br>[0109] 從上述表7的結(jié)果中可W知道，根據(jù)本發(fā)明的人參皂巧化4對(duì)酪氨酸酶的抑制率 比作為公知的酪氨酸酶抑制劑的抗壞血酸高很多，因此美白效果非常優(yōu)異。
[0110] [試驗(yàn)例7]利用B16/F10黑色素瘤細(xì)胞的黑色素生成抑制效果
[0111] 將分別W0. 1重量％的量含有人參皂巧化4及曲酸的試料作為試驗(yàn)物質(zhì)，并W- 定濃度添加到B16/F10黑色素瘤細(xì)胞（韓國細(xì)胞系銀行）的培養(yǎng)液中，并培養(yǎng)3天后，去除 培養(yǎng)液，然后用憐酸鹽緩沖液（PB巧清洗，并用IN化OH溶解細(xì)胞后，在405nm下測(cè)定吸光 度。將沒有添加試驗(yàn)物質(zhì)的細(xì)胞作為對(duì)照組，并與對(duì)照組中的黑色素含量進(jìn)行比較，并測(cè)定 各試驗(yàn)物質(zhì)對(duì)阻礙黑色素生成的程度。根據(jù)數(shù)學(xué)式4計(jì)算黑色素生成抑制率，并將其結(jié)果 表示在表8中。
[0112] 數(shù)學(xué)式4
[0113] 黑色素生成抑制率（％)= 100-(試驗(yàn)物質(zhì)的吸光度/對(duì)照組的吸光度X100)
[0114]表 8 [011引
[0116] 從上述表8的結(jié)果中可W知道，根據(jù)本發(fā)明的人參皂巧化4對(duì)黑色素生成的抑制 率比作為公知的黑色素生成抑制劑的曲酸高很多，因此美白效果非常優(yōu)異。
[0117][試驗(yàn)例引皮膚保濕力增加效果測(cè)定
[0118] 為了測(cè)定人參皂巧化4對(duì)皮膚保濕力增加產(chǎn)生的效果，利用了所述劑型例1及比 較劑型例1，并作出了如下評(píng)價(jià)。
[0119] 對(duì)于20名40至50歲年齡段的分類為干燥皮膚的成年男女，W每組10名分為兩 組，將劑型例1及比較劑型例1兩個(gè)組的營養(yǎng)霜W每天2次的頻率涂抹于臉部4周。涂抹 開始前、涂抹I周后、2周后、4周后時(shí)，W及在停止涂抹經(jīng)過2周（共經(jīng)過6周）之后，在恒 溫、恒濕條件（24°C，相對(duì)濕度40% )下，使用皮膚水分測(cè)試儀（CorneometerCM825，C+K電 子有限公司（C+KElectronicCo.),德國）測(cè)定皮膚水分量。其結(jié)果表示在下述表9中。 表9的結(jié)果是W試驗(yàn)開始之前測(cè)定的皮膚水分測(cè)試儀的值作為基準(zhǔn)，將處理一段時(shí)間之后 的測(cè)定值的增加部分W百分率表示的結(jié)果。
[0120]表 9
[0122] 從所述表9的結(jié)果中可W確認(rèn)，涂抹比較劑型例1時(shí)，直到經(jīng)過涂抹的4周為止， 顯示出約30%的水分增加率，但停止涂抹后皮膚水分量減少，相反，涂抹含有人參皂巧化4 的劑型例1時(shí)，停止涂抹后也顯示出30%W上的皮膚水分增加率。由此可W知道含有人參 皂巧化4的本發(fā)明的組合物的皮膚保濕力效果優(yōu)異。
[0123][試驗(yàn)例9]角質(zhì)形成細(xì)胞分化促進(jìn)效果測(cè)定
[0124] 如下所示，為了了解人參皂巧化4對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞分化的促進(jìn)效果，利用吸光度 來測(cè)定角質(zhì)形成細(xì)胞分化時(shí)生成的角化包膜（CornifiedEnvelope,CE)量。
[0125]首先，將從嬰兒的表皮分離后并進(jìn)行一次培養(yǎng)的人的角質(zhì)形成細(xì)胞放入培養(yǎng)用燒 瓶中，使其附著于底部后，在培養(yǎng)液中用5ppm的濃度人參皂巧化4處理之后，培養(yǎng)5日直到 細(xì)胞長到底部面積的70~80%為止。此時(shí)，將低巧化03mM)處理組和高巧（1. 2mM)處理 組分別作為陰性對(duì)照組和陽性對(duì)照組。然后獲取上述培養(yǎng)的細(xì)胞，用憐酸鹽緩沖鹽水洗涂 之后，加入Iml的含有2%十二烷基硫酸鋼（sodiumdode巧1sulfate,SD巧和20mM濃度的 二硫蘇糖醇值ithiot虹eitol，DTT)的IOmM濃度的S徑甲基氨基甲燒緩沖液燈ris-HCl， pH7. 4)，并進(jìn)行超聲處理（sonication)、煮沸化oiling)、離屯、分離，再將沉淀物放入Iml PBS中，進(jìn)行懸浮，并測(cè)定在340nm下的吸光度。另外，取出一部分所述超聲處理后的溶液， 測(cè)定蛋白質(zhì)含量，將其作為評(píng)價(jià)細(xì)胞分化程度的基準(zhǔn)。并將其結(jié)果表示在下述表10中。
[0126]表10
[0129]如上述表10所示，可W確認(rèn)用人參皂巧化4處理時(shí)，角質(zhì)形成細(xì)胞的分化促進(jìn)效 果優(yōu)異。
[0130][試驗(yàn)例10]皮膚屏障功能恢復(fù)效果測(cè)定
[0131] 為了測(cè)定人參皂巧化4對(duì)由于皮膚損傷而受損的皮膚屏障功能恢復(fù)產(chǎn)生的效果， 實(shí)施了下述實(shí)驗(yàn)。對(duì)于10名成人男女的上臂，用膠帶剝離（TapeStripping)的方法，損 傷皮膚屏障，分別涂抹按照下述表11的組成制備的劑型例2及比較劑型例2兩個(gè)組，用 Vapometer(海豚值elfin)，芬蘭），每天測(cè)定1次經(jīng)皮水分損失量（TWEL)的恢復(fù)程度，測(cè)定 屯天，并進(jìn)行了比較。運(yùn)里的比較劑型例2為陰性對(duì)照組的載體（vehicle)。將其實(shí)驗(yàn)結(jié)果 示于下述表12中。表12的結(jié)果是將屏障損傷前和屏障損傷后的處理前的差異作為100% 基準(zhǔn)進(jìn)行比較的結(jié)果。
[013引 表11
[0136] 從上述表12中可知，可W確認(rèn)當(dāng)使用不含有人參皂巧化4的比較劑型例2處理 時(shí)，隨著時(shí)間的推移，經(jīng)皮水分損失量逐漸增加，相反，當(dāng)使用含有人參皂巧化4的劑型例2 處理時(shí)，經(jīng)皮水分損失量W很快的速度恢復(fù)正常，且屏障損傷得到恢復(fù)。
[0137][試驗(yàn)例11]氣色改善效果
[0138] 為了評(píng)價(jià)根據(jù)本發(fā)明的化妝品組合物的促進(jìn)皮膚血液循環(huán)的效果，利用激光多普 勒血流成像儀(XaserDopplerPerfusionImager,LDPI)，測(cè)定皮膚中血液循環(huán)程度。已 知LDPI是測(cè)定皮膚中的血液循環(huán)的儀器，并且其為目前廣泛使用的儀器，是一種不僅可W 測(cè)定皮膚毛細(xì)血管中的血液的速度及量，而且可W測(cè)出小動(dòng)脈和小靜脈中的流動(dòng)的非常靈 敏的儀器。
[0139] 在恒溫恒濕室里，用香皂洗臉之后，適應(yīng)30分鐘，并利用LDPI測(cè)定了初期值。首 先，用LDPI對(duì)平時(shí)手腳冰涼的30名女性的額頭下方的初期血流量進(jìn)行了測(cè)定。然后，使試 驗(yàn)對(duì)象使用1周所述劑型例1及比較劑型例1之后測(cè)定血流量，然后將測(cè)定的血流量和所 述初期測(cè)定值進(jìn)行比較，并將其結(jié)果（皮膚血流量變化）表示在下述表13中。
[0140] 表13化妝品使用前后LDPI結(jié)果-皮膚血流量

陽14引從上述表13的結(jié)果中可W確認(rèn)，根據(jù)本發(fā)明的化妝品組合物與不含有人參皂巧 化4的比較劑型例1相比，使得皮膚血流量顯著增加，并通過運(yùn)種血液循環(huán)促進(jìn)而使氣色得 到改善。運(yùn)最終表明根據(jù)本發(fā)明的含有人參皂巧化4的化妝品組合物能夠?qū)τ行鬟f皮膚 營養(yǎng)成分，抑制并延緩皮膚老化做出貢獻(xiàn)。
[0143][試驗(yàn)例12]膚色改善效果
[0144] 為了了解所述劑型例1及比較劑型例1的膚色改善效果，使30名測(cè)試對(duì)象分別使 用（晚1次/日，共涂抹1周）之后，利用化CialStageDM-3(萊莉特（Moritex),日本） 儀器，評(píng)價(jià)膚色改善程度。采用皮膚的明度及色彩變化值，W及皮膚的明度及色彩測(cè)定值對(duì) 膚色改善率進(jìn)行了判斷，并將其結(jié)果表示在下述表14中。明度及色彩變化值越高表示膚色 得到改善。
[0145]表 14
[0147] 從表14的結(jié)果中可W確認(rèn)，不含有本發(fā)明的人參皂巧化4的比較劑型例1，未顯示 出顯著的膚色改善功效，相反，使用含有人參皂巧化4作為有效成分的劑型例1，與使用前 相比，使用后的膚色得到很大改善。
[0148][試驗(yàn)例13]毛孔收縮效果
[0149] 1.通過促進(jìn)膠原蛋白合成的收縮毛孔的效果
[0150] 將根據(jù)本發(fā)明的人參皂巧化4對(duì)膠原蛋白的合成的促進(jìn)效果與TGF-0進(jìn)行比較 并進(jìn)行了測(cè)定。首先，將成纖維細(xì)胞W每孔1〇5個(gè)細(xì)胞接種于24孔（well)中，并進(jìn)行培 養(yǎng)直至長到90%左右為止。將其用無血清細(xì)胞培養(yǎng)基值MEM)培養(yǎng)24小時(shí)之后，分別使用 lOng/ml的溶于無血清培養(yǎng)基中的本發(fā)明的人參皂巧化4和TGF-0進(jìn)行處理，并在C〇2培養(yǎng) 器中培養(yǎng)24小時(shí)。取出它們的上清液，并利用原骨膠原型（I)酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定巧LISA) 試劑盒（原骨膠原型（I)(procollagentype(I))，觀察原骨膠原（procollagen)的增減與 否，并將其結(jié)果示于下述表15中。對(duì)于膠原蛋白的合成能力，將非處理組設(shè)為100而進(jìn)行 了對(duì)比。
[0151]表 15

[0153] 從上述表15的結(jié)果中可W確認(rèn)，本發(fā)明的人參皂巧化4與陽性對(duì)照組TGF-e相 比，顯示出更高水平的優(yōu)異的膠原蛋白合成能力。因此，可W確認(rèn)本發(fā)明的人參皂巧化4通 過增加毛孔周邊的膠原蛋白生成量來收縮變寬的毛孔。
[0154] 2.毛孔收縮效果
[01巧]為了了解劑型例1及比較劑型例1的毛孔收縮效果，進(jìn)行如下評(píng)價(jià)。選出20名毛 孔大小寬的男女測(cè)試對(duì)象，按每組10名分成兩組，并按照組別在臉上每天涂抹劑型例1及 比較劑型例1的營養(yǎng)霜，共涂抹4周。毛孔收縮效果的判定按照W下方式實(shí)施。拍攝實(shí)驗(yàn) 前和4周后的照片，并讓專家通過肉眼進(jìn)行評(píng)價(jià)。其結(jié)果表示在下述表16中（評(píng)價(jià)等級(jí)： O-完全沒有收縮；5-收縮很多）。
[0156]表 16
[0158] 從上述表16的結(jié)果中可知，比較劑型例1沒有收縮毛孔的效果，然而劑型例1示 出能夠用肉眼確認(rèn)的毛孔收縮效果，從而可知本發(fā)明的人參皂巧化4對(duì)收縮毛孔大小的效 果優(yōu)異。
[0159][試驗(yàn)例M]皮脂分泌抑制效果
[0160] 1.通過抑制5a-還原酶活性的抑制皮膚分泌過多的效果
[0161] 為了確認(rèn)5a-還原酶活性抑制效果，在肥K293-5QR2細(xì)胞中測(cè)定了 [M口睪酬 轉(zhuǎn)化成[M口二氨睪酬值HT:dihy化otestosterone)的比率。在肥K293細(xì)胞上轉(zhuǎn)染p3x FLAG-CMV-5aR2之后，并按每孔2. 5XIO5個(gè)細(xì)胞的量接種于24孔板中，并進(jìn)行培養(yǎng)（Park etal. ,2003,JDS.Vol. 31，PP. 191-98)。第二天換成添加有酶底物和抑制劑的新培養(yǎng)基。 將0.05JiCi。4口睪酬（試劑盒（AmershamPharmaciabiotech,英國）用作培養(yǎng)基底物。
[0162] 為了確認(rèn)5a-還原酶活性抑制程度，加入人參皂巧化4，并在37 °C，5 %C〇2培 養(yǎng)器中培養(yǎng)2小時(shí)。此時(shí)，將沒有加入人參皂巧化4的用作陰性對(duì)照組，將加入非那雄胺 (finasteride)的用作陽性對(duì)照組。之后回收培養(yǎng)基，并用SOOiil乙酸乙醋提取類固醇 之后，分離上部的有機(jī)溶劑層，并驚干之后，對(duì)剩余的殘留物，再用50y1乙酸乙醋溶解，并 在娃塑料薄膜硅膠60F254(Silicaplasticsheetkieselgel60F254)上，使用乙酸乙 醋-己燒（1:1)作為溶劑來展開。
[0163] 將塑料試料在空氣中干燥之后，為了測(cè)定同位素的量而使用了淋浴系統(tǒng) (化全人;|全聲）。將干燥的塑料薄板和X射線薄膜一同加入到浴盒（排全引巧E:) 中，1周后測(cè)定留在薄膜上的睪酬和二氨睪酬的同位素量，然后根據(jù)下述數(shù)學(xué)式5及6,分別 算出轉(zhuǎn)化率及阻礙率，并將其結(jié)果表示在下述表17中。
[0164]數(shù)學(xué)式5
[016引轉(zhuǎn)化率（％)=DHT區(qū)域中的放射能/總放射能X100
[0166] 數(shù)學(xué)式6
[0167] 抑制率（％) =[對(duì)照組的轉(zhuǎn)化率-試驗(yàn)物質(zhì)的轉(zhuǎn)化率]/對(duì)照組的轉(zhuǎn)化率XlOO
[0168] 表 17
[0170] 從上述表17的結(jié)果中可W確認(rèn)，人參皂巧化4可W有效地抑制5 a-還原酶的活 性，從而阻斷睪酬轉(zhuǎn)化為二氨睪酬，并且顯示出了與已知的抑制5a-還原酶活性的非那雄 胺相比更加優(yōu)異的抑制效果。所述5a-還原酶使睪酬轉(zhuǎn)化為二氨睪酬，從而與細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的 受體蛋白結(jié)合而進(jìn)入核內(nèi)，從而活性化皮脂腺細(xì)胞并促進(jìn)分化，從而使皮脂腺內(nèi)的皮脂過 度分泌。因此，確認(rèn)了人參皂巧化4通過有效抑制5a-還原酶的活性來抑制皮脂的過多分 泌。
[0171] 2.皮脂分泌抑制效果
[0172] 為了了解所述劑型例1及比較劑型例1的皮脂分泌抑制效果，進(jìn)行了如下評(píng)價(jià)。 選出30名認(rèn)為皮脂分泌多的男女測(cè)試對(duì)象，在指定部位每天涂抹劑型例1及比較劑型例 1的營養(yǎng)霜，共涂抹4周。