用于預(yù)防和/或治愈細(xì)菌性陰道病的包含乳酸菌的組合物的制作方法
【專利說(shuō)明】用于預(yù)防和/或治愈細(xì)菌性陰道病的包含乳酸菌的組合物
[0001] 本發(fā)明涉及陰道局部使用的包含乳酸桿菌的組合物。本發(fā)明的組合物可有效用于 預(yù)防和/或治愈陰道病原體（特別是陰道加德菌）和/或?qū)е录?xì)菌性陰道病的大腸菌群引 起的陰道感染，甚至復(fù)發(fā)或反復(fù)。
[0002] 已知的是，陰道微生物由各種大小和性質(zhì)的內(nèi)源性微生物群組成，其在生理上作 為定殖生態(tài)環(huán)境的共生物存活，并且因此根據(jù)定義形成了其生態(tài)系統(tǒng)。這樣的生態(tài)系統(tǒng)在 整體上由內(nèi)襯陰道和子宮的上皮細(xì)胞、向器官的內(nèi)腔中分泌的腺上皮細(xì)胞和復(fù)雜的菌群代 表，它們共生地相互作用以保持適當(dāng)?shù)纳頎顟B(tài)。這樣獲得的平衡條件支持以生理病理現(xiàn) 象交替的動(dòng)力學(xué)，其中，環(huán)境影響微生物群，微生物反過(guò)來(lái)通過(guò)主要上行的傳播影響細(xì)胞介 導(dǎo)的免疫防御的反應(yīng)性。陰道微生物群體是混合物并包括約50種細(xì)菌，既有需氧菌又有 厭氧菌。通常的95%的微生物組分是乳酸桿菌，其形成"陰道乳酸桿菌復(fù)合體（Doderlein complex) "的一部分，而剩余的5%包括共生菌和條件致病菌，其中有表皮鏈球菌屬、類白喉 菌、消化鏈球菌、擬桿菌屬、大腸桿菌、陰道加德菌和念珠菌屬。
[0003] 因此，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)分析和分子技術(shù)表明，屬于乳酸桿菌屬的菌株代表了最廣泛的組 分：這樣的微生物的濃度為約IXl〇9CFU/ml，比每克腸道內(nèi)容物中相同細(xì)菌組的濃度高約 100倍。乳酸桿菌的最具代表性的品種是嗜酸乳桿菌、發(fā)酵乳桿菌、植物乳桿菌、短乳桿菌、 簡(jiǎn)氏乳桿菌、干酪乳桿菌、纖維素乳桿菌、雷氏乳桿菌、德氏乳桿菌和唾液乳桿菌。
[0004] 關(guān)于陰道微生物一些研究表明，通常主要存在的乳酸桿菌在防止不需要的微生物 定殖中起到關(guān)鍵作用，在上述不需要的微生物中有導(dǎo)致細(xì)菌性陰道病、真菌感染、性傳播疾 病和泌尿道感染（UTI)的那些微生物。
[0005] 陰道壁細(xì)胞在維持這樣的平衡中具有主要作用，特別是上層和中層上皮細(xì)胞，其 增殖和成熟與激素相關(guān)。實(shí)際上雌激素水平影響陰道上皮細(xì)胞的糖原含量，并且后者的代 謝介導(dǎo)了有機(jī)酸的合成，將器官腔的pH降低至3. 5至4. 5的值。由于這個(gè)機(jī)制，外源病原 體的侵襲或通常以低量水平存在于陰道中的無(wú)害微生物的復(fù)制受到阻礙。在青春期前的受 試者中，陰道上皮的糖原含量低，且pH為約7。
[0006] 然而，由于不同的外源和內(nèi)源性因素，如抗生素?cái)z入、應(yīng)激條件、妊娠相關(guān)的激素 調(diào)節(jié)、月經(jīng)周期或攝入高濃度雌激素，這種復(fù)雜的已平衡生態(tài)系統(tǒng)經(jīng)常發(fā)生失衡。
[0007] 因此，需要有效干預(yù)以使陰道生態(tài)系統(tǒng)再平衡和均衡，從而避免微生物平衡的改 變，這種改變會(huì)導(dǎo)致不再受到"陰道乳酸桿菌復(fù)合體"作用阻礙的條件微生物的盛行，導(dǎo)致 其中有加徳菌和/或腸道菌的條件菌引起的陰道病或陰道炎。
[0008] 在絕經(jīng)后的婦女中，雌激素水平的下降導(dǎo)致陰道糖原濃度的降低，陰道pH值增加 并且厭氧菌成為主導(dǎo)，發(fā)生腸桿菌的顯著增殖。
[0009] 細(xì)菌性陰道病是育齡婦女中最常見(jiàn)的陰道感染，對(duì)于孕婦也常見(jiàn)。細(xì)菌性陰道病 代表所有陰道感染中的超過(guò)60%。國(guó)家衛(wèi)生統(tǒng)計(jì)中心一全國(guó)健康和營(yíng)養(yǎng)調(diào)查（NHANES) 在2001年至2004年對(duì)超過(guò)12000名美國(guó)婦女進(jìn)行的調(diào)查表明，細(xì)菌性陰道病的患病率為 29. 2%，但只有15. 7%有癥狀。相當(dāng)百分比的陰道病因此是無(wú)癥狀的，S卩，不會(huì)導(dǎo)致陰道炎 癥的典型癥狀，例如瘙癢、燒灼感和性活動(dòng)疼痛。它們中有許多不造成任何刺激、發(fā)紅或腫 脹，但在所有情況下它們都會(huì)導(dǎo)致陰道排出物增加，為白色或淺灰色的分泌物，其特點(diǎn)是難 聞的氣味。由于陰道排出物根據(jù)月經(jīng)周期階段有很大改變，女性往往無(wú)法發(fā)現(xiàn)正在發(fā)生的 感染，因此陰道病得不到診斷。陰道病不治療可導(dǎo)致更嚴(yán)重的陰道炎和感染的發(fā)生，主要是 在特別敏感的受試者中。此外，其可以幫助通過(guò)性行為傳播感染。
[0010] 因此，需要有效干預(yù)以預(yù)防和/或治愈陰道病的發(fā)作并因此預(yù)防和/或治愈陰道 炎和細(xì)菌感染的發(fā)作。
[0011] 細(xì)菌性陰道病的真正原因目前仍然是研究和調(diào)查的目標(biāo)。引起大多數(shù)病例的主要 病原是革蘭氏不定菌陰道加德菌（80% -85% )(是加徳菌屬的唯一已知物種）和革蘭氏陰 性菌大腸桿菌（10%-15%)。另外，致病菌大腸桿菌也引起需氧菌陰道病，需氧菌陰道病會(huì) 引起早產(chǎn)的風(fēng)險(xiǎn)。
[0012] 不過(guò)，細(xì)菌性陰道病的發(fā)生和與其他風(fēng)險(xiǎn)因素的同時(shí)相互作用有關(guān)。在最大的風(fēng) 險(xiǎn)因素中，例如可舉出不當(dāng)?shù)膫€(gè)人衛(wèi)生（例如，過(guò)度使用陰道沖洗液）、使用抗生素或子宮 內(nèi)機(jī)械避孕器具如避孕環(huán)、此前懷孕和一些遺傳傾向。
[0013] 細(xì)菌性陰道病的婦女有不正常的有著難聞氣味的陰道排出物?？赡艿呐懦鑫锿ǔ?是白色或灰色，并可具相當(dāng)流動(dòng)性。此外，受影響婦女排尿時(shí)有灼燒感和/或外陰部瘙癢。 然而，如前所述，相當(dāng)一部分受影響的婦女沒(méi)有任何癥狀。
[0014] 在大多數(shù)的情況下，細(xì)菌性陰道病不會(huì)引起任何嚴(yán)重的問(wèn)題。然而，需要考慮一些 相當(dāng)嚴(yán)重的潛在并發(fā)癥，例如，HIV感染的風(fēng)險(xiǎn)在暴露于該病毒的情況下增加，或感染其他 性傳播疾?。ㄆ渲杏猩称鞑《締渭儼捳睢⒁略w病和淋?。┑牟≡瓌┑娘L(fēng)險(xiǎn)增加。
[0015] 導(dǎo)致陰道病的細(xì)菌也可以感染子宮和輸卵管。這種感染名為盆腔炎性疾病，并可 導(dǎo)致不育癥或損害輸卵管，增加異位妊娠和不育的風(fēng)險(xiǎn)。
[0016] 已知的是，可以用具有抗生素活性的分子治療細(xì)菌性陰道病，其中甲硝唑或克林 霉素是非常普遍的具有抗生素活性的分子。二者都可以甚至在懷孕期間使用，但推薦的劑 量是不同的。盡管這些行為通常被認(rèn)為可有效治療急性感染，但它們往往不能提供顯著保 護(hù)以免于可能的復(fù)發(fā)，復(fù)發(fā)可能在治療結(jié)束后的不同時(shí)間發(fā)生。此外，目前可用的抗生素分 子仍然代表基于有機(jī)合成藥物的方法，因此，對(duì)于陰道的生理環(huán)境是明顯外源性的。
[0017] 因此，需要避免使用合成分子而相反地采用與陰道的生理環(huán)境相容的治療進(jìn)行有 效干預(yù)，以預(yù)防和/或治愈陰道病的發(fā)作、因此預(yù)防和/或治愈陰道炎和細(xì)菌感染。
[0018] 另外，需要在急性階段和可能的復(fù)發(fā)中具有天然有效的屏障作用，該作用隨時(shí)間 持續(xù)從而確保長(zhǎng)期保護(hù)和保證了長(zhǎng)期持續(xù)有效的預(yù)防和/或治愈。
[0019] 申請(qǐng)人在長(zhǎng)期深入研究之后，對(duì)上述需要給出了回答。事實(shí)上，申請(qǐng)人在測(cè)試和研 究多株乳酸桿菌后，基于其在定殖陰道粘膜并產(chǎn)生抑菌殺菌分子方面的特殊活性，成功地 只選擇其中的一些乳酸桿菌。所選菌株有效抗擊陰道加德菌并抗大腸桿菌，并同時(shí)具有抗 炎活性，因?yàn)樗鼈兪钱a(chǎn)生白介素10(IL-10)和白介素4(IL-4)的菌株。具有這些特殊性質(zhì) (抗大腸桿菌和抗炎性）的所選菌株可有效抗擊細(xì)菌性陰道病、陰道炎和相關(guān)感染。
[0020] 本發(fā)明的目的是一種用于預(yù)防和/或治愈細(xì)菌性陰道病、優(yōu)選復(fù)發(fā)或反復(fù)的陰道 病的組合物，其具有所附權(quán)利要求公開(kāi)的特征。
[0021 ] 本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式在以下詳細(xì)描述中給出。
[0022] 在本發(fā)明上下文中，組合物意味著包括藥物組合物、或補(bǔ)劑產(chǎn)品或醫(yī)療器械或食 品組合物。
[0023] 本發(fā)明的一個(gè)目的是屬于由ProbioticalS.p.A.公司于2013年1月3日在 DSMZ中心保藏并具有保藏編號(hào)DSM26955(LF15)的發(fā)酵乳桿菌物種的細(xì)菌菌株，和屬于 由ProbioticalS.p.A.公司于2013年1月3日在DSMZ中心保藏并具有保藏編號(hào)DSM 26956 (LF16)的發(fā)酵乳桿菌物種的細(xì)菌菌株，所述細(xì)菌菌株用于預(yù)防和/或治愈細(xì)菌性陰 道病、陰道炎和與致病性大腸菌群和/或加德菌相關(guān)的陰道感染，優(yōu)選用于治療復(fù)發(fā)或反 復(fù)陰道病。
[0024] 本發(fā)明的一個(gè)目的是一種包含細(xì)菌混合物的組合物，所述混合物包含具有對(duì)抗陰 道加德菌和大腸桿菌的特殊抗菌活性和刺激白介素IL-4和白介素IL-10產(chǎn)生的抗炎癥活 性的菌株或由其組成。
[0025] 本發(fā)明的一個(gè)目的是一種組合物，其中所述混合物包含至少具有對(duì)抗陰道加德菌 和大腸桿菌的菌株與至少抗大腸桿菌抗菌活性和刺激白介素IL-4和白介素IL-10產(chǎn)生的 抗炎癥活性的菌株的組合或由其組成。
[0026] 本發(fā)明的一個(gè)目的是一種組合物，所述組合物包含細(xì)菌混合物或由其組成，所述 細(xì)菌混合物包含以下菌株的組合或由其組成：選自包含植物乳桿菌菌株LMGP-21021-LP01 和植物乳桿菌菌株LMGP-21020-LP02的組的至少一種細(xì)菌菌株；以及選自包含菌株發(fā)酵 乳桿菌DSM26955 (LF15)和菌株發(fā)酵乳桿菌DSM26956 (LF16)的組的至少一種細(xì)菌菌株； 所述組合物用于預(yù)防和/或治愈細(xì)菌性陰道病、陰道炎和與大腸菌群病原體和/或加德菌 相關(guān)的陰道感染；優(yōu)選用于治療