)培養(yǎng)基培養(yǎng)活化 后，按照10~15mL/T的接種量，用壓差法無菌接種到發(fā)酵罐，在pH5. 2~5. 6,溫度30°C~ 33°C，攪拌轉(zhuǎn)速150r/min條件下發(fā)酵20~24小時，獲得發(fā)酵液；將斜面保存的地衣芽孢桿 菌XDM - 0968經(jīng)菌種活化和逐級擴大培養(yǎng)獲得液體種子；將液體種子以6-8%接種量接入 發(fā)酵罐，起始pH為7. 0,培養(yǎng)溫度36-38°C，攪拌速度130-180r/m，培養(yǎng)時間10-15h ;然后 以1-2°C /h降溫速率緩慢降溫至25-30°C，恒溫培養(yǎng)S-IOh ;繼續(xù)以1-2°C /h降溫速率緩慢 降溫至15-20°C，此時，將液體種子以1-2%接種量追加接入發(fā)酵罐，恒溫培養(yǎng)S-IOh ;再以 1-2°C /h升溫速率緩慢升溫至25-30°C，恒溫培養(yǎng)6-8h ;繼續(xù)以1-2°C /h升溫速率緩慢升 溫至36-38Γ，恒溫培養(yǎng)8-10h，獲得發(fā)酵液；上述接種量單位為：質(zhì)量百分比；
[0024] 步驟二：將地衣芽孢桿菌DE發(fā)酵液分別用膜設(shè)備和離心設(shè)備進行濃縮后，以濃縮 后發(fā)酵液質(zhì)量計加6%~8%淀粉載體，在160~170°C下進行壓力噴霧干燥，獲得4000億 /g的菌粉，枯草芽孢桿菌KO18發(fā)酵液的處理方式同地衣芽孢桿菌DE。釀酒酵母XDN-1188 發(fā)酵液經(jīng)真空轉(zhuǎn)鼓濃縮后，收集菌泥，以濃縮后發(fā)酵液質(zhì)量計加入1 %~2%載體吸附后， 在36°C~42°C條件下用流化床烘干至含水量8%以下，然后進行低溫粉碎，獲得原菌粉；地 衣芽孢桿菌XDM - 0968發(fā)酵液經(jīng)過濾、濃縮、精濾、干燥得固體堿性蛋白酶；
[0025] 所述干燥優(yōu)選為：干燥前，向精濾后的濃縮液中加入濃縮液重量1-3 %的保護劑， 混勻后用酶制劑專用噴霧干燥機干燥，進風(fēng)溫度140-150°C，排風(fēng)溫度75-85Γ，干燥時間 5-15s，產(chǎn)品水分< 5%既得；
[0026] 所述保護劑由以下重量份數(shù)的原料組成：海藻糖10-20份，NaCl 15-25份， (NH4)2S0410-15 份，半胱氨酸 15-20 份；
[0027] 步驟三：
[0028] 將所述豬用生物止瀉劑的所有組分原料過60目篩后，按照含量準(zhǔn)確計算并稱取 各種原料，然后將各種原料用混合機充分混合均勻，最終要求成品中各組分的混合變異系 數(shù)小于5%。
[0029] 作為發(fā)明的一種實施方式，所述生物止瀉劑包括如下組分：地衣芽孢桿菌DE 280 億cfu/g、枯草芽孢桿菌K018 300億cfu/g、釀酒酵母XDN-1188 100億cfu/g、納米蒙脫石 300mg/g、堿性蛋白酶100U/g、葡萄糖做載體補至總量Ig ;
[0030] 作為發(fā)明的一種實施方式，所述生物止瀉劑包括如下組分：地衣芽孢桿菌DE 300 億cfu/g、枯草芽孢桿菌K018 200億cfu/g、釀酒酵母XDN-1188 90億cfu/g、納米蒙脫石 250mg/g、堿性蛋白酶120U/g、葡萄糖做載體補至總量Ig ;
[0031] 作為發(fā)明的一種實施方式，所述生物止瀉劑包括如下組分：地衣芽孢桿菌DE150 億cfu/g、枯草芽孢桿菌K018 350億cfu/g、釀酒酵母XDN-1188 80億cfu/g、納米蒙脫石 230mg/g、堿性蛋白酶150U/g、葡萄糖做載體補至總量lg。
[0032] 本發(fā)明同時提供所述豬用生物止瀉劑在養(yǎng)豬行業(yè)的日常飼養(yǎng)和飼料中的應(yīng)用。
[0033] 所述豬用生物止瀉劑在養(yǎng)豬行業(yè)日常飼養(yǎng)中的應(yīng)用；用量及用法如下：
[0034] 母豬產(chǎn)前2周至產(chǎn)后兩周，拌料后撒飼，Ikg/噸全價配合飼料；仔豬出生當(dāng)天（越 早越好）3g/頭，溶解于2mL冷水中，灌服一次；仔豬7日齡5g/頭，溶解于3mL冷水中，灌服 一次；仔豬斷奶當(dāng)天IOg/頭，拌料，用料盤集中撒飼；仔豬斷奶前7天到斷奶后10天，拌料 后撒飼，2kg/噸教槽料；斷奶后11天至保育結(jié)束，拌料后撒飼，每噸保育料中添加生物止瀉 劑 Ikg ;
[0035] 所述豬用生物止瀉劑也可應(yīng)用于飼料中，參照日常飼養(yǎng)各階段用量，與各階段飼 料混合均勻即可。
[0036] 所述豬用生物止瀉劑用于有腹瀉癥狀的生長豬，使用方法如下：
[0037] 1日齡~7日齡仔豬，3~4g/頭，溶解于2mL水中灌服，每天一次，連用1~3天；
[0038] 8日齡~斷奶，4~5g/頭，溶解于3mL水中灌服或拌入少量料中給飼，每天一次， 連用1~3天；
[0039] 保育仔豬，8~IOg/頭，溶解于6mL水中灌服或拌入少量料中給飼，每天一次，連用 1~3天；中大豬，20~30g/頭，拌入少量料中給飼，每天一次，連用1~3天。
[0040] 有益效果
[0041] 本發(fā)明中采用的地衣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和釀酒酵母都是我國《飼料添加劑 目錄》中允許使用的益生菌，總的來說，有益菌具有調(diào)節(jié)動物腸道微生態(tài)平衡、抑制腸道有 害菌、維護腸道健康、提高動物免疫力等作用，但其作用具有很強的菌種甚至菌株依賴性， 同種益生菌不同菌株的生物作用相差甚大，功效各異，同時，益生菌之間有的具有拮抗作 用。本發(fā)明采用的益生菌都是按照不同選育目標(biāo)，經(jīng)過長期強化選育而成，且經(jīng)試驗證明相 互間無拮抗作用，其中，地衣芽孢桿菌DE對大腸桿菌、梭菌等致病細(xì)菌具有突出的抑制作 用，而釀酒酵母XDN-1188對輪狀病毒、梭菌等的抑制作用顯著，枯草芽孢桿菌K018產(chǎn)蛋白 酶、淀粉酶等消化酶的能力強。同樣，選用的堿性蛋白酶也均包含在《飼料添加劑目錄》中， 其區(qū)別于常見蛋白酶的特點是對導(dǎo)致腹瀉的常見病菌具有明顯抑制效果，但對以上三種及 腸道益生菌無抑制作用。通過破壞病原微生物腸道附著受體的蛋白結(jié)構(gòu)，或病原微生物凝 集素的結(jié)構(gòu)，使病原菌無法與腸道結(jié)合，保護腸道免受病原菌侵害；修復(fù)因病原菌侵害導(dǎo)致 的腸道細(xì)胞滲透性改變；破壞病原菌的細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)，具有一定殺菌和抑菌作用；還具有刺 激免疫系統(tǒng)、促進藥物吸收等作用。蒙脫石對消化道內(nèi)的致病菌以及它們所產(chǎn)生的毒素、氣 體等有較強的吸附、固定作用，而納米蒙脫石的吸附表面積更大，吸附能力更強，對各類腹 瀉具有良好的輔助治療作用。實踐證明，上述益生菌、堿性蛋白酶和納米蒙脫石單獨使用都 不能獲得理想效果，因為仔豬腹瀉的發(fā)生通常是多種因素共同作用的結(jié)果，但隨意將上述 酶制劑和益生菌混合使用治療效果也不佳，因為上述各有效成分的協(xié)同治療作用不但依賴 于菌株或酶品種本身，還依賴于它們之間的比例關(guān)系，試驗表明，按照本發(fā)明的有效成分組 成及配比制成的生物止瀉劑，對消化不良、細(xì)菌、病毒和應(yīng)激等因素導(dǎo)致的仔豬腹瀉具有快 速治療效果，其創(chuàng)新之處就是起效快，一天見效，90%以上兩天治愈，愈后不反彈，而類似產(chǎn) 品需7天以上，且效果不確定。改變本發(fā)明的有效成分種類或超出本發(fā)明的配比范圍，止瀉 效果均有明顯下降。將本發(fā)明中的任一有效成分換為其他同類成分，效果不明顯甚至無效。 因此，本發(fā)明中豬用生物止瀉劑的各有效成分和配比是特定范圍的，是一個有機結(jié)合體，具 有不可分割性。
【附圖說明】
[0042] 圖1為本發(fā)明豬用生物止瀉劑原料堿性蛋白酶在不同pH值下的酶活力示意圖；
[0043] 圖2為本發(fā)明豬用生物止瀉劑原料堿性蛋白酶抑菌試驗結(jié)果照片；
[0044] 圖3為本發(fā)明豬用生物止瀉劑原料堿性蛋白酶抑菌試驗結(jié)果示意圖。
【具體實施方式】
[0045] 實施例1
[0046] 地衣芽孢桿菌DE、枯草芽孢桿菌K018和釀酒酵母XDN-1188原菌粉的制備：
[0047] 按照微生物發(fā)酵工藝，先將斜面保存的地衣芽孢桿菌DE菌種用牛肉膏蛋白胨培 養(yǎng)基進行活化擴大培養(yǎng)，然后按照15mL/T的接種量，用壓差法無菌接種到發(fā)酵罐中，起始 pH為6. 5,溫度控制在34°C，發(fā)酵38小時，獲得發(fā)酵液；同樣將枯草芽孢桿菌K018菌種也用 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基活化擴大培養(yǎng)后，按照13mL/T的接種量，用壓差法無菌接種到發(fā)酵罐 中，起始pH為6. 0,溫度控制在33°C，發(fā)酵51小時，獲得發(fā)酵液。將釀酒酵母XDN-1188菌 種用YH)培養(yǎng)基培養(yǎng)活化后，按照12mL/T的接種量，用壓差法無菌接種到發(fā)酵罐，在pH5. 4， 溫度32°C，攪拌轉(zhuǎn)速150r/min條件下發(fā)酵22小時，獲得發(fā)酵液。
[0048] 將地衣芽孢桿菌DE發(fā)酵液分別用膜設(shè)備和離心設(shè)備進行濃縮后，加7%質(zhì)量百分 比的淀粉載體，在160~170°C下進行壓力噴霧干燥，獲得4000億/g的菌粉，枯草芽孢桿 菌K018發(fā)酵液的處理方式同地衣芽孢桿菌DE。釀酒酵母XDN-1188發(fā)酵液經(jīng)真空轉(zhuǎn)鼓濃 縮后，收集菌泥，加入適量載體吸附后，在36°C~42°C條件下用流化床烘干至含水量8%以 下，然后進行低溫粉碎，獲得原菌粉。
[0049] 堿性蛋白酶的制備：
[0050] 將斜面保存的地衣芽孢桿菌XDM - 0968經(jīng)菌種活化和逐級擴大培養(yǎng)獲得液體種 子；將液體種子以7%接種量接入發(fā)酵罐，起始pH為7. 0,培養(yǎng)溫度37°C，攪拌速度1