在末次給藥后2h， 頸椎脫白處死后稱體重，剖取全肺，在盛有蒸餾水的平皿中洗2次，摘除氣管、肺門淋巴結(jié) 等組織，吸水紙拭干后稱肺臟質(zhì)量（g)，計(jì)算肺指數(shù)（g/l〇〇g體重）及肺指數(shù)抑制率（％ ) 實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1。
[0027] 表1藥物組合物對(duì)甲型HlNl流感病毒感染小鼠肺指數(shù)、肺指數(shù)抑制率的影響 (Jf is)
[0028]
[0029] 注：與模型組比較，*Ρ〈0· 05,林Ρ〈0· 01。
[0030] 由表1可知，與正常對(duì)照組比較，小鼠在氣管注射病毒后，模型組肺指數(shù)顯著增高 (Ρ〈0. 01)，與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。與模型組比較，藥物組合物高劑量組（0. 84g *kg ^ 和利巴韋林（O.Kg^kg1)均可顯著降低病毒感染小鼠的肺臟指數(shù)（P〈0.05)，二者效果相 當(dāng)，且與模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；藥物組合物中、低劑量組也具有一定的降低病毒感染小 鼠的肺臟指數(shù)的作用，但與模型組相比不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。在與本發(fā)明藥物組合物高劑量 組等同的生藥劑量下給藥，對(duì)照例A、B、C、D均組具有降低病毒感染小鼠肺指數(shù)的趨勢(shì)，但 效果較弱，與模型組相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。上表結(jié)果說明本發(fā)明藥物組合物可顯著降低甲型 HlNl流感病毒感染小鼠的肺臟指數(shù)，具有體內(nèi)抗甲型HlNl流感病毒感染的作用，且在等同 生藥劑量條件下，效果明顯優(yōu)于對(duì)照例A、B、C、D組。
[0031] 實(shí)施例2藥物組合物對(duì)甲型HlNl流感病毒感染小鼠死亡率的影響
[0032] 1、實(shí)驗(yàn)材料
[0033] 藥物：藥物組合物（按照實(shí)施例7的制備方法制備，臨用前用1 %阿拉伯樹膠配成 所需濃度的混懸液備用）；利巴韋林片（四川美大康藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)為110305,規(guī) 格為〇. Ig/片，臨用前用純凈水配成所需濃度的藥液備用）；
[0034] 病毒株：甲型流感病毒鼠肺適應(yīng)株A/PR/8/34 (HlNl)，由四川大學(xué)華西醫(yī)學(xué)中心 提供。于雞胚傳代兩次后收取尿囊液，血凝試驗(yàn)測(cè)定其滴度為1 : 512,分裝并于-80°C保 存?zhèn)溆谩?br>[0035] 動(dòng)物：昆明種小鼠，體重為（20±2)g，購自四川省中醫(yī)藥科學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，飼 養(yǎng)于SPF級(jí)環(huán)境，合格證號(hào)SCXK (川）2008-19。
[0036] 試劑：脫脂綿羊血MH瓊脂培養(yǎng)平板，購自鄭州安圖綠科生物工程有限公司，批號(hào) 20120917 ;胃黏液素（mucin)，購自SIGMA-aldrich公司，批號(hào)1001234897 ;MH瓊脂培養(yǎng)基 (MH-A)，購自O(shè)XOID公司，批號(hào)CM0337A ;MH營(yíng)養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基（MH-B)，購自O(shè)XOID公司，批號(hào) 為 CM0405B。
[0037] 2、實(shí)驗(yàn)方法
[0038] 取體重為（20 ± 2) g的健康小鼠，雌雄兼用，適應(yīng)性飼養(yǎng)3d后，腹腔注射戊巴比妥 鈉67. 5mg · kg 1麻醉小鼠，麻醉后固定于手術(shù)臺(tái)上，使小鼠頭部向上并與水平呈45°角， 然后在其頸部正中做切口，分離氣管，向肺部方向氣管內(nèi)注入甲型流感病毒鼠肺適應(yīng)株A/ PR/8/34 (HlNl)病毒液（0. 05mL/只，濃度為30LD5。），注射完畢縫合手術(shù)切口并消毒。待小鼠 全部蘇醒后，按體重分層隨機(jī)分為模型組、藥物組合物高劑量組（給藥劑量為〇. 84g *kg ^、 藥物組合物中劑量組（給藥劑量為〇.42g· kg 1K藥物組合物低劑量組（給藥劑量為 OJlg^kg1);利巴韋林組（給藥劑量為O.Kg^kg1)，并另設(shè)正常對(duì)照組。分組后立即開 始灌胃給藥，每天1次，連續(xù)給藥5d，對(duì)照組和模型組給予等量的純凈水。
[0039] 3、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0040] 按上述分組和給藥，觀察動(dòng)物感染后發(fā)病癥狀，每3d稱重1次，并逐日記錄感染后 14d內(nèi)各組小鼠死亡數(shù)，采用卡方檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)每3d內(nèi)各組小鼠的累積死亡率（％)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果 見表2 :
[0041] 表2藥物組合物對(duì)甲型HlNl流感病毒感染小鼠死亡率的影響
[0044] 注：與模型組比較，*Ρ〈0· 05,林Ρ〈0· 01。
[0045] 由表2可知，小鼠在感染病毒后逐漸出現(xiàn)死亡，在感染后14d內(nèi)約有90%的動(dòng)物發(fā) 生死亡，利巴韋林能明顯降低病毒感染小鼠的死亡率（P〈〇. 01);藥物組合物高劑量組可顯 著降低小鼠感染病毒后7~9d內(nèi)的死亡率（P〈0. 01)，與模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。實(shí)驗(yàn)說 明本發(fā)明藥物組合物具有明顯的抗甲型HlNl流感病毒感染的作用。
[0046] 實(shí)施例3
[0047] 取大黃6g，黃連10g，黃芩14g洗凈后放入陶制或搪瓷容器內(nèi)，加水1000 g用干凈 草紙蓋住，用火煮沸后再小火煮至原有水量的三分之一，過濾，將濾液冷卻后待用。
[0048] 實(shí)施例4
[0049] 取大黃21g，黃連25g，黃芩40g洗凈后，加水1000 ml煎煮至原有水量的三分之一， 過濾，將濾液濃縮成糊狀，摻入淀粉拌和均勻，干燥后制成不規(guī)則細(xì)顆粒，滅菌后待用。
[0050] 實(shí)施例5
[0051] 取黃連100g，大黃60g，黃芩140g三味，分別加水煎煮兩次，第一次1. 5小時(shí)，第二 次1小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液分別減壓濃縮得到濃縮液，其中黃芩濃縮液?jiǎn)为?dú)噴霧干燥， 大黃和黃連的濃縮液合并噴霧干燥，即得藥物組合物浸膏粉41. 2g。
[0052] 實(shí)施例6
[0053] 取黃連125g，大黃105g，黃芩200g三味，分別加水煎煮兩次，第一次1. 5小時(shí)，第 二次1小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液分別減壓濃縮得到濃縮液，其中黃芩濃縮液?jiǎn)为?dú)噴霧干 燥，大黃和黃連的濃縮液合并噴霧干燥，即得藥物組合物浸膏粉57. 8g。
[0054] 實(shí)施例7藥物組合物的制備
[0055] 取黃連660g，大黃2000g，黃芩1000 g三味，分別加水煎煮兩次，第一次1. 5小時(shí)， 第二次1小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液分別減壓濃縮得到濃縮液，其中黃芩濃縮液?jiǎn)为?dú)噴霧 干燥，大黃和黃連的濃縮液合并噴霧干燥，即得藥物組合物浸膏粉約420. 0g。
[0056] 實(shí)施例8藥物組合物膠囊劑的制備
[0057] 將實(shí)施例3制得的藥物組合物浸膏粉制顆粒，干燥，粉碎，加入淀粉、滑石粉和硬 脂酸鎂適量，混勻，裝入膠囊，制成1 〇〇〇粒，即得。
[0058] 實(shí)施例9藥物組合物片劑的制備
[0059] 將實(shí)施例3制得的藥物組合物浸膏粉制顆粒，干燥，粉碎，加入淀粉、滑石粉和硬 脂酸鎂適量，混勻，制成1000片，即得。
[0060] 實(shí)施例10藥物組合物顆粒劑的制備
[0061] 將實(shí)施例3制得的藥物組合物浸膏粉加入適量蔗糖和糊精，混勻，制成顆粒，干 燥，分裝成500袋，即得。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種藥物組合物在制備預(yù)防和治療甲型H1N1流感病毒感染的藥物中的應(yīng)用，其特 征在于所述藥物組合物的活性成分由以下原料藥制成：大黃、黃芩、黃連。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于所述藥物組合物中原料藥的質(zhì)量配比為大 黃10份、黃芩5份、黃連3. 3份。3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其特征在于所述藥物組合物可與藥學(xué)上可接受的 載體或賦形劑制成藥物制劑。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于所述藥物制劑為湯劑、散劑、片劑、膠囊劑、 丸劑、口服液、顆粒劑、注射劑或栓劑。5. 根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的應(yīng)用，其特征在于所述藥物組合物的制備方法 為：取處方配比的大黃、黃苳、黃連，分別加水煎煮兩次，第一次1. 5小時(shí)，第二次1小時(shí)，合 并煎液，濾過，濾液分別減壓濃縮得到濃縮液，其中黃芩濃縮液?jiǎn)为?dú)噴霧干燥，大黃和黃連 的濃縮液合并噴霧干燥，即得藥物組合物浸膏粉。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種藥物組合物在制備預(yù)防和治療甲型H1N1流感病毒感染的藥物中的應(yīng)用，所述藥物組合物的活性成分由以下原料藥制成：大黃、黃芩、黃連。本發(fā)明還提供了由該藥物組合物與藥學(xué)上可接受的載體或賦形劑制成的藥物制劑。該藥物組合物可有效降低甲型H1N1流感病毒感染小鼠的肺臟指數(shù)，且可顯著降低小鼠感染病毒后7-9天的死亡率，實(shí)驗(yàn)結(jié)果與模型組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，說明本發(fā)明藥物組合物具有明顯的抗甲型H1N1流感病毒感染的作用。
【IPC分類】A61P31/16, A61K36/718
【公開號(hào)】CN105267325
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410230719
【發(fā)明人】柯瀟, 鄭強(qiáng), 徐雄良
【申請(qǐng)人】成都康弘制藥有限公司
【公開日】2016年1月27日
【申請(qǐng)日】2014年5月28日