 為了使得膠原蛋白溶液更好的依附在所述基質上，優(yōu)選的，本發(fā)明實施例的基質 為無紡布，無紡布為一類織布的統(tǒng)稱，其材料可以是棉，蠶絲或者果纖維等，本發(fā)明對此不 進行限制，可以理解的，上述無紡布只是本發(fā)明實施例的一種可選方式，并不對本發(fā)明的膠 原蛋白溶液依附在基質上構成任何限制，例如，可以根據(jù)需要選擇不同的基質，只要能夠證 明其生物安全性，且能夠使膠原蛋白溶液更好的依附在基質上即可。
[0070] 具體的，本發(fā)明實施例的包含大分子膠原蛋白和小分子膠原蛋白的膠原蛋白可以 為新生奶牛牛皮中提取的大分子膠原蛋白。
[0071] 例如，一種可能實現(xiàn)的方式，從新生奶牛牛皮中提取的大分子膠原蛋白可以采用 酸法提取新生奶牛牛皮中I型膠原蛋白，采用酸法提取新生奶牛牛皮中I型膠原蛋白可以 具體采用以下步驟Al~A4 :
[0072] AU將新生奶牛牛皮解凍后剔除牛毛和皮下組織后，絞切成牛皮顆粒，按照中性清 洗液與牛皮顆粒體積重量比為2. 5向牛皮顆粒中加入中性清洗液，離心清洗牛皮顆粒3次， 收集牛皮顆粒沉淀；
[0073] 為了更好的去處牛皮中殘留的皮下組織使得最終獲取的膠原蛋白純度較高，本發(fā) 明的清洗溶液采用中性清洗溶液，本發(fā)明實施例對中性清洗液的配制不進行限制，只要能 夠更好的去除牛皮中殘留的皮下組織即可。
[0074] A2、按照牛皮顆粒沉淀與乙酸溶液質量體積比為1:15的比例向牛皮顆粒沉淀中 加入濃度為3%的乙酸溶液進行第一次抽提，并在2~6°C下靜置48~72h后，獲取上清液 一，將所述上清液一中加入與第一次抽提等量的濃度為3%乙酸溶液中，在2~6°C下靜置 48~72h后，收集上清液二，將上清液一和上清液二混合，獲取上清液；
[0075] 需要說明的是，為了提高從牛皮顆粒沉淀中抽提膠原蛋白的產(chǎn)率，對每一批包含 大分子膠原蛋白和小分子膠原蛋白的原料進行兩次抽提。
[0076] A3、向上清液中加入無機鹽至所述無機鹽溶液的濃度為5%，并將其在4±2°C條 件下放置24h，離心收集沉淀物一；按沉淀物一與緩沖液質量體積比為1:25~1 :30的比例 將抽提出的沉淀物一溶到緩沖液中，在2~6°C放置24h，使沉淀物一全部溶解，獲取原膠原 蛋白溶液；向原膠原蛋白溶液中加無機鹽至無機鹽溶液的濃度為I. 7mol/L，在2~6°C下放 置24h，離心收集上清液三；向所述上清液三中加無機鹽至無機鹽溶液的濃度為2. 5mol/L， 在2~6°C下放置24h，離心收集沉淀物二；
[0077] 為了獲取純度較高的膠原蛋白，本發(fā)明實施例采用無機鹽對上清液進行鹽析純 化，優(yōu)選的，本發(fā)明實施例的無機鹽采用氯化鈉。
[0078] 需要說明的是，為了提高從牛皮中獲取的膠原蛋白的純度，對抽提之后的上清液 采用至少三次鹽析純化進行鹽析獲取膠原蛋白。
[0079] A4、按質量體積比1:10的比例將沉淀物二加入0. 5%的乙酸溶液中，使沉淀物二 全部溶解，獲取膠原蛋白溶液；將膠原蛋白溶液經(jīng)過超濾系統(tǒng)進行8~12個洗濾體積等倍 透析后凍干即得膠原蛋白。
[0080] 本發(fā)明實施例中透析的目的是為了除去提取過程中的鹽或其他不需要的小分子， 從而使得最終獲取的膠原蛋白的純度較高。
[0081] 其中，等倍透析是指將YL的提取液進行透析，在透析過程中會加入YL透析液，在 透析完成后，所得溶液仍為YL。
[0082] 本發(fā)明實施例在超濾系統(tǒng)中采用等倍透析可使得膠原蛋白溶液可多次透析進一 步最終獲得的膠原蛋白的品質。
[0083] 本發(fā)明實施例的A4中將膠原蛋白溶液超濾后采用離心凍干技術，不僅保持了膠 原蛋白的活性，而且時間短，清液無雜質，提高了產(chǎn)品的純度，縮短了生產(chǎn)周期。
[0084] 進一步的，采用本發(fā)明實施例的酸法提取新生奶牛牛皮中I型膠原蛋白酸法充分 保留了膠原蛋白分子的完整三螺旋結構，從而使得所提取膠原蛋白具有良好的生理活性。 比如促進使用者自身皮膚中膠原蛋白的分泌、促進新皮膚生長等等，而完整的三螺旋結構 通常都體現(xiàn)在大分子中。
[0085] 例如，另一種可能實現(xiàn)的方式，從新生奶牛牛皮中提取的大分子膠原蛋白可以采 用酸酶結合法提取新生奶牛牛皮中I型膠原蛋白，采用酸酶結合法提取新生奶牛牛皮中I 型膠原蛋白可以具體采用以下步驟A5~A8 :
[0086] A5、將新生牛皮解凍清洗后剔除牛毛和皮下組織，絞切成牛皮顆粒，用質量分數(shù) 6%~15%碳酸鈉水溶液浸泡脫脂，按照脫脂后的牛皮顆粒與中性清洗液的體積重量比為 1:2. 5向脫脂后的牛皮顆粒中加入中性清洗液，離心清洗牛脫脂后的皮顆粒3次，收集牛皮 顆粒沉淀；
[0087] 為了更好的去處牛皮中殘留的皮下組織使得最終獲取的膠原蛋白純度較高，本發(fā) 明的清洗溶液采用中性清洗溶液，本發(fā)明實施例對中性清洗液的配制不進行限制，只要能 夠更好的去除牛皮中殘留的皮下組織即可。
[0088] A6、按照牛皮顆粒沉淀與乙酸溶液的質量體積比為1:20~1:40的比例向牛皮顆 粒沉淀中濃度為3 %的乙酸溶液，進行第一次抽提，以每克牛皮顆粒沉淀與胃蛋白酶的比例 為2000U~3000U向牛皮顆粒沉淀中加入胃蛋白酶，攪拌均勻后室溫條件下放置過夜，獲得 酶解液，將酶解液離心收集上清液一和沉淀一，并將沉淀一溶于與第一次抽提等量的3%乙 酸溶液中，在2~6°C條件下放置48~72h進行重復抽提，抽提結束后離心收集上清液二， 將上清液一和上清液二混合，獲得上清液；
[0089] A7、將上清液加入無機鹽至無機鹽溶液的濃度為5%，2~6°C條件下放置15~ 22h，離心收集膠原蛋白沉淀；按照質量體積比為1:25~1:30的比例將膠原蛋白沉淀溶解 到檸檬酸溶液中，2~6°C放置24h，使膠原蛋白沉淀全部溶解后透析2次，獲得透析液；向 透析液中加入無機鹽至無機鹽溶液的濃度為I. 7mol/L 2~6°C放置24h，離心收集上清液 三；向上清液三中加入無機鹽至無機鹽溶液的濃度為2. 5mol/L，2~6°C放置24h，離心收集 沉淀；
[0090] 為了獲取純度較高的膠原蛋白，本發(fā)明實施例采用無機鹽對上清液進行鹽析純 化，優(yōu)選的本發(fā)明實施例的無機鹽采用氯化鈉粉末。
[0091] 為了去除上清液中的雜質及沉淀，使得最終獲得的膠原蛋白產(chǎn)品純度較高，在向 上清液中加入無機鹽進行鹽析純化之前，本發(fā)明實施例的步驟A7之前，還包括：將上清液 過100目篩。
[0092] A8、按質量體積比1:10的比例將沉淀加入0. 1 %檸檬酸溶液，使沉淀全部溶解，得 到膠原蛋白溶液，將膠原蛋白溶液經(jīng)過超濾系統(tǒng)進行8~12個洗濾體積等倍透析后凍干即 可。
[0093] 本發(fā)明實施例的A8中將膠原蛋白溶液超濾后采用離心凍干技術，不僅保持了膠 原蛋白的活性，而且時間短，清液無雜質，提高了產(chǎn)品的純度，縮短了生產(chǎn)周期。
[0094] 采用本發(fā)明實施例的酸酶結合法提取的膠原蛋白經(jīng)胃蛋白酶去除了末端肽，進一 步降低了免疫原性，并較為完整的保留了膠原蛋白分子的三螺旋結構，從而使得所提取膠 原蛋白具有良好的活性。
[0095] 需要說明的是，以上兩種提取方法實施例只用于解釋部分原料（大分子膠原蛋白 和小分子膠原蛋白）的來源，可以是I型膠原蛋白或III型膠原蛋白，或I膠原蛋白和III型膠 原蛋白的混合物，當然也可以是其他類型的膠原蛋白，并不對本發(fā)明實施例的大分子膠原 蛋白和小分子膠原蛋白構成任何限制。
【具體實施方式】
[0096]
[0097] 以下實施例僅是為了具體說明本發(fā)明而提出的示例，本領域技術人員可以知道的 是本發(fā)明的范圍不受這些實施例限制。
[0098] 僅是示例性的，在所述實施例中，本發(fā)明的實施例大分子膠原蛋白和小分子膠原 蛋白可以采用酸法從新生奶牛牛皮中提取的I型膠原蛋白也可以采用酸酶結合法從新生 奶牛牛皮中提取的I型膠原蛋白。
[0099] 實施例1
[0100] 將包含大分子膠原蛋白和小分子膠原蛋白的膠原蛋白溶液按2mg/mL的濃度在 6°C于質量濃度為0. 1%的檸檬酸溶液中充分溶解8h，得到膠原蛋白初溶液；其中，所述大 分子膠原蛋白的分子量大于等于300KD，所述小分子膠原蛋白的分子量小于300KD ;
[0101] 向所述膠原蛋白初溶液中加入濃度為〇. 5%的苯氧乙醇，得到質量濃度為0. 5mg/ mL的膠原蛋白溶液，用lm〇L/L的NaOH溶液調(diào)節(jié)膠原蛋白溶液的PH至4. 0