一種可用于種雞場(chǎng)人工輸精的精液稀釋方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于家禽繁殖領(lǐng)域，涉及家禽精液稀釋及人工輸精技術(shù)，特別涉及一種可 用于種雞場(chǎng)人工輸精的精液稀釋方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 隨著現(xiàn)代化養(yǎng)禽業(yè)的發(fā)展，家禽養(yǎng)殖的規(guī)?；图s化程度越來(lái)越高，為了提高 受精率、加速良種化進(jìn)程，提高優(yōu)秀種雞的利用率，減少種公雞飼養(yǎng)量等等，種雞的人工授 精技術(shù)作為現(xiàn)代育種和生產(chǎn)中必不可少的手段變得越來(lái)越重要。目前，對(duì)雞進(jìn)行人工輸精 所用的幾乎都是未稀釋的雞精液，一方面，未經(jīng)稀釋的雞精液保存時(shí)間超過(guò)半小時(shí)，就要影 響受精率；另一方面，使用未經(jīng)稀釋的雞精液，家禽繁殖的成本被拉高。雞精液是一種高度 濃縮精子液，其容量小、密度大，每次射精大約為〇. 2-0. 6mL，少數(shù)可達(dá)到1. OmL，但每毫升 精液中精子密度約為35億個(gè)之多；研究表明：雞精液稀釋后不但可擴(kuò)大其體積，增加授精 母禽數(shù)，并且稀釋后的精液利用低溫條件保存可以抑制或減弱精子細(xì)胞內(nèi)的新陳代謝，精 子壽命延長(zhǎng)、運(yùn)輸方便，能最大限度地利用種公雞。因而稀釋精液人工輸精技術(shù)逐漸成為了 家禽繁殖領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。
[0003] 雞精液稀釋實(shí)質(zhì)上是將雞精液與配制的具有特定成分的稀釋液按比例混合的過(guò) 程，雞精液稀釋人工輸精技術(shù)已經(jīng)研究多年，但一直很難大范圍推廣。原因主要包括以下幾 占 . 1、稀釋液保存方法復(fù)雜繁瑣：稀釋液的保存方式基本都是采用添加抗生素在冰箱冷 藏，保存時(shí)間短，有的甚至需要現(xiàn)配現(xiàn)用；稀釋液配方繁多，報(bào)道效果不一致，很少進(jìn)行孵化 率檢測(cè)。
[0004] 2、等溫稀釋技術(shù)繁瑣且不合理：原因是雞精液稀釋過(guò)程需要嚴(yán)格遵循"等溫及時(shí)" 標(biāo)準(zhǔn)。"等溫"即稀釋過(guò)程中稀釋液的溫度要與精液的溫度基本一致，文獻(xiàn)稀釋精液人工授 精技術(shù)在羅曼粉蛋種雞中的應(yīng)用一文中指出溫差最多不能超過(guò)2°C。為保證等溫要求，目 前的方法是將水浴鍋溫度調(diào)到33-37度，稀釋液預(yù)熱。這種方法，一是不確定精液采集后稀 釋前的溫度，二是如果原精溫度不高，完全沒(méi)有必要將稀釋液預(yù)熱到這么高的溫度，因?yàn)闇?度越高，雞精液存活時(shí)間越短；三是這種操作方法太繁瑣，很難被種雞場(chǎng)接受。未經(jīng)稀釋的 雞精子在體外存活時(shí)間很短，當(dāng)雞精液采集入集精裝置之后30min，存活率通常會(huì)由最初的 70-80%降低至30-40%，這樣不僅使得精液的利用不夠充分，并且影響受精率。如果嚴(yán)格按 照上述理論操作，一方面要兼顧稀釋液與雞精液等溫，另一方面又要操作快速完成稀釋，整 個(gè)過(guò)程操作難度較大，需要多人配合完成，人力成本偏高，效果也并非樂(lè)見(jiàn)，缺乏大規(guī)模推 廣使用價(jià)值。
[0005] 3、現(xiàn)有技術(shù)的雞精液稀釋過(guò)程，均采用稀釋液向精液中緩慢添加，且強(qiáng)調(diào)不能反 秩序添加，并給出了原因：如果將精液加入稀釋液，當(dāng)稀釋液體積較大時(shí)，最初幾滴精液中 的精子就會(huì)受到"稀釋打擊"，會(huì)導(dǎo)致精子休克而喪失受精能力；而把稀釋液加入精液，最初 加入的稀釋液對(duì)精子而言，稀釋比例很小，精液是隨著稀釋液添加含量的逐漸增多才慢慢 被稀釋，幾乎不會(huì)對(duì)精子造成大的損傷，因而目前在進(jìn)行雞精液稀釋時(shí)均采用稀釋液向雞 精液中添加的順序。但申請(qǐng)人認(rèn)為，采完精后，先加精液后加稀釋液的添加順序，導(dǎo)致先采 集的精液不能及時(shí)稀釋（因?yàn)閯偛杉簻囟容^高，不能及時(shí)稀釋的傷害較大)，而且在最 忙碌的采精輸精過(guò)程中還需要增加一個(gè)添加稀釋液的操作步驟，無(wú)疑增加了采精輸精過(guò)程 的操作難度。因此為保證精液能夠得到及時(shí)稀釋，申請(qǐng)人嘗試反秩序添加的研究，實(shí)踐證明 先加入稀釋液的步驟可以實(shí)現(xiàn)邊采集邊稀釋，避免上述不足。而且稀釋打擊理論，也因采集 一杯精液時(shí)間較短（2min左右)，以及隨后能在稀釋液中恢復(fù)而規(guī)避，實(shí)踐也證明了綜合效 應(yīng)是未影響孵化率，反而還有所提高。上述研究對(duì)于雞精液稀釋技術(shù)的推廣、提高受精率以 及實(shí)現(xiàn)公雞精液大批量檢測(cè)技術(shù)操作(譬如一批采集300只公雞精液后再統(tǒng)一檢測(cè))具有積 極有力的推動(dòng)作用。
[0006] 4、現(xiàn)有技術(shù)，稀釋液定量加入方法缺乏描述，實(shí)際操作中采用注射器量取稀釋液， 再加入精液中的操作繁瑣。
[0007] 5、稀釋操作缺乏規(guī)范且需專人操作：相關(guān)現(xiàn)有技術(shù)文件主要集中在試驗(yàn)時(shí)的精子 質(zhì)量檢測(cè)，有限的幾篇文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)了生產(chǎn)應(yīng)用情況，但缺乏雞精液稀釋的細(xì)致操作描述，如等 溫稀釋、精液一定比例稀釋以及稀釋后混勻等過(guò)程，均缺乏細(xì)致描述，更談不上從生產(chǎn)輸精 人員角度進(jìn)行工序簡(jiǎn)化研究。申請(qǐng)人著重對(duì)雞精液稀釋過(guò)程進(jìn)行研究，實(shí)現(xiàn)雞稀釋精液人 工輸精技術(shù)的簡(jiǎn)化操作，推動(dòng)雞精液稀釋技術(shù)的大規(guī)模推廣與應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 為解決上述現(xiàn)有雞稀釋精液人工輸精技術(shù)存在的問(wèn)題與缺陷，本發(fā)明提供了一種 可用于種雞場(chǎng)人工輸精的精液稀釋方法，該方法包括雞精液稀釋液配制、分裝與保存技術(shù)， 以及與現(xiàn)有產(chǎn)業(yè)化輸精技術(shù)配套的稀釋液解凍、攜帶、預(yù)熱、定量添加、混勻、輸精等系統(tǒng)技 術(shù)，其首先根據(jù)輸精時(shí)采集一杯精液的體積與稀釋比例確定一支稀釋液的體積，實(shí)現(xiàn)一杯 精液一支稀釋液，解決生產(chǎn)中定量稀釋操作繁瑣問(wèn)題，其次采用體溫加熱方式對(duì)稀釋液實(shí) 現(xiàn)預(yù)熱，既簡(jiǎn)化了現(xiàn)有技術(shù)中稀釋液使用前需要恒溫水浴加熱的繁瑣操作問(wèn)題，又能實(shí)現(xiàn) 相對(duì)精確等溫稀釋；同時(shí)通過(guò)薄膜、手部、集精管的三者結(jié)合，在最大限度不改變目前工作 現(xiàn)狀下巧妙實(shí)現(xiàn)了集精、稀釋與混勻一體可由1人完成，降低了技術(shù)難度，縮減了設(shè)備與人 力成本。
[0009] 本發(fā)明解決的另外一個(gè)重要的技術(shù)問(wèn)題是克服了現(xiàn)有雞稀釋精液人工輸精技術(shù) 中只能按照將稀釋液加入到雞精液中的技術(shù)偏見(jiàn)，使反秩序添加并完成雞精液稀釋成為可 能，實(shí)踐證明了反秩序添加未影響孵化率，反而還有所提高。
[0010] 為實(shí)現(xiàn)以上技術(shù)目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案為：一種可用于種雞場(chǎng)人工輸精的 精液稀釋方法，其特征在于，包括以下步驟： 1) 配制稀釋液及冷凍保存：配制雞精液稀釋液，據(jù)輸精習(xí)慣一杯精液量與稀釋比例，將 稀釋液l-5mL定量分裝并置于一 20~一 18°C條件下冷凍保存?zhèn)溆茫?2) 預(yù)熱雞精液稀釋液：將稀釋液從冷凍環(huán)境中取出置于6~10°C環(huán)境中保存，輸精前 20~30min采用體溫加熱方式對(duì)其進(jìn)行預(yù)熱至與雞精液溫差處于±3°C之內(nèi)； 3) 稀釋與混勻：將雞精液與已經(jīng)預(yù)熱的稀釋液按比例1:1~1:2置于集精管或稀釋液 瓶中，取膜狀物并將其貼在手掌面或手指指肚處，手部帶膜處覆蓋集精管管口或稀釋液瓶 瓶口，利用手掌與五指之間的夾緊力，單手固定住集精管后搖勻管內(nèi)液體； 4)輸精：手拿集精管或稀釋液瓶靠底部1/3處呈傾斜狀，同時(shí)該手夾住一塊滅菌棉，每 次每只母雞輸精30uL，輸一只母雞順便擦拭一下輸精管尖端。
[0011] 其中，步驟1)中l(wèi)_2mL體積用于輸精后期，只需少量精液的情況；步驟4)中手拿 集精管或稀釋液瓶靠底部1/3處呈傾斜狀，便于滴管吸精液，同時(shí)該手夾住一塊滅菌棉，輸 一只母雞順便擦拭一下輸精管尖端，可以減少母雞間交叉污染。
[0012] 較佳實(shí)施情況下，所述步驟1)中稀釋液的主要成分為果糖7. 0-9. 0g、谷氨酸鈉 4. 0-6. 0g、磷酸氫二鉀11. 0-14. 0g、磷酸二氫鉀0. 5-0. 7g、N-三羥甲基甲基-2-氨基乙磺 酸3. 0-5. 0g、檸檬酸鉀0. 4-0. 8g、三水醋酸鈉3. 0-6. 0g、無(wú)水氯化鎂0. 2-0. 4g、番茄紅素 0. 05-0. 1 g、加石英雙重蒸餾水至1. 0L。
[0013] 所述步驟2)中體溫預(yù)熱的具體方式為將盛有稀釋液的稀釋液瓶放入身體貼膚口 袋實(shí)現(xiàn)預(yù)熱至稀釋液與雞精液溫差處于±3°C之內(nèi)。
[0014] 較佳實(shí)施情況下，所述步驟2)中稀釋液解凍方法為將稀釋液從冷凍室拿出存入可 隨身帶的微型保溫杯中，所述微型保溫杯中放置少量冰塊，可滿足6~10°C溫度要求，輸精 前20~30min置入貼膚口袋；當(dāng)使用已預(yù)熱的一支稀釋液的時(shí)候，立即把下一支稀釋液放 入貼膚口袋預(yù)熱。上述操作可利用冰凍的稀釋液自身低溫以及保溫杯隔熱效果來(lái)維持稀釋 液所需的低溫環(huán)境，同時(shí)可抑制稀釋液中可能的微生物生長(zhǎng)繁殖。
[0015] 優(yōu)選的，所述體溫預(yù)熱時(shí)身體貼膚口袋具體