一種蠻龍液的制備方法及應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及中藥制劑技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種蠻龍液的制備方法及應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 蠻龍液記載于部頒標(biāo)準(zhǔn)，處方為雄蠶蛾25g、刺五加25g、酒制菟絲子17. 5g、淫羊 藿20g、鹽制熟地黃10g、鹽制補(bǔ)骨脂10g，以上六味，取雄蠶蛾加白酒適量，浸泡30天，浸液 減壓回收乙醇，制成流浸膏；其余刺五加等五味，加70%乙醇提取二次，第一次4小時(shí)，第二 次2小時(shí)，合并提取液，濾過(guò)，濾液回收乙醇至適量，加乙醇使含醇量為70%，靜置24小時(shí)， 濾過(guò)，沉淀用適量60 %乙醇洗滌，洗液與濾液合并，回收乙醇至無(wú)醇味，加蔗糖適量，使溶 解，與雄蠶蛾浸膏混合，加白酒及適量水調(diào)整總量至1000ml，混勻，即得?，F(xiàn)有技術(shù)中，尚未 有蠻龍液在提取制備方面采用微波技術(shù)的報(bào)道，而采用乙醇回流等方法，工藝粗糙、落后， 雜質(zhì)多，導(dǎo)致患者用量過(guò)大，不方便服用，嚴(yán)重影響了本品在臨床上應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 發(fā)明目的：為了解決上述問(wèn)題，本發(fā)明的目的在于提供一種蠻龍液的制備方法。
[0004] 本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提供一種蠻龍液在制備抑制小鼠黑色素瘤B16細(xì)胞增 殖藥物和治療或預(yù)防登革病毒感染藥物中的應(yīng)用。
[0005] 技術(shù)方案：本發(fā)明的目的是通過(guò)如下的方案實(shí)現(xiàn)的：
[0006] -種蠻龍液的制備方法，由雄蠶蛾25g、刺五加25g、酒制菟絲子17. 5g、淫羊藿 20g、鹽制熟地黃10g、鹽制補(bǔ)骨脂IOg作為原料藥制成，所述的方法由下列步驟組成：取雄 蠶蛾25g、刺五加25g、酒制菟絲子17. 5g、淫羊藿20g、鹽制熟地黃10g、鹽制補(bǔ)骨脂10g，粉 碎，加入2L的70 %乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率400-600W，萃取2 次，每次4-8分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5 倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮，加蔗糖、白酒及適量水調(diào)整總量至800ml，混勻，即 得。
[0007] 所述蠻龍液的制備方法，所述微波萃取功率500W，每次萃取6分鐘。
[0008] 所述蠻龍液在制備抑制小鼠黑色素瘤B16細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用，其特征在于蠻 龍液由雄蠶蛾25g、刺五加25g、酒制菟絲子17. 5g、淫羊藿20g、鹽制熟地黃10g、鹽制補(bǔ)骨 脂IOg作為原料藥制成，制備方法由下列步驟組成：取雄蠶蛾25g、刺五加25g、酒制菟絲子 17.5 8、淫羊藿2(^、鹽制熟地黃1(^、鹽制補(bǔ)骨脂1(^，粉碎，加入21的70%乙醇，投入微波 萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取功率400-600W，萃取2次，每次4-8分鐘，合并萃取液，濃縮， 加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃 縮，加蔗糖、白酒及適量水調(diào)整總量至800ml，混勻，即得。
[0009] 所述蠻龍液在制備抑制小鼠黑色素瘤B16細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用，所述微波萃取 功率500W，每次萃取6分鐘。
[0010] 所述蠻龍液在制備治療或預(yù)防登革病毒感染藥物中的應(yīng)用，蠻龍液由雄蠶蛾25g、 刺五加25g、酒制英絲子17. 5g、淫羊藿20g、鹽制熟地黃10g、鹽制補(bǔ)骨脂IOg作為原料藥制 成，制備方法由下列步驟組成：取雄蠶蛾25g、刺五加25g、酒制菟絲子17. 5g、淫羊藿20g、鹽 制熟地黃l〇g、鹽制補(bǔ)骨脂l〇g，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃 取，萃取功率400-600W，萃取2次，每次4-8分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹 脂柱上，50 %乙醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮，加蔗糖、白酒及適 量水調(diào)整總量至800ml，混勻，即得。
[0011] 所述蠻龍液在制備治療或預(yù)防登革病毒感染藥物中的應(yīng)用，所述微波萃取功率 500W，每次萃取6分鐘。
[0012] 上述中藥均符合藥典標(biāo)準(zhǔn)或者記載在《中藥大辭典》中。
[0013] 現(xiàn)有技術(shù)中，原蠻龍液，口服，一次30~40毫升，一日2次，采用本發(fā)明制備成的 蠻龍液?jiǎn)挝惑w積的蠻龍液中藥材量增加，因此每次僅需20ml，一日服用3次，在具有更多活 性成分的條件下大大減少了服用量。
【具體實(shí)施方式】
[0014] 以下通過(guò)實(shí)施例形式，對(duì)本發(fā)明的上述內(nèi)容再作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明，但不應(yīng)將此 理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實(shí)例，凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)均 屬于本發(fā)明的范圍。
[0015] 實(shí)施例1 :取雄蠶蛾25g、刺五加25g、酒制菟絲子17. 5g、淫羊藿20g、鹽制熟地黃 l〇g、鹽制補(bǔ)骨脂l〇g，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取 功率400W，萃取2次，每次4分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙 醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮，加蔗糖5g、白酒500ml及適量水調(diào) 整總量至800ml，混勻，即得。
[0016] 實(shí)施例2 :取雄蠶蛾25g、刺五加25g、酒制菟絲子17. 5g、淫羊藿20g、鹽制熟地黃 l〇g、鹽制補(bǔ)骨脂l〇g，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取 功率500W，萃取2次，每次6分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙 醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮，加蔗糖5g、白酒500ml及適量水調(diào) 整總量至800ml，混勻，即得。
[0017] 實(shí)施例3 :取雄蠶蛾25g、刺五加25g、酒制菟絲子17. 5g、淫羊藿20g、鹽制熟地黃 l〇g、鹽制補(bǔ)骨脂l〇g，粉碎，加入2L的70%乙醇，投入微波萃取裝置中進(jìn)行微波萃取，萃取 功率600W，萃取2次，每次8分鐘，合并萃取液，濃縮，加到DlOl大孔吸附樹脂柱上，50%乙 醇洗脫，收集5倍量柱體積洗脫液，減壓回收乙醇，濃縮，加蔗糖5g、白酒500ml及適量水調(diào) 整總量至800ml，混勻，即得。
[0018] 實(shí)施例4 :蠻龍液抑制小鼠黑色素瘤B16細(xì)胞增殖的實(shí)驗(yàn)研究資料
[0019] 1實(shí)驗(yàn)材料 [0020] 1. 1實(shí)驗(yàn)用細(xì)胞株
[0021] 小鼠黑色素瘤B16細(xì)胞，南京醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞庫(kù)，DMEM+10% FBS常規(guī)培養(yǎng)。
[0022] 1. 2實(shí)驗(yàn)藥物
[0023] 研究藥物：本發(fā)明蠻龍液：按實(shí)施例3方法制備。
[0024] 藥液儲(chǔ)液：取5ml蠻龍液，0. 2 ym濾器過(guò)濾，500 y I doff管分裝，-20°C存儲(chǔ)，同時(shí) 0. 2 ii m濾器過(guò)濾無(wú)水乙醇以備對(duì)照組之用。按衛(wèi)生部方法制備市售蠻龍液的對(duì)照組樣品。
[0025] 1. 3實(shí)驗(yàn)試劑
[0026] DMEM(GIBC0 公司Cat.No. 12100-061Lot.No. 758137);胎牛血清（浙江天 杭生物科技有限公司Lot.No. 100419) ;NaHC03 (上海久億化學(xué)試劑有限公司Cat. No.11810-033Lot.No. 1088387)Jrypsin(AMRESC0 公司批號(hào)：2010/04) ;EDTA(AMRESC0 公司批號(hào)：2009/10)!PenicillinGSodiumSalt(AMRESC0公司批號(hào)：2010242); Str印tomycinSulfate(AMRESC0公司批號(hào)：2010382);無(wú)水乙醇（南京化學(xué)試劑有限公司 批號(hào)：080310182) ;MTT(Biosharp批號(hào)：0793);PBS(實(shí)驗(yàn)室自配）；
[0027] 1. 4實(shí)驗(yàn)器材
[0028] 萊卡倒置顯微鏡（德國(guó)Leica型號(hào)：DMlL);可見-紫外光微孔板檢測(cè)儀（美國(guó)MD 公司型號(hào)：SPECTRAMAX 190) ;C02培養(yǎng)箱（FORMA型號(hào)：3111);超凈臺(tái)（蘇凈集團(tuán)安泰公 司制造型號(hào)：SW-CJ-ZFD);純水儀（美國(guó)Spring公司型號(hào)：S/N 020579);精密移液器（法 國(guó)吉爾森公司型號(hào)：P2);電子天平（德國(guó)賽多利斯有限公司型號(hào)：BT323S);全自動(dòng)高壓滅 菌鍋（日本SANYO公司型號(hào)：MLS-3020);臺(tái)式電熱鼓風(fēng)干燥箱（上海精密實(shí)驗(yàn)設(shè)備公司型 號(hào)：DHG9123A);冰箱（西門子公司型號(hào)：KG18V21TI);液氮罐（CBS型號(hào)：2001);低速離心 機(jī)（上海安亭科學(xué)儀器廠型號(hào)：KA-1000) ;0? 2ym濾器（MILLIP0RE型號(hào)：SLGP033RB) ;10cm 培養(yǎng)皿（NEST公司）、96孔培養(yǎng)板（NEST公司）；細(xì)胞計(jì)數(shù)板；離心管、移液管、Tips若干。
[0029] 2實(shí)驗(yàn)方法
[0030] 1)小鼠黑色素瘤B16細(xì)胞用DMEM+10% FBS于37°C、5%C02進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)（10cm 培養(yǎng)皿），當(dāng)細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期時(shí)，收集細(xì)胞，棄去培養(yǎng)液，PBS輕洗3遍，加入3ml0. 25 %胰 蛋白酶-0. 04% EDTA，37°C消化2min后，向其中加入5ml完全培養(yǎng)基中和反應(yīng)，吹打細(xì)胞后 將其轉(zhuǎn)入離心管中，1000 rpm離心5min，調(diào)整細(xì)胞懸液濃度3X 104個(gè)/ml。
[0031 ] 2)將細(xì)胞種入96孔培養(yǎng)板中，每孔加入細(xì)胞懸液180 y 1，培養(yǎng)板放入細(xì)胞培養(yǎng)箱 中（37°C，5% C02)常規(guī)培養(yǎng)。
[0032] 3)根據(jù)細(xì)胞生長(zhǎng)情況，一般長(zhǎng)至50% -70%，加入蠻龍液溶液或蒼耳子的對(duì)照組 樣品，繼續(xù)培養(yǎng)24h。
[0033]4) 24h后加入 20yI MTT 溶液（5mg/ml，即 0? 5 % MTT)，繼續(xù)培養(yǎng) 4h