r>[0081] 操作步驟如下：
[0082]
[0083] S0D活力計算公式為：
[0084]
[0085] 11、統(tǒng)計學方法。
[0086] 應用SPSS統(tǒng)計軟件對實驗數(shù)據(jù)進行分析，結(jié)果以均數(shù)土標準差（$ )表示，各 組之間差異性采用方差分析，組間比較采用LSD法，p〈0. 05表示有顯著性差異，p〈0. 01為極 顯著差異。
[0087]二、結(jié)果。
[0088] (一）行為學結(jié)果。
[0089] 各組大鼠造模中均未見肢體運動障礙和自殘現(xiàn)象。造模前測定各組間機械縮足反 射閾值及熱縮足反射潛伏期的基礎值差異無顯著性（P>〇. 05,F3,2S= 2. 15)。
[0090] 1、機械痛敏（MWT)測定結(jié)果。
[0091] 在給予糖尿病飲食4周后，糖尿病模型大鼠的機械縮足反射閾值開始降低，但與 對照組相比其降低無統(tǒng)計學意義（P>〇. 05,F3,2S= 2. 67);給予STZ腹腔注射后2周，糖尿 病模型大鼠的機械縮足反射閾值明顯降低，與對照組相比具有顯著性差異（P〈〇. 01，F(xiàn)3i2S= 21. 87);糖尿病模型大鼠給予長非編碼核糖核酸N0NRATT021972小干擾核糖核酸處理后， 機械縮足反射閾值明顯增加，與對照相比其差異無統(tǒng)計學意義（P>〇. 〇5，F(xiàn)M4= 1. 67)，而與 糖尿病模型組相比有顯著性差異（?〈〇.〇1，匕14= 13.54);而模型+亂序小干擾處理組的與 對照組之間相比有顯著性差異（P〈〇. 〇1，匕14= 15. 36)，但與糖尿病模型組相比其差異無統(tǒng) 計學意義（Ρ>〇· 05,Flil4= 2. 96)(見圖 1)。
[0092] 2、熱痛敏（TWL)測定結(jié)果。
[0093] 在給予糖尿病飲食4周后，糖尿病模型大鼠的熱縮足反射閾值開始降低，但與對 照組相比其降低無統(tǒng)計學意義（P>〇. 05,F3,2S= 1. 54);給以STZ腹腔注射后2周，糖尿病 模型大鼠組的熱縮足反射閾值明顯降低，與對照組相比具有顯著性差異（P〈〇. 01，F(xiàn)3i2S = 13. 32);糖尿病模型大鼠給予長非編碼核糖核酸N0NRATT021972小干擾核糖核酸處理后， 熱縮足反射閾值明顯增加，與對照組相比其差異無統(tǒng)計學意義（P>〇. 〇5，F(xiàn)M4= 2. 71)，與糖 尿病模型大鼠組相比有顯著性差異（p〈〇.〇l，F(xiàn)l，14= 12.36);而給以模型+亂序小干擾處理 組的與對照組之間相比有顯著性差異（P〈〇. 01，F(xiàn)U14= 10.. 76)，但與糖尿病模型組相比其 差異無統(tǒng)計學意義（P>〇. 05,Flil4= 2. 36)(見圖2)。
[0094](二）尾神經(jīng)感覺傳導速度結(jié)果。
[0095] 在給以糖尿病飲食4周后，糖尿病模型大鼠的尾神經(jīng)感覺傳導速度與對照組相比 無顯著性差異（P>〇.〇5,F3,2S= 1.89);給以STZ腹腔注射后2周，糖尿病模型大鼠的尾神 經(jīng)傳導速度明顯降低，與對照組相比具有顯著性差異（P〈〇. 01，F(xiàn)3,2S= 21.37);糖尿病模型 大鼠給予長非編碼核糖核酸N0NRATT021972RNA小干擾RNA處理后，尾神經(jīng)傳導速度與對 照相比其差異沒有統(tǒng)計學意義（P>〇. 05,匕14= 1.44)，與糖尿病模型組相比有顯著性差異 (p〈0. 01，匕14= 32. 56);而給以模型+亂序小干擾處理組的與對照組之間相比有顯著性差 異（p〈0. 01，F(xiàn)lil4= 26. 57)，但與糖尿病模型組相比其差異無統(tǒng)計學意義（p>0. 05,F1ι14= 1. 16)(見圖 3)。
[0096](三）逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈式反應（RT-PCR)。
[0097]RT-PCR檢測長非編碼核糖核酸N0NRATT021972表達。
[0098] 采用凝膠成像系統(tǒng)軟件分析長非編碼核糖核酸N0NRATT021972的RT-PCR結(jié)果表 明：糖尿病模型組背根神經(jīng)節(jié)（DRG)中長非編碼核糖核酸N0NRATT021972表達水平較對照 組明顯增加（P〈〇. 〇l，F(xiàn)lils= 34. 35)，糖尿病模型+長非編碼核糖核酸N0NRATT021972小干 擾核糖核酸組與對照組之間差異無統(tǒng)計學意義（P>〇. 05,匕18= 2. 98)，而與糖尿病模型組 之間差異有統(tǒng)計學意義（P〈〇. 01，F(xiàn)lils= 43. 21)。糖尿病模型+亂序小干擾處理組長非編 碼核糖核酸N0NRATT021972的表達高于對照組（p〈0. 01，F(xiàn)lils= 15. 71)，而與糖尿病模型組 之間無顯著性差異（P>〇. 05,Flils= 3. 28)(見圖4)。
[0099](四）酶聯(lián)免疫吸附劑測定（ELISA)檢測大鼠血清TNF-α。
[0100] 根據(jù)試劑盒標準品的濃度梯度：500pg/ml、250pg/ml、125pg/ml、62. 5pg/ml、 31.25pg/ml、15.625pg/ml、7.8125pg/ml的lg值和其測定的0D值作標準曲線作圖，由軟 件進行分析得出回歸方程式Y(jié)= 〇. 259Lg(X) - 0. 315,R2= 0. 962 (Y表示樣品TNF-a的 0D值，X表示樣品濃度），將Y值帶入，得出各組血清TNF-a:糖尿病模型組的TNF-a濃 度明顯比對照組增高（p〈〇. 01，F(xiàn)U14= 22.98);而糖尿病模型大鼠給予長非編碼核糖核酸 N0NRATT021972小干擾核糖核酸處理后，TNF-a濃度比糖尿病模型組明顯降低（p〈〇. 01， 14= 45. 34)，與對照組之間無顯著性差異（p>0. 05,F114= 2. 98);糖尿病模型+亂序小干 擾處理組的TNF-a濃度與糖尿病模型組之間無顯著差異（p>〇. 05^114= 2. 53)(見圖5)。
[0101] (五）氧化應激測定結(jié)果。
[0102] 1、過氧化氫酶活性測定結(jié)果。
[0103] 結(jié)果分析表明，糖尿病模型組過氧化氫酶的活性較對照組明顯降低，有統(tǒng)計學意 義（p〈0. 01，F(xiàn)lil4= 26. 76);糖尿病模型+長非編碼核糖核酸N0NRATT021972小干擾核糖核 酸組與糖尿病模型組之間差異有顯著性意義（P〈〇. 〇1，匕14= 13, 46)，而與對照組之間差異 無統(tǒng)計學意義（P>〇. 05,Flil4= 2. 97)，糖尿病模型+亂序小干擾處理組與糖尿病模型組相 比其差異無統(tǒng)計學意義（P>〇. 05,Flil4= 1. 84)(見圖6)。
[0104]2、超氧化物歧化酶活性測定結(jié)果。
[0105] 結(jié)果分析表明，糖尿病模型組和糖尿病模型+亂序小干擾處理組過超氧化物歧 化酶的活性較對照組明顯降低（P〈〇. 01，F(xiàn)U14= 57. 88)，糖尿病模型+長非編碼核糖核酸 N0NRATT021972小干擾核糖核酸組與糖尿病模型組之間差異有顯著性意義（p〈0. 01，F(xiàn)1i14= 21. 33)，而與對照組之間差異無統(tǒng)計學意義（p>0. 05^114= 3. 01)，糖尿病模型+亂序小干 擾處理組與糖尿病模型組相比其差異無統(tǒng)計學意義（p>〇. 05,匕14= 2. 66)(見圖7)。
[0106] 發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)在注射長非編碼核糖核酸N0NRATT021972的小干擾核糖核酸 后，2型糖尿病模型組DRG中長非編碼核糖核酸N0NRATT021972的表達降低，同時觀察 到在注射干擾試劑后糖尿病大鼠的機械痛和熱敏痛閾值升高，且尾神經(jīng)感覺傳導速度增 加，表明長非編碼核糖核酸N0NRATT021972小干擾RNA可對神經(jīng)組織長非編碼核糖核酸 N0NRATT021972功能異常及并發(fā)疾病產(chǎn)生作用，改善神經(jīng)的損傷現(xiàn)象。長非編碼核糖核酸 N0NRATT021972的小干擾核糖核酸處理后同時可下調(diào)降低糖尿病大鼠血清中細胞炎性因 子一腫瘤壞死因子（TNF-a)的含量，增加糖尿病大鼠血清中過氧化氫酶（CAT)和超氧化物 歧化酶（S0D)的活性。因此，長非編碼核糖核酸N0NRATT021972小干擾RNA具有對神經(jīng)組 織長非編碼核糖核酸N0NRATT021972功能異常及并發(fā)疾病的改善作用。
【主權項】
1. 長非編碼核糖核酸N0NRATT021972小干擾RNA在制備神經(jīng)組織N0NRATT021972功能 異常及相關疾病藥物中的應用。2. 長非編碼核糖核酸N0NRATT021972小干擾RNA以口服、注射、含片或其它局部或全身 用藥劑型藥物進行上述疾病的診斷、預防和治療。
【專利摘要】長非編碼核糖核酸NONRATT021972小干擾RNA在制備神經(jīng)組織NONRATT021972功能異常及相關疾病藥物中的應用。實驗觀察到長非編碼核糖核酸NONRATT021972小干擾核糖核酸可抑制2型糖尿病大鼠的痛覺行為反應，改變神經(jīng)傳導速度，降低糖尿病大鼠血清中細胞炎性因子—腫瘤壞死因子(TNF-α)的含量，增加糖尿病大鼠血清中過氧化氫酶(CAT)和超氧化物歧化酶(SOD)的活性。表明長非編碼核糖核酸NONRATT021972小干擾RNA在對神經(jīng)組織NONRATT021972功能異常及并發(fā)疾病中具有作用，可在其診斷、預防和治療的藥物、試劑、制劑中應用。
【IPC分類】A61K48/00, A61P25/00, A61K31/713
【公開號】CN105251018
【申請?zhí)枴緾N201510505334
【發(fā)明人】梁尚棟, 彭海英, 涂桂花, 李桂林, 劉雙梅, 徐宏, 高云, 徐昌水, 林加日, 虞詩誠, 樊波
【申請人】南昌大學
【公開日】2016年1月20日
【申請日】2015年8月17日