50r/m， 培養(yǎng)時間12h ;然后以1-2°C /h降溫速率緩慢降溫至27°C，恒溫培養(yǎng)8h ;繼續(xù)以1-2°C /h 降溫速率緩慢降溫至18°C，此時，將液體種子以2%接種量追加接入發(fā)酵罐，恒溫培養(yǎng)IOh ; 再以1-2°C /h升溫速率緩慢升溫至25°C，恒溫培養(yǎng)6h ;繼續(xù)以1-2°C /h升溫速率緩慢升溫 至37°C，恒溫培養(yǎng)10h，獲得發(fā)酵液；發(fā)酵液經過濾、濃縮、精濾、干燥得固體堿性蛋白酶；
[0051] 所述干燥具體為：向濃縮液中加入濃縮液重量2%的保護劑，混勻后用酶制劑專 用噴霧干燥機干燥，進風溫度145°C，排風溫度80°C，干燥時間10s，產品水分< 5%既得；
[0052] 所述保護劑由以下重量份數的原料組成：海藻糖15份，NaCl 20份，（NH4) 2S0412 份，半胱氨酸18份；
[0053] 生物止瀉劑的制備：
[0054] 所述生物止瀉劑包括如下組分：地衣芽孢桿菌DE 280億cfu/g、枯草芽孢桿菌 K018 300億cfu/g、釀酒酵母XDN-1188100億cfu/g、納米蒙脫石300mg/g、堿性蛋白酶 100U/g、葡萄糖做載體補至總量Ig ;
[0055] 將上述組分過60目篩后，按照含量準確計算并稱取各種原料，然后將各種原料用 混合機充分混合均勻，最終要求成品中各組分的混合變異系數小于5%。其中，益生菌原料 要求符合《微生物飼料添加劑技術通則》NY/T 1444-2007,酶制劑原料要求符合《飼料用酶 制劑通則》NY/T 722-2003,納米蒙脫石為飼料級，葡萄糖為食品級。
[0056] 實施例2
[0057] 地衣芽孢桿菌DE、枯草芽孢桿菌K018和釀酒酵母XDN-1188原菌粉的制備：
[0058] 按照微生物發(fā)酵工藝，先將斜面保存的地衣芽孢桿菌DE菌種用牛肉膏蛋白胨培 養(yǎng)基進行活化擴大培養(yǎng)，然后按照13mL/T的接種量，用壓差法無菌接種到發(fā)酵罐中，起始 pH為6. 5,溫度控制在33°C，發(fā)酵40小時，獲得發(fā)酵液；同樣將枯草芽孢桿菌K018菌種也用 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基活化擴大培養(yǎng)后，按照lOmL/T的接種量，用壓差法無菌接種到發(fā)酵罐 中，起始pH為6. 0,溫度控制在34°C，發(fā)酵50小時，獲得發(fā)酵液。將釀酒酵母XDN-1188菌 種用YH)培養(yǎng)基培養(yǎng)活化后，按照15mL/T的接種量，用壓差法無菌接種到發(fā)酵罐，在pH5. 2， 溫度33°C，攪拌轉速150r/min條件下發(fā)酵24小時，獲得發(fā)酵液。
[0059] 將地衣芽孢桿菌DE發(fā)酵液分別用膜設備和離心設備進行濃縮后，加6%淀粉載 體，在160~170°C下進行壓力噴霧干燥，獲得4000億/g的菌粉，枯草芽孢桿菌K018發(fā)酵 液的處理方式同地衣芽孢桿菌DE。釀酒酵母XDN-1188發(fā)酵液經真空轉鼓濃縮后，收集菌 泥，加入適量載體吸附后，在36°C~42°C條件下用流化床烘干至含水量8%以下，然后進行 低溫粉碎，獲得原菌粉。
[0060] 喊性蛋白酶的制備：
[0061 ] 將斜面保存的地衣芽孢桿菌XDM - 0968經菌種活化和逐級擴大培養(yǎng)獲得液體種 子；將液體種子以6%接種量接入發(fā)酵罐，起始pH為7. 0,培養(yǎng)溫度36°C，攪拌速度130r/m， 培養(yǎng)時間15h ;然后以1-2°C /h降溫速率緩慢降溫至25°C，恒溫培養(yǎng)IOh ;繼續(xù)以1-2°C /h 降溫速率緩慢降溫至15°C，此時，將液體種子以1 %接種量追加接入發(fā)酵罐，恒溫培養(yǎng)IOh ; 再以1-2°C /h升溫速率緩慢升溫至25°C，恒溫培養(yǎng)6h ;繼續(xù)以1-2°C /h升溫速率緩慢升溫 至36°C，恒溫培養(yǎng)10h，獲得發(fā)酵液；發(fā)酵液經過濾、濃縮、精濾、干燥得固體堿性蛋白酶；
[0062] 所述干燥具體為：向濃縮液中加入濃縮液重量1 %的保護劑，混勻后用酶制劑專 用噴霧干燥機干燥，進風溫度140°C，排風溫度75°C，干燥時間15s，產品水分< 5%既得；
[0063] 所述保護劑由以下重量份數的原料組成：海藻糖10份，NaCl 15份，（NH4) 2S0415 份，半胱氨酸20份；
[0064] 生物止瀉劑的制備：
[0065] 所述生物止瀉劑包括如下組分：地衣芽孢桿菌DE 300億cfu/g、枯草芽孢桿菌 K018200億cfu/g、釀酒酵母XDN-118890億cfu/g、納米蒙脫石250mg/g、堿性蛋白酶120U/ g、葡萄糖做載體補至總量Ig;
[0066] 將上述組分過60目篩后，按照含量準確計算并稱取各種原料，然后將各種原料用 混合機充分混合均勻，最終要求成品中各組分的混合變異系數小于5%。其中，益生菌原料 要求符合《微生物飼料添加劑技術通則》NY/T 1444-2007,酶制劑原料要求符合《飼料用酶 制劑通則》NY/T 722-2003,納米蒙脫石為飼料級，葡萄糖為食品級。
[0067] 實施例3
[0068] 地衣芽孢桿菌DE、枯草芽孢桿菌K018和釀酒酵母XDN-1188原菌粉的制備：
[0069] 按照微生物發(fā)酵工藝，先將斜面保存的地衣芽孢桿菌DE菌種用牛肉膏蛋白胨培 養(yǎng)基進行活化擴大培養(yǎng)，然后按照lOmL/T的接種量，用壓差法無菌接種到發(fā)酵罐中，起始 pH為6. 5,溫度控制在35°C，發(fā)酵36小時，獲得發(fā)酵液；同樣將枯草芽孢桿菌K018菌種也用 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基活化擴大培養(yǎng)后，按照15mL/T的接種量，用壓差法無菌接種到發(fā)酵罐 中，起始pH為6. 0,溫度控制在32°C，發(fā)酵53小時，獲得發(fā)酵液。將釀酒酵母XDN-1188菌 種用YH)培養(yǎng)基培養(yǎng)活化后，按照10mL/T的接種量，用壓差法無菌接種到發(fā)酵罐，在pH5. 6， 溫度33°C，攪拌轉速150r/min條件下發(fā)酵24小時，獲得發(fā)酵液。
[0070] 將地衣芽孢桿菌DE發(fā)酵液分別用膜設備和離心設備進行濃縮后，加8%淀粉載 體，在160~170°C下進行壓力噴霧干燥，獲得4000億/g的菌粉，枯草芽孢桿菌K018發(fā)酵 液的處理方式同地衣芽孢桿菌DE。釀酒酵母XDN-1188發(fā)酵液經真空轉鼓濃縮后，收集菌 泥，加入適量載體吸附后，在36°C~42°C條件下用流化床烘干至含水量8%以下，然后進行 低溫粉碎，獲得原菌粉。
[0071] 堿性蛋白酶的制備：
[0072] 將斜面保存的地衣芽孢桿菌XDM - 0968經菌種活化和逐級擴大培養(yǎng)獲得液體種 子；將液體種子以8%接種量接入發(fā)酵罐，起始pH為7. 0,培養(yǎng)溫度38°C，攪拌速度180r/m， 培養(yǎng)時間IOh ;然后以1-2°C /h降溫速率緩慢降溫至30°C，恒溫培養(yǎng)IOh ;繼續(xù)以1-2°C /h 降溫速率緩慢降溫至15°C，此時，將液體種子以1 %接種量追加接入發(fā)酵罐，恒溫培養(yǎng)8h ; 再以1-2°C /h升溫速率緩慢升溫至25°C，恒溫培養(yǎng)8h ;繼續(xù)以1-2°C /h升溫速率緩慢升溫 至38°C，恒溫培養(yǎng)10h，獲得發(fā)酵液；發(fā)酵液經過濾、濃縮、精濾、干燥得固體堿性蛋白酶；
[0073] 所述干燥具體為：向濃縮液中加入濃縮液重量3%的保護劑，混勻后用酶制劑專 用噴霧干燥機干燥，進風溫度150°C，排風溫度85°C，干燥時間5s，產品水分< 5%既得；
[0074] 所述保護劑由以下重量份數的原料組成：海藻糖20份，NaCl 15份，（NH4) 2S0415 份，半胱氨酸20份；
[0075] 生物止瀉劑的制備：
[0076] 所述生物止瀉劑包括如下組分：地衣芽孢桿菌DE 150億cfu/g、枯草芽孢桿菌 K018350億cfu/g、釀酒酵母XDN-118880億cfu/g、納米蒙脫石230mg/g、堿性蛋白酶150U/ g、葡萄糖做載體補至總量Ig;
[0077] 將上述組分過60目篩后，按照含量準確計算并稱取各種原料，然后將各種原料用 混合機充分混合均勻，最終要求成品中各組分的混合變異系數小于5%。其中，益生菌原料 要求符合《微生物飼料添加劑技術通則》NY/T 1444-2007,酶制劑原料要求符合《飼料用酶 制劑通則》NY/T 722-2003,納米蒙脫石為飼料級，葡萄糖為食品級。
[0078] 試驗例1
[0079] 堿性蛋白酶的抑菌試驗
[0080] 1 ·堿性蛋白酶液的準備
[0081 ] 用0. 85 %滅菌生理鹽水將地衣芽孢桿菌XDM - 0968發(fā)酵生產的堿性蛋白酶溶解 稀釋成lOOOU/mL的酶液備用；
[0082] 2.指示菌的準備
[0083] 將大腸桿菌0157接種至LB液體培養(yǎng)基中，37°C培養(yǎng)至對數生長期，如果菌液濃度 高，用無菌生理鹽水調整菌液濃度為IX 10sCFU/mL (菌液0D660 = 0. 1)，混勻，備用。
[0084] 3.抑菌試驗
[0085] 將活化好的指示菌菌懸液分別取100 μ L均勻涂布到LB固體平板上，均勻放置牛 津杯2個，每個牛津杯