兩周，并于給藥后 第7天、第14天，各稱取兩組小鼠體重1次。觀察期間，如有小鼠死亡，則立即進行剖檢，給 藥第14d，未死亡小鼠全部處死剖檢
[0063] 3試驗結(jié)果
[0064] 3. 1 -般狀態(tài)觀察
[0065] 對照組小鼠3次/日，灌胃給予蒸熘水10mL/kg，20只小鼠行為學(xué)觀察均正常，觀 察兩周，小鼠自主活動正常毛發(fā)光潤，無異常排泄物，攝食飲水均正常，小鼠無死亡。
[0066]本發(fā)明散劑水溶液組小鼠3次/日，灌胃散劑水溶液1.55g/ml，按體重10mL/kg給 藥，3只小鼠活動減少（一級），安靜。給藥24h后，小鼠行為活動恢復(fù)正常，無死亡。連續(xù) 觀察兩周，小鼠自主活動無明顯異常，各天然孔腔無異常分泌物，攝食飲水均正常，尿液糞 便正常，小鼠無死亡。
[0067] 3. 2 體重
[0068] 與對照組同性別小鼠體重相比，給藥前兩組同性別小鼠體重均基本一致，無明顯 差異（P>0. 05);給藥一周后兩組同性別小鼠體重，無明顯差異（P>0. 05);給藥兩周后兩組 同性別小鼠體重數(shù)值，無顯著性差異（P>〇. 05)。
[0069] 3. 3 剖檢
[0070] 觀察期間無小鼠死亡，根據(jù)實驗設(shè)計，觀察兩周后，處死所有小鼠，進行剖檢。解剖 后觀察小鼠外觀體征、主要臟器等，大體觀察基本一致，各動物天然孔腔、被毛及外觀體征 未見異常。主要臟器排列正常，無積液，無粘連，無異常分泌物，未見明顯異常。各組織臟器 肉眼觀察表面光滑，色質(zhì)正常，無明顯異常變化。
[0071] 4 結(jié)論
[0072] -般認(rèn)為最大耐受量相當(dāng)于人臨床日用劑量100倍以上而動物無死亡，無明顯毒 性反應(yīng)情況出現(xiàn)時，該藥是安全的。本發(fā)明散劑臨床擬用量為4. 65g/日，根據(jù)煎煮液小鼠 最大耐受量13. 95g生藥/kg計算，折算成臨床人的日生藥攝入量為93g/kg，此耐受量是本 發(fā)明散劑臨床擬用量的155倍。因此，可以肯定，本藥品臨床應(yīng)用是安全的。
[0073] 本發(fā)明大鼠長期毒性試驗
[0074] 二、實驗材料
[0075] 本藥物臨床使用為散劑，用藥后，藥物吸收以口腔黏膜吸收為主，消化道吸收為 輔，因此在動物臨床研究長期毒性試驗中，采用食物輔料添加方式，采用實施例1制備的散 劑1進行相關(guān)研究。
[0076] 1、受試藥物與配藥
[0077] 本發(fā)明中藥散劑與大鼠標(biāo)準(zhǔn)飼料共研粉末，加水成糊狀，用模具做成標(biāo)準(zhǔn)飼料大 小，因手工制作，統(tǒng)一規(guī)格，4g/cm，高劑量組含生藥2g/cm，中劑量組含生藥1. 5g/cm，低劑 量組含生藥lg/cm。
[0078] 2、實驗動物
[0079]Wistar大鼠，SPF級，220±20g，雌雄各半，由北京華英生物技術(shù)有限公司提供，動 物合格證號SCXK(京）2014-0031。購入后適應(yīng)性飼養(yǎng)一周，給與標(biāo)準(zhǔn)飼料，自由飲食飲水， 每日稱重飼料減少量，正常晝夜節(jié)律。
[0080] 3、實驗方法
[0081] 3.1分組與給藥途徑
[0082] Wistar大鼠，SPF級，40只，雌雄各半，按體重隨機分為對照組、實驗組，根據(jù)適應(yīng) 性飼養(yǎng)Wistar大鼠日進食量，得出平均值月10. 3g/100g，故本發(fā)明散劑高劑量組攝入量平 均為11. 33g/d，中劑量組攝入量平均為8. 4975g/d，劑量組攝入量平均為5. 665g/d。對照組 飼養(yǎng)正常飼料。各組大鼠自由飲水，正常晝夜節(jié)律，相同飼養(yǎng)環(huán)境。
[0083] 4、實驗結(jié)果
[0084]大鼠灌胃給予本發(fā)明散劑高劑量51. 5g/kg/d，（臨床成人擬用劑量85. 83倍）、 本發(fā)明散劑中劑量38. 625g/kg/d，（臨床成人擬用劑量64. 38倍）、本發(fā)明散劑低劑量 25. 75g/kg/d，（臨床成人擬用劑量42. 92倍），連續(xù)飼養(yǎng)6周后與對照組比較各項檢測指 標(biāo)，如一般狀態(tài)、體重、進食量、飲水量、二便、臟器系數(shù)和組織病理學(xué)等，未見明顯的毒性敏 感指標(biāo)和毒性靶器官；停藥觀察2周后，本發(fā)明散劑高、中、低劑量組大鼠各項檢測指標(biāo)均 屬正常，未見本發(fā)明散劑產(chǎn)生遲發(fā)性毒性反應(yīng)和蓄積性毒性反應(yīng)。試驗結(jié)果說明本發(fā)明散 劑長期應(yīng)用對大鼠無明顯毒副作用，臨床成人擬用劑量和療程處于安全范圍。
[0085] 實施例5本發(fā)明散劑的藥效學(xué)研究
[0086] 1實驗?zāi)康?br>[0087] 通過觀察本發(fā)明散劑對動物口腔潰瘍的改善情況，對小鼠口腔潰瘍的鎮(zhèn)痛作用， 來綜合探究其藥效學(xué)作用。
[0088] 2實驗材料
[0089]2. 1實驗動物
[0090] 清潔級雄性昆明小鼠，體重18~22g，50只，實驗動物由華英生物技術(shù)有限公司提 供，動物合格證號SCXK(京）2013-0135 ;SPF級，雄性，Wistar大鼠，39只，體重180~220g， 由北京華英生物技術(shù)有限公司提供，動物合格證號SCXK(京）2014-0031。各組小鼠、大鼠均 自由進食、飲水，正常照明環(huán)境、晝夜節(jié)律。
[0091]2. 2藥物
[0092] 2. 2. 1中藥方劑
[0093] 本發(fā)明實施例1散劑1制備的水溶液，用蒸餾水配制成水溶液，恒溫水浴加熱濃縮 至含生藥量〇. 119g/ml，4°C保存，備用。
[0094] 2. 2. 2其他試劑
[0095] 嗎啡注射液，規(guī)格：1ml:10mg，批號：090705-2,由東北制藥集團公司沈陽第一制 藥廠提供；
[0096] 地塞米松磷酸鈉注射液，規(guī)格：1ml:5mg，批號：10051611，由天津藥業(yè)焦作有限公 司提供。
[0097] 3實驗方法
[0098] 3. 1本發(fā)明散劑水溶液對實驗性大鼠口腔潰瘍模型的影響
[0099] 3. 1. 1造模方式
[0100] 將一小團棉花置于直徑為2mm的玻璃管的一端（棉球與端口平齊），將玻璃管的棉 球端放入100%的石炭酸中，使藥液浸透棉球。選取體重180~220g的SD大鼠60只，用乙 醚麻醉各大鼠，將玻璃管的棉球端置于大鼠口腔一側(cè)黏膜上燒灼40秒，造成實驗性口腔黏 膜潰瘍模型。
[0101] 3. 1.2 分組
[0102] 隨機將造模成功大鼠分成3組，每組13只，分別是模型對照組，陽性對照組，實驗 (本發(fā)明散劑水溶液）組苦味酸標(biāo)號，正常飲食、飲水，正常晝夜節(jié)律。
[0103] 3. 1.3給藥方式
[0104] 實驗組灌胃本發(fā)明散劑水溶液，模型對照組灌胃等量的生理鹽水，陽性對照組皮 下注射地塞米松磷酸鈉注射液，每天1次，連續(xù)給藥2天，給藥前及每次給藥后次日觀察潰 瘍面積大?。ㄒ詽冎睆接嫞┘皾冇锨闆r（無肉眼可見的潰瘍視為愈合），并進行潰瘍 程度評分。
[0105] 3. 1.4評價指標(biāo)
[0106] 潰瘍程度評分標(biāo)準(zhǔn)如下：
[0107] 潰瘍面無假膜，無紅暈，無水腫為0分；
[0108] 潰瘍面無明顯假膜，稍有紅暈，略帶白色，無水腫為1分，
[0109] 潰瘍面有薄層白色假膜，有紅暈，稍有水腫為2分；
[0110] 潰瘍面有薄層白色假膜，有紅暈，有水腫為3分；
[0111] 潰瘍面有稍厚的白色假膜，有紅暈，有水腫為4分。
[0112] 3. 1.5統(tǒng)計學(xué)處理
[0113] 應(yīng)用SPSS19. 0軟件包進行統(tǒng)計分析，計量資料以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差（又土s)表示， 結(jié)果采用完全隨機設(shè)計資料的方差分析方法進行，先進行方差齊性檢驗，方差齊時采用SNK 法進行均數(shù)間兩兩比較，方差不齊時用Dunnet'sC法進行均數(shù)間的兩兩比較，均P< 0. 05 認(rèn)為差異有顯著性，計數(shù)資料組間比較采用等級秩和檢驗。
[0114] 3. 1.6實驗結(jié)果
[0115] 由于表1，表2,可看出實驗組在給藥1天后能縮少潰病面積（P〈0. 01)，顯著降低潰 疬程度評分。表明其對實驗性大鼠的口腔潰瘍有一定的治療作用。
[0116] 表1實驗性大鼠口腔潰瘍面積的影響（n=13,又±s)
[0117]
[0118] 與模型對照組比較，*P〈0. 05, #P〈0. 01
[0119] 表2潰瘍愈合程度評分（n= 13，云土s)
[0120]
[0122] 與模型對照組比較，*P〈0. 05, **P〈0. 01
[0123] 3. 2本發(fā)明散劑水溶液鎮(zhèn)痛試驗的研究
[0124] 3. 2.1 分組
[0125]SPF級，雄性，KM小鼠，50只，體重18~22g，將鋁制槽置于（55±0. 5°C)恒溫水 浴中預(yù)熱lOmin，每次取小鼠1只，放入槽內(nèi)，記錄小鼠出現(xiàn)舔后足所需時間（秒/S)作為該 鼠痛閾值。凡舔足時間少于5s或大于30s或有跳躍逃避者，棄之不用。取合格小鼠30只， 隨機分為3組，每組10只，分別是空白對照組、陽性對照組（嗎啡注射液）、實驗（本發(fā)明散 劑水溶液）組。
[0126] 3. 2. 2方法一熱板法
[0127] 分組后開始給藥，實驗組灌胃本發(fā)明散劑水溶液，空白對照組灌胃給予等容積的 生理鹽水，每天1次，連續(xù)給藥3天。陽性對照組第3天皮下注射嗎啡注射液。末次給藥 lh、2h后，測量小鼠痛閾