對于皮脂減少效果的判定，通過使用皮脂量測試儀（Sebumeter SM810,C+K電子有限公司（C+KElectronicCo.)，德國）分別測定經(jīng)過2周及4周后的平 均皮脂減少率（％)，并將其結(jié)果表示在下述表18中。
[0173]表 18
[01巧]從上述表18的結(jié)果中可知，本發(fā)明的含有人參皂巧化4作為有效成分的劑型例1 與不含其的比較劑型例1相比，能有效地抑制過多分泌的皮脂。
[0176][劑型例3及比較劑型例3~4]
[0177] 根據(jù)下述表19中顯示的成分及含量（重量％ )來制備劑型例3及比較劑型例3~ 4,具體說明如下。劑型例3為混合人參皂巧化4的物質(zhì)，比較劑型例3為完全沒有包改善 含瘦瘡皮膚的有效成分的物質(zhì)，比較例4作為對于抗菌力的基準(zhǔn)的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，該物質(zhì)含有 多作為瘦瘡治療劑使用的紅霉素（e巧t虹omycin)。
[017引劑型例3及比較劑型例3~4的制備方法如下。將下述表19的A項(xiàng)的成分完全 溶解，并在其它的溶解槽中，完全溶解B項(xiàng)的成分，之后將B項(xiàng)添加到A項(xiàng)中，使其混合可溶 化。并且在其中，W根據(jù)表19中記載的混合比例，添加C項(xiàng)的成分，并混合均勻后，進(jìn)行過 濾，從而制備本組合物。
[0179]表 19
[0182][試驗(yàn)例1引對瘦瘡菌的抗菌力試驗(yàn)
[0183] 使用根據(jù)所述劑型例3及比較劑型例3~4的組成制備的各化妝品組合物，對作 為瘦瘡致病菌株的瘦瘡丙酸桿菌（ATCC6919 :培養(yǎng)基-腦屯、浸液肉湯培養(yǎng)基度HIbroth))) 進(jìn)行抗菌力試驗(yàn)。
[0184] 對瘦瘡菌的抗菌力試驗(yàn)方法如下。
[0185] (1)試驗(yàn)菌液的準(zhǔn)備
[0186] 使用將瘦瘡丙酸桿菌接種于腦屯、浸液肉湯培養(yǎng)基中進(jìn)行厭氧培養(yǎng)的培養(yǎng)液作為 試驗(yàn)菌液。
[0187] 0)稀釋溶液的準(zhǔn)備
[0188] 在15ml的腦屯、浸液肉湯培養(yǎng)基（P冊.8)或LB肉湯培養(yǎng)基（pH4. 5)中添加0. 15ml 的所述試驗(yàn)菌液，并將混合好的混合液作為稀釋溶液來使用。
[0189] (3)試料的準(zhǔn)備
[0190] 將從劑型例3及比較劑型例3~4中制備的化妝品組合物原液，直接作為樣品來 使用。
[0191] (4)抗菌力試驗(yàn)
[0192] 1)在96孔的細(xì)胞培養(yǎng)管巧6wellplate) 1號排中加入試料，使得與起始濃度匹 配，并加入總量為200y1的稀釋溶液。
[019引。將1號排的混合液混合均勻后，取出100y1的混合液而加入到2號排中，并 混合均勻后，再次取出100y1的混合液而加入到3號排中。通過運(yùn)種方式進(jìn)行二倍稀釋 (doubledilution)。
[0194] 3)在32°C下靜置培養(yǎng)24小時及48小時后，用懸浮程度判斷菌的是否進(jìn)行增值， 并將沒有菌的增殖的最小濃度定為最小抑制濃度（MinimumInhibitcxryConcentration,MIC)值。如果混合液不透明而難W判斷菌是否進(jìn)行增值，則通過顯微鏡觀察來確認(rèn)。
[0195] 對瘦瘡菌的抗菌力試驗(yàn)結(jié)果表示在下述表20中。對于最小抑制濃度，換算成劑型 中含有的有效成分的濃度而標(biāo)記。
[0196]表20
陽198] 在最小抑制濃度中，ppm濃度越小，可W認(rèn)為該物質(zhì)對瘦瘡菌的抗菌力有效，使用 劑型例3時，與使用為公知的瘦瘡治療劑的紅霉素的比較劑型例4相比，顯示出的ppm濃度 顯著低，從而可W確認(rèn)含有人參皂巧化4的組合物，對試驗(yàn)菌具有更優(yōu)異的抗菌力。
[0199][試驗(yàn)例16]脂質(zhì)合成化ipogenesis)抑制試驗(yàn)
[0200] 將作為小鼠的成纖維細(xì)胞系（fibroblastcellline)的3T3-L1細(xì)胞， WIXIO5細(xì)胞/孔貼附于盛有含10 %的牛胎兒血清（fetalBovineSerum,FB巧的 DMEM值U化ecco'Smodifiedeagle'Smedium,GIBCOB化，生活技術(shù)公司）培養(yǎng)基的 6 孔培養(yǎng)板（州1化replate)中。經(jīng)過2天后，重新更換新的DMEM(含有10%的FB巧培養(yǎng) 基，并培養(yǎng)2天。然后，用含有Iiig/ml膜島素（insulin)、0.5mM異下基甲基黃嚷嶺（IBM訝 及0.25]11]1地塞米松（(16皿1]161:11日3〇]16)的0161(含有10%的尸8巧，重新對所述培養(yǎng)的細(xì)胞 進(jìn)行分化誘導(dǎo)，并用50yM的人參皂巧化4及咖啡因處理，然后，經(jīng)過2天后，重新更換成包 含膜島素的DMEM，并培養(yǎng)5天。5天后，重新更換成正常培養(yǎng)基值MEM，含有10%的FB巧，并 對所述細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)至所述細(xì)胞從形態(tài)上變化成脂肪細(xì)胞。
[0201] 為了評價人參皂巧化4對抑制脂肪細(xì)胞內(nèi)脂肪積累的功效，利用所述完成分化的 3T3-L1脂肪細(xì)胞，實(shí)施蘇丹=染色（S4136,西格瑪奧德里奇）。在常溫下，在憐酸鹽緩沖液 中，用4%多聚甲醒（pH7. 2)固定脂肪細(xì)胞后，用憐酸鹽緩沖液進(jìn)行水洗，然后，用蘇丹=進(jìn) 行染色后拍攝照片，并通過肉眼進(jìn)行比較。將沒有添加試驗(yàn)物質(zhì)或比較物質(zhì)而僅使用培養(yǎng) 基的組作為對照組來使用，對于其它比較組，用50yM的咖啡因處理。脂肪積累抑制程度是 通過將染色的程度分成+++、++、+、-，從而賦予等級，此時，越接近+++，表示染色程度越大。 其結(jié)果表示在下述表21中。
[0202] 表 21

[0204] 如上述表21中所示，可W確認(rèn)本發(fā)明中使用的人參皂巧化4,不僅脂肪細(xì)胞內(nèi)積 累的脂肪量少，而且與作為公知的脂質(zhì)合成抑制物質(zhì)的咖啡因相比，還具有優(yōu)異的脂質(zhì)合 成抑制效果。因此，通過抑制脂質(zhì)合成來減少皮脂，從而能夠抑制瘦瘡的發(fā)生。
[0205][試驗(yàn)例17]瘦瘡改善和皮脂分泌減少及刺激的有無的試驗(yàn)
[020引將30名患有瘦瘡的人作為試驗(yàn)對象，W每組10名分為立組，并對對應(yīng)于各組的試 驗(yàn)對象使用用所述劑型例3及比較劑型例3~4來制備的化妝品組合物1個月。對于瘦瘡 改善標(biāo)準(zhǔn)，設(shè)成1分至5分，并標(biāo)記1分為"沒有"，3分為"普通"，5分為"非常好"。對于實(shí) 驗(yàn)結(jié)果，W10名的平均分?jǐn)?shù)標(biāo)記在下述表22中。
[0207] 對于瘦瘡消滅時期，W辨認(rèn)出消滅的天數(shù)作為基準(zhǔn)，對于瘦瘡復(fù)發(fā)，W 1個月后有 無復(fù)發(fā)作為基準(zhǔn)。對于皮脂分泌的減少，設(shè)成1分至5分，并標(biāo)記成1分為"沒有"，3分為 "普通"，5分為"非常好"。對于實(shí)驗(yàn)結(jié)果，W10名的平均分?jǐn)?shù)標(biāo)記在下述表22中。用（顯 示出刺激反應(yīng)的人數(shù)）/(總試驗(yàn)人數(shù)）判斷皮膚刺激的有無。
[020引 表22
[0211] 如上述表22中所示，可W知道劑型例3與比較劑型例3相比，瘦瘡沒有復(fù)發(fā)，并且 整體上對瘦瘡改善具有優(yōu)異的效果。另外，使用含有抗菌力標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的比較劑型例4時，雖 然顯示出瘦瘡改善效果，但是使用所述物質(zhì)，對皮膚的刺激強(qiáng)，因此不適合長期使用，然而， 根據(jù)本發(fā)明的組合物卻沒有刺激，因此顯示出適合長時間使用。
[0212] [試驗(yàn)例18]白細(xì)胞介素-8 (比-8)生成抑制效果
[0213] 進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的一天前，將皮膚角化上皮細(xì)胞（Normalhumanskinkeratinoc}fte， NHEK，購入處：Lonza)，W5XIO4細(xì)胞/孔，接種于96孔板中，然后在37°C，5 %CO2培養(yǎng) 箱（incubator)中培養(yǎng)24小時。24小時后，用憐酸鹽緩沖液清洗細(xì)胞2次，并更換成無 血清角化細(xì)胞基底培養(yǎng)基（serumfreekeratinoc}ftebasementmedia(邸M))。在各孔 中，用下述表23的濃度的人參皂巧化4進(jìn)行處理，并反應(yīng)30分鐘后，分別用金黃色葡萄 球菌膚聚糖（IOyg/ml)、金黃色葡萄球菌膚聚糖（50yg/ml)及金黃色葡萄球菌膚聚糖 (50]1旨/1]1；〇 +脂多糖（111旨/1]1；〇處理。其中，金黃色葡萄球菌膚聚糖脾54:9巧1:1(1〇旨17。曰]1 化omS.aureus)作為從葡萄球菌中提取的膚聚糖（P巧tidoglycan)，是革蘭氏陽性（+)菌 的細(xì)胞壁的主要組成成分，并且已知細(xì)菌的細(xì)胞膜成分會誘發(fā)炎癥。另外，脂多糖（LPS: Iypopolysaccaride)為革蘭氏陰性（-)菌的細(xì)胞膜的主要組成成分，并且已知脂多糖是炎 癥誘發(fā)的主要原因。
[0214] 在37 °C，5 % %培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時后，取出培養(yǎng)液對白細(xì)胞介 素-8 (Interle址in-8,比-8)進(jìn)行酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)巧LISA)，并將其結(jié)果表示在下述表23 中。對于化ISA，利用了制備公司度D科學(xué)）的實(shí)驗(yàn)方法。
[0215]表 23
[0217] 從上述表23中可W確認(rèn)，人參皂巧化4能夠顯著減少及抑制因PGSA和脂多糖LPS 而增加的白細(xì)胞介素-8的分泌。因此，可W知道本發(fā)明的皮膚外用劑組合物能夠顯著減少 因PGSA和LPS而增加的白細(xì)胞介素-8的分泌，從而能夠提供優(yōu)異的抗炎癥效果。
[021引[試驗(yàn)例19]痊癢緩解評價
[0219] 進(jìn)行實(shí)驗(yàn)的一天前，將角質(zhì)形成細(xì)胞（細(xì)胞系名稱出a化T，購入處：ATCC)，W 4XIO4細(xì)胞/孔，接種于96孔板中，然后在37°C，5%CO2培養(yǎng)箱（incubator)中培養(yǎng)24小 時。24小時后，用漢克斯的平衡鹽溶液（Hanks'BalancedSaltsolution,皿S巧緩沖液 清洗(washing)96孔板2次后，將反應(yīng)緩沖液（2iiMFluo-4-AM、20%普流尼克酸（pluronic acid)、2.5mM丙橫舒（probenecid))放入到細(xì)胞中。在37°C，5%C02培養(yǎng)箱中反應(yīng)30分 鐘，并在常溫下反應(yīng)30分鐘后，用皿SS緩沖液清洗2次，并用與下述表24相同濃度（％ ) 的人參皂巧化4來處理細(xì)胞。
[0220] 反應(yīng)10分鐘后，用2U/ml的膜蛋白酶（付ypsin)或5yM的PAR-2活性膚（SLIGKV) 進(jìn)行處理，并測定細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度變化80秒。對于細(xì)胞內(nèi)化2+濃度變化的測定，利用了酶標(biāo) 儀3 (FlexStation3 :分子器件（MolecularDevice)，美國）。用人參皂巧化4和2U/ml的膜 蛋白酶（付ypsin)或SyM的PAR-2活性膚（SLIGKV)處理之后，測定80秒的彎曲的ex)，并 求出得到的值的最小值和最大值的差值之后，將該值與用2U/ml膜蛋白酶或5iiM的PAR-2 活性膚（SLIGKV)處理時的最小值和最大值的差值進(jìn)行比較，對巧離子涌入細(xì)胞內(nèi)的抑制 率（％)表示在下述表24中。
[0221] 表 24
[0222]
[022引從上述表24中可W知道，因膜蛋白酶或PAR-2活性膚（SLIGKV)引起的巧離子向 細(xì)胞內(nèi)的涌入，隨著人參皂巧化4的處理而減少，并且可W確認(rèn)隨著提高人參皂巧化4的濃 度，巧離子向細(xì)胞內(nèi)的涌入顯著減少。
[0224] 因此，含有本發(fā)明的人參皂巧化4的皮膚外用劑組合物，通過有效抑制誘發(fā)痊癢 的PAR-2活性，從而能夠提供優(yōu)異的抗痊癢效果。
[0225][劑型例4及比較劑型例引
[0226] 用下述表25的組成來制備洗發(fā)水。具體地，將表面活性劑和乙二醇二硬脂酸醋添 加到精制水中，并加熱至80°C而使得其勻溶解后，在攬拌下漸漸冷卻至40°C，并且，在所述 混合物中加入根據(jù)本發(fā)明的有效成分和防腐劑、粘度調(diào)節(jié)劑、香料及毛發(fā)調(diào)節(jié)劑并混合后， 在攬拌下冷卻至常溫，從而制備洗發(fā)水。
[0227]表 25

[0232][試驗(yàn)例20]頭皮屑減少效果試驗(yàn)
[0233] 選定24名頭皮屑較多的19至35歲的男性，W每組12名分為兩組，并用W下方式 分別使用劑型例4及比較劑型例5的洗發(fā)水1個月后，測定頭皮屑減少率。
[0234] 試驗(yàn)開始前，通常用常規(guī)的洗發(fā)水清洗頭發(fā)，然后采集洗發(fā)后累積兩天的頭皮屑， 并將采集的頭皮屑的重量與分別用劑型例4及比較劑型例5的洗發(fā)水隔兩天洗一次頭發(fā)而 試驗(yàn)結(jié)束后累積兩天的頭皮屑的重量進(jìn)行比較而評價。此時，將累積