大葉冬青提取物為有效成分的藥物組合物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種缺血性疾病或退行性腦疾患的預(yù)防或治療用藥物組合物，具體而 言，作為有效成分含有植物提取物。
【背景技術(shù)】
[0002] 缺血性腦中風(fēng)（cerebralapoplexy)，即，腦梗塞（cerebralinfarction)的主要 病因是血管動脈硬化癥引起的腦動脈血栓或栓塞和心臟疾病等引發(fā)的心因性栓塞。腦血管 堵住引發(fā)的腦梗塞癥又分為腦血栓癥和腦栓塞癥。腦血栓癥是高血壓、糖尿病、高血脂癥等 引發(fā)動脈硬化，動脈管壁變厚或變硬，由此造成血管變窄，血管內(nèi)壁容易受損不光滑，血流 不順暢，導(dǎo)致血液供應(yīng)顯著降低或中斷，腦細(xì)胞得不到氧氣和營養(yǎng)物質(zhì)，導(dǎo)致腦功能障礙。 腦栓塞癥是心瓣膜病或心房顫動等疾病導(dǎo)致心臟內(nèi)的血流出現(xiàn)異常，部分血液滯留在心臟 內(nèi)凝固，產(chǎn)生血液殘?jiān)Ｃ撀涞难簹堅(jiān)氯X血管引發(fā)腦梗塞。
[0003] 血管性癡呆（vasculardementia)是由于腦血管疾病導(dǎo)致腦損傷而發(fā)生的后 天性不可逆轉(zhuǎn)性認(rèn)知功能的降低。腦中風(fēng)和腦梗塞引發(fā)的癡呆占全部癡呆癥的三分之 一左右，是繼老年癡呆癥之后發(fā)病頻率高的癡呆。與一般的腦中風(fēng)和腦梗塞一樣，高齡、 吸煙等具有血管性危險(xiǎn)因素的患者容易產(chǎn)生腦部大血管或小血管閉塞，由此大腦皮質(zhì)或 皮質(zhì)下方的聯(lián)合神經(jīng)纖維遭到破壞，發(fā)生血管性癡呆。血管性癡呆根據(jù)構(gòu)成病因的血管 病理或產(chǎn)生癡呆的病變位置，可以分為多發(fā)性腦梗塞癡呆（multi-infarctdementia)、 皮質(zhì)下缺血性血管性癡呆（subcorticalischemicvasculardementia)以及閉塞導(dǎo)致 的單一病變性癡呆（strategicinfarctdementia)等。其中，閉塞導(dǎo)致的單一病變性 癡呆是尾狀核（caudatenucleus)、內(nèi)側(cè)額葉（mesialfrontallobe)、內(nèi)囊膝（genuof internalcapsule)等發(fā)生的單一病變導(dǎo)致的癡呆。小血管疾病引發(fā)的裂孔性腦梗塞或 不完全硬塞引發(fā)的腦白質(zhì)疏松（leukoaraiosis;whitematterhyperintensity)主要損 傷前額葉-皮質(zhì)下回路（prefrontal-subcorticalcircuit)。可能出現(xiàn)的癥狀不是記憶 障礙等傳統(tǒng)的癡呆癥狀，而是智力遲鈍（bradyphrenia)、失用癥（apraxia)等皮質(zhì)下癥狀 (subcorticaldysfunctio)〇
[0004] 老年癡呆癥（AD;Alzheimer'sdisease)的特征是神經(jīng)細(xì)胞（neuron)的喪失和源 于淀粉質(zhì)前軀體蛋白質(zhì)的39-43氨基酸肽-淀粉樣蛋白（amyloid-beta;Αβ)為主要構(gòu)成 成分的細(xì)胞外老年斑（senileplaque)。試管以及生物體內(nèi)研究結(jié)果表明，Αβ或Αβ縮氨 酸單片具有毒性效果，啟示Αβ對AD的發(fā)病起到重要的作用（Butterfieldetal.，F(xiàn)ree RadicalBiologyandMedicine, 2002, 32:1050-1060；ButterfIeldetal. ,FreeRadical BiologyandMedicine, 2007, 43:658-677)。培養(yǎng)時，Aβ會直接誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞的死滅，使 神經(jīng)細(xì)胞對興奮毒性以及氧化性損傷脆弱。NMDA(N-methyl-D_aspartatereceptor)受 體承擔(dān)Αβ結(jié)合的選擇性基質(zhì)或Αβ-誘發(fā)的谷氨酸興奮毒性的媒介作用。NMDA受體尤 其是對Ca2+具有高度透過性的配體-門控/伏特-敏感性陽離子通道。[Ca2+]i的大范 圍的上升會直接導(dǎo)致細(xì)胞功能不振、過度興奮或死滅。因此，如同Αβ的神經(jīng)毒性效果被 非競爭性NMDA受體拮抗劑（5R. 10S)-(+)-5-甲基-10, 11-脫氫-5H-吩噻惡[a，d]Cyclo hepten-5, l〇-Imine maleate (MK-801)[5R. 10S)- (+)-5-methyl-10, 1l-dihydr0-5H-dib enzo(a,b)cyclohepten-5,l0-imine maleate]減少的報(bào)告所證明，Αβ曝光方式的通過 NMDA受體的Ca2+引入對Α β-誘導(dǎo)的神經(jīng)毒性中起到?jīng)Q定性作用。相信活性氧（Reactive Oxygen species ;R0S)的形成也干預(yù)到退行性腦疾患的發(fā)病。幾項(xiàng)證據(jù)證明通過妨礙神經(jīng) 細(xì)胞恒定性的廣泛的分子形狀，促發(fā)神經(jīng)退化或使之更加容易，Αβ-媒介的神經(jīng)病中作為 活性因子襯托氧化應(yīng)激的干預(yù)。但是，NMDA受體拮抗劑和神經(jīng)細(xì)胞通道的直接阻斷劑的臨 床有益性由于缺乏可確認(rèn)的效能或具有嚴(yán)重的副作用。
[0005] 大部分的退行性腦疾患伴隨著癡呆，尤其，認(rèn)知障礙和記憶障礙（記憶力衰退）。 因此，包括癡呆在內(nèi)的退行性腦疾患的比較理想的治療藥物應(yīng)該是延遲腦細(xì)胞的破壞和老 化，保護(hù)腦細(xì)胞，恢復(fù)認(rèn)知功能。目前為止開發(fā)的藥劑有，抑制活性氧對腦細(xì)胞的破壞性的 維生素Ε和司立吉林（selegiline)等抗氧化劑、塔克林（Tacrine)、安理申（Aricept)以及 艾斯能（Exelon)等乙酰膽素分解酶抑制劑（acetylcholinesterase-inhibitingdrugs) 等。但是，這些藥劑都誘發(fā)相當(dāng)大的副作用，且其效能并不突出。
[0006] 屬于冬青科（Aquifoliaceae)的大葉冬青（I.latifolia)分布在中國和越南等 地，是中國南部居民喜歡飲用的苦丁茶（Kudingcha)的主要原料。傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)中苦丁茶用于 頭痛、高血壓等的治療劑，尤其，大葉冬青用于缺血性心臟疾病以及心肌梗塞的治療劑。但 是，實(shí)際上還沒有證實(shí)過大葉冬青對退行性腦疾患的治療效果。
[0007] 因此，本發(fā)明人為了開發(fā)對腦血管疾患具有預(yù)防和療效的天然物質(zhì)而努力的 過程中，發(fā)現(xiàn)了大葉冬青提取物在誘發(fā)腦梗塞的大鼠身上抑制腦梗塞以及浮腫，注射 Αβ(25-35)誘發(fā)神經(jīng)毒性的老鼠身上抑制記憶的損傷，且根據(jù)注射量還可以抑制，過氧化 氫（Η202)誘發(fā)的氧化應(yīng)激、谷氨酸以及Αβ(25-35)等毒性物質(zhì)以及低氧癥誘導(dǎo)的大腦皮質(zhì) 神經(jīng)細(xì)胞的死亡，由此確認(rèn)本發(fā)明的大葉冬青提取物可以用于腦血管疾病的預(yù)防或治療用 藥物成分以及保健功能食品的有效成分，完成了本發(fā)明。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明的旨在于，提供將大葉冬青（Ilexlatifolia)提取物作為有效成分的缺血 性疾病或退行性腦疾患的預(yù)防或治療用藥物組合物以及保健功能食品。
[0009] 本發(fā)明的另一個旨在于，提供將大葉冬青提取物作為有效成分的記憶損傷改善用 藥物組合物以及保健功能食品。
[0010] 為了實(shí)現(xiàn)上述的目的，本發(fā)明提供將大葉冬青（Ilexlatifolia)取物作為有效成 分的缺血性疾病或退行性腦疾患的預(yù)防或治療用藥物組合物以及保健功能食品。
[0011] 并且，本發(fā)明提供將大葉冬青提取物作為有效成分的記憶損傷改善用藥物組合物 以及保健功能食品。
[0012] 本發(fā)明的大葉冬青（Ilexlatifolia)提取物在誘發(fā)腦梗塞的大鼠身上抑制腦梗 塞以及浮腫，注射Αβ(25-35)誘發(fā)神經(jīng)毒性的老鼠身上抑制記憶損傷，有效抑制過氧化氫 (Η202)誘發(fā)的氧化應(yīng)激、谷氨酸以及Αβ(25-35)等毒性物質(zhì)以及低氧癥誘導(dǎo)的大腦皮質(zhì)神 經(jīng)細(xì)胞的死亡，所以能作為缺血性疾病或退行性腦疾患的預(yù)防或治療用藥物成分以及保健 功能食品的有效成分使用。
【附圖說明】
[0013]圖 1 為大葉冬青（Ilexlatifolia)對occlusion/reperfusion引發(fā)的腦梗塞的 抑制效果（組織學(xué)病變）的確認(rèn)圖；
[0014] 圖2為誘發(fā)腦梗塞的大鼠身上，確認(rèn)大葉冬青的腦梗塞以及腦浮腫抑制效果的結(jié) 果圖；
[0015] 圖3為通過Αβ(25-35)誘發(fā)神經(jīng)損傷的老鼠身上，通過大小鼠避暗測試確認(rèn)記憶 損傷抑制效果的結(jié)果圖；
[0016] 圖4為通過Αβ(25-35)誘發(fā)神經(jīng)損傷的老鼠身上，通過水迷宮測試（Watermaze test)確認(rèn)記憶損傷抑制效果的結(jié)果圖；
[0017] 圖5為大腦神經(jīng)細(xì)胞上，通過MTT分析表示的過氧化氫誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激對細(xì)胞死 亡抑制效果的分析圖。
[0018] 圖6為通過MTT分析確認(rèn)，大葉冬青對谷氨酸誘導(dǎo)的大腦神經(jīng)細(xì)胞死亡抑制效果 的確認(rèn)圖；
[0019] 圖7為通過MTT分析確認(rèn)，大葉冬青對Αβ(25-35)誘導(dǎo)的大腦神經(jīng)細(xì)胞死亡抑制 效果的確認(rèn)圖；
[0020] 圖8為通過ΜΤΤ分析確認(rèn)，大葉冬青對低氧癥（Hypoxia)誘導(dǎo)的大腦神經(jīng)細(xì)胞死 亡抑制效果的確認(rèn)圖。
【具體實(shí)施方式】
[0021] 下面結(jié)合附圖詳細(xì)說明本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】。
[0022] 本發(fā)明提供，將大葉冬青（Ilexlatifolia)提取物作為有效成分的缺血性疾病或 退行性腦疾患的預(yù)防或治療用藥物組合物。
[0023] 并且，本發(fā)明提供，將大葉冬青提取物作為有效成分的記憶損傷改善用藥物組合 物。
[0024] 大葉冬青可以自由采用人工栽培或市場上銷售的。
[0025] 上述大葉冬青提取物是包括下列步驟的制造方法來制作比較理想，但并不限于 此。
[0026] 依次執(zhí)行下述步驟可以制作大葉冬青提取物：
[0027] 1)在大葉冬青添加提取溶媒進(jìn)行提取的步驟；
[0028] 2)晾干步驟1)的提取物進(jìn)行過濾的步驟；以及
[0029] 3)將步驟2)中過濾的提取物進(jìn)行回流冷凝后烘干的步驟。
[0030] 上述提取溶媒最好選用水、酒精或其混合物。上述酒精最好采用（^至C2的低級 酒精，當(dāng)采用乙醇時，比其他溶媒的提取效果更好，所以低級酒精選用乙醇更理想。提取方 法上采用振蕩提取、索格里特（Soxhlet)提取或回流提取法比較好，但并不限