藥物組合物在制備預(yù)治甲型流感病毒感染藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種藥物組合物在制備預(yù)防或治療甲型HlNl流 感病毒感染的藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 甲型HlNl流感病毒（Swine influenza virus, SIV)是A型流感病毒，屬于正粘病 毒科（Orthomyxoviridae)甲型流感病毒屬（InfluenzavirusA),攜帶有HlNl亞型豬流感 病毒毒株，包含有禽流感、豬流感和人流感三種流感病毒的核糖核酸基因片斷。通常，甲型 HlNl流感病毒存在種屬特異性，只感染豬，但有時(shí)人可能通過(guò)接觸受感染的生豬或接觸被 甲型HlNl流感病毒感染的環(huán)境，或通過(guò)與感染甲型HlNl流感病毒的人發(fā)生接觸而導(dǎo)致感 染甲型HlNl流感病毒。
[0003] 甲型HlNl流感是一種具有高度傳染性的急性呼吸道疾病，人感染甲型HlNl流感 后的癥狀與普通人流感相似，包括發(fā)熱、咳嗽、喉痛、身體疼痛、頭痛、發(fā)冷和疲勞等，有些還 會(huì)出現(xiàn)腹瀉和嘔吐，重者會(huì)繼發(fā)肺炎和呼吸衰竭，甚至死亡。2009年3月底起，墨西哥、美國(guó) 等地接連暴發(fā)甲型HlNl流感病毒疫情。隨后，疫情全球性蔓延，涉及到美洲、歐洲、亞洲、大 洋洲。2009年6月11日，WHO將甲型HlNl流感警戒級(jí)別提升至6級(jí)，意味著甲型HlNl流 感進(jìn)入全球大流行。我國(guó)于2009年4月31日將甲型HlNl流感納入《中華人民共和國(guó)傳染 病防治法》規(guī)定的乙類傳染病，人群對(duì)甲型HlNl流感病毒普遍易感。截至2010年2月28 日，全國(guó)31個(gè)省份累計(jì)報(bào)告甲型HlNl流感確診病例12. 7萬(wàn)例，死亡病例793例。
[0004] 目前防治甲型HlNl流感主要使用化學(xué)藥物，如：神經(jīng)氨酸酶抑制劑奧司他韋 (Oseltamivir，達(dá)菲），其通過(guò)抑制甲型HlNl流感病毒的神經(jīng)氨酸酶（NA)，從而改變流感 病毒在感染細(xì)胞的聚集和釋放。但該類藥物在臨床應(yīng)用中常常引起嚴(yán)重的不良反應(yīng)，文獻(xiàn) (藥物流行病學(xué)雜志-2008. 17(5). 280-280)報(bào)道日本厚生省自2001年2月批準(zhǔn)使用奧司 他韋以來(lái)，已收到該藥引起的藥品不良反應(yīng)超過(guò)1000例，其中128例為不常見(jiàn)的各種行為 異常；且已有8例死亡，其中5例是青年患者。利巴韋林是一種強(qiáng)效廣譜抗病毒藥物，目前 廣泛應(yīng)用于病毒性疾病的防治，臨床常用于流感病毒感染的治療。但是，臨床研究表明應(yīng)用 利巴韋林進(jìn)行治療時(shí)產(chǎn)生不良反應(yīng)復(fù)雜多樣，能夠累及神經(jīng)系統(tǒng)、血液系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、消 化系統(tǒng)、皮膚以及附件。
[0005] 另外，注射甲型HlNl流感疫苗可以預(yù)防甲型HlNl流感的發(fā)生，其主要針對(duì)的是可 能感染甲型流感的人群。由于我國(guó)人口基數(shù)較大，國(guó)內(nèi)疫苗生產(chǎn)能力有限，生產(chǎn)成本較高， 因此大量的疫苗儲(chǔ)備，大規(guī)模的疫苗接種并不適合我國(guó)國(guó)情。
[0006] 中藥是我國(guó)千百年來(lái)的醫(yī)藥瑰寶，其大多為天然物質(zhì)，相對(duì)于化學(xué)藥物而言，具有 不良反應(yīng)小，治療成本低等優(yōu)勢(shì)。目前，中藥用于防治或治療甲型HlNl病毒感染的效果已 經(jīng)被臨床所證實(shí)，如連花清瘟膠囊、金花清感方等，均具有一定的抗甲流病毒感染的作用， 對(duì)緩解奧司他韋等藥物供應(yīng)的緊張、避免引起抗藥性具有一定的積極作用，但現(xiàn)有的品種 仍然有限，難以應(yīng)對(duì)可能發(fā)生的大規(guī)模疫情的發(fā)生。一清膠囊是由漢代醫(yī)學(xué)名著《金匱要 略》中的"瀉心湯"發(fā)展而來(lái)，其配方由大黃、黃芩、黃連組成，功用為瀉火解毒、燥濕泄熱，主 治邪火內(nèi)熾，迫血妄行，吐血，衄血，便秘溲赤；三焦積熱，眼目赤腫，口舌生瘡，外證瘡瘍，心 胸?zé)?，大便秘緒；濕熱黃疸，胸中煩熱痞滿，舌苔黃膩，脈數(shù)實(shí)者。但是將一清膠囊用于預(yù) 防或治療甲型HlNl流感病毒感染的用途，目前尚未見(jiàn)報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的之一是提供一種由大黃、黃苳、黃連制成的藥物組合物在制備預(yù)防 或治療甲型HlNl流感病毒感染的藥物中的應(yīng)用，為甲型HlNl流感病毒感染的臨床治療提 供一種新的選擇。
[0008] 為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供以下的技術(shù)方案：
[0009] 本發(fā)明提供一種藥物組合物在制備預(yù)防和治療甲型HlNl流感病毒感染的藥物中 的應(yīng)用，所述藥物組合物的活性成分由以下原料藥制成：大黃、黃芩、黃連。
[0010] 其中，所述藥物組合物中原料藥的質(zhì)量配比為大黃10份、黃芩5份、黃連3. 3份。
[0011] 本發(fā)明還進(jìn)一步提供了含有該藥物組合物的藥物制劑，具體為該藥物組合物可與 藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑制成藥物制劑。所述藥物制劑優(yōu)選為湯劑、散劑、片劑、膠囊 劑、丸劑、口服液、顆粒劑、注射劑或栓劑。
[0012] 本發(fā)明進(jìn)一步提供所述藥物組合物的制備方法，取處方配比的大黃、黃芩、黃連， 分別加水煎煮兩次，第一次1. 5小時(shí)，第二次1小時(shí)，合并煎液，濾過(guò)，濾液分別減壓濃縮得 到濃縮液，其中黃芩濃縮液?jiǎn)为?dú)噴霧干燥，大黃和黃連的濃縮液合并噴霧干燥，即得藥物組 合物浸膏粉。
[0013] 本發(fā)明考察了藥物組合物對(duì)甲型HlNl流感病毒感染的治療作用。首先選取健康 小鼠，并采用甲型流感病毒鼠肺適應(yīng)株A/PR/8/34 (HlNl)進(jìn)行造模，考察不同劑量藥物組 合物對(duì)小鼠肺指數(shù)、肺指數(shù)抑制率及死亡率的影響，研究結(jié)果表明，藥物組合物高劑量組可 有效降低甲型HlNl流感病毒感染小鼠的肺臟指數(shù)，且可顯著降低小鼠感染病毒后7-9天的 死亡率，實(shí)驗(yàn)結(jié)果與模型組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說(shuō)明本發(fā)明藥物組合物具有明顯的抗甲 型HlNl流感病毒感染的作用。
【具體實(shí)施方式】
[0014] 以下結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一歩闡述。下面實(shí)施例僅作為對(duì)本發(fā)明進(jìn)一 步解釋，不能用來(lái)作為本發(fā)明的保護(hù)范圍的進(jìn)一步限制。
[0015] 實(shí)施例1藥物組合物對(duì)甲型HlNl流感病毒感染小鼠肺指數(shù)的影響
[0016] 1、實(shí)驗(yàn)材料
[0017] 藥物：藥物組合物（按照實(shí)施例7的方法制備，臨用前用1 %阿拉伯樹(shù)膠配成所需 濃度的混懸液備用）；利巴韋林片（四川美大康藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)為110305,規(guī)格為 〇. Ig/片，臨用前用純凈水配成所需濃度的藥液備用）；對(duì)照例A(按實(shí)施例3的方法制備）； 對(duì)照例B(按實(shí)施例4的方法制備，臨用前用1%阿拉伯樹(shù)膠配成所需濃度的混懸液備用）； 對(duì)照例C (按實(shí)施例5的方法制備，臨用前用1 %阿拉伯樹(shù)膠配成所需濃度的混懸液備用）； 對(duì)照例D (按實(shí)施例6的方法制備，臨用前用1 %阿拉伯樹(shù)膠配成所需濃度的混懸液備用）。 [0018] 病毒株：甲型流感病毒鼠肺適應(yīng)株A/PR/8/34 (HlNl)，由四川大學(xué)華西醫(yī)學(xué)中心 提供。于雞胚傳代兩次后收取尿囊液，血凝試驗(yàn)測(cè)定其滴度為I : 512,分裝并于-80°c保 存?zhèn)溆谩?br>[0019] 動(dòng)物：昆明種小鼠，體重為（20±2)g，購(gòu)自四川省中醫(yī)藥科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，飼 養(yǎng)于SPF級(jí)環(huán)境，合格證號(hào)SCXK (川）2008-19。
[0020] 試劑：脫脂綿羊血MH瓊脂培養(yǎng)平板，購(gòu)自鄭州安圖綠科生物工程有限公司，批號(hào) 20120917 ;胃黏液素（mucin)，購(gòu)自SIGMA-aldrich公司，批號(hào)1001234897 ;MH瓊脂培養(yǎng)基 (MH-A)，購(gòu)自O(shè)XOID公司，批號(hào)CM0337A ;MH營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基（MH-B)，購(gòu)自O(shè)XOID公司，批號(hào) 為 CM0405B。
[0021] 2、實(shí)驗(yàn)方法
[0022] 取體重為（20 ± 2) g的健康小鼠，雌雄兼用，適應(yīng)性飼養(yǎng)3d后，腹腔注射戊巴比妥 鈉67. 5mg · kg 1麻醉小鼠，麻醉后固定于手術(shù)臺(tái)上，使小鼠頭部向上并與水平呈45°角， 然后在其頸部正中做切口，分離氣管，向肺部方向氣管內(nèi)注入甲型流感病毒鼠肺適應(yīng)株A/ PR/8/34 (HlNl)病毒液（0. 05mL/只，濃度為30LD5。），注射完畢縫合手術(shù)切口并消毒。待小鼠 全部蘇醒后，按體重分層隨機(jī)分為模型組、藥物組合物高劑量組（給藥劑量為〇. 84g *kg ^、 藥物組合物中劑量組（給藥劑量為〇.42g· kg 1K藥物組合物低劑量組（給藥劑量為 0· 21g · kg ^ ;利巴韋林組（給藥劑量為0· 15g · kg ^，對(duì)照例A組（給藥劑量73ml · kg ^， 對(duì)照例B組（給藥劑量3. 4g · kg ^，對(duì)照例C組（給藥劑量1.0 Og · kg ^，對(duì)照例D組（給 藥劑量0. 98g · kg ^，并另設(shè)正常對(duì)照組。分組后立即開(kāi)始灌胃給藥，每天1次，連續(xù)給藥 5d，對(duì)照組和模型組給予等量的純凈水。
[0023] 3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0024] 按照上述實(shí)驗(yàn)方法分組和給藥，末次給藥前禁食不禁水8h，并