箱中繼續(xù)培養(yǎng)I h (培 養(yǎng)箱溫度控制在28. 5 ± 0.5 °C)。
[0024] (3) PTZ誘導(dǎo)：藥物預(yù)處理I h后，加入PTZ 20 μ L，使終濃度為10 mM。穩(wěn)定10 分鐘后，利用View Point行為學(xué)分析儀記錄60分鐘內(nèi)斑馬魚的運(yùn)動(dòng)情況。
[0025] (4)對(duì)斑馬魚的快速運(yùn)動(dòng)（V>20 mm/sec)距離（D)進(jìn)行定量分析，計(jì)算藥物的抗癲 癇治療效率，公式如下：
(5)同時(shí)，在軌跡記錄結(jié)束后，在解剖顯微鏡下觀察魚的狀態(tài)，包括：心率變化、是否側(cè) 翻、是否有觸碰反應(yīng)等。
[0026] (6)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理結(jié)果以
表示，多組間比較采用方差分析，兩組間比較采用 Dunnett' s T-檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，p〈0. 05為差異性顯著。
[0027] 實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表1，圖1、圖2。在96孔板中可以一次單濃度篩選8個(gè)化合物，每組 8尾魚，空白組快速運(yùn)動(dòng)距離為100 _，溶劑組和模型組與空白組相比，快速運(yùn)動(dòng)距離顯著 增加(/?〈 0. 01， p〈 0. 01)，表明PTZ誘導(dǎo)斑馬魚癲癇模型成功，且表現(xiàn)為快速運(yùn)動(dòng)距離 增加。模型組與溶劑組相比，快速運(yùn)動(dòng)距離無差異，表明溶劑DMS01. 0%對(duì)斑馬魚行為無影 響。苯妥英鈉是一個(gè)鈉離子通道阻滯劑，是一傳統(tǒng)的抗癲癇藥物。本實(shí)驗(yàn)中，苯妥英鈉在 300 μ M濃度下，能顯著降低快速運(yùn)動(dòng)距離，癲癇治療效率達(dá)59%(/?〈 0.01);篩選的化合物 Cmp3為伏立康唑，單濃素篩選中100 μ M濃度下，能顯著降低快速運(yùn)動(dòng)距離，癲癇治療效率 達(dá)62%(/?〈 0.01)。同時(shí)在軌跡記錄結(jié)束后，在解剖顯微鏡下觀察魚的狀態(tài)，伏立康唑給藥 組，觸碰后均有逃避反應(yīng)，未見其它異常表型，表明伏立康唑100 μ M濃度下未見毒性反應(yīng)， 快速運(yùn)動(dòng)距離下降亦是一種抗癲癇藥效表現(xiàn)。
[0028] 表1伏立康唑在PTZ誘導(dǎo)斑馬魚癲癇模型中的治療效率（mean土 sem)
實(shí)施例二驗(yàn)證伏立康唑在斑馬魚癲癇模型中的藥效及安全性 實(shí)驗(yàn)材料和實(shí)驗(yàn)方法同實(shí)施例一。通過軟件分析總的運(yùn)動(dòng)距離，來考察100 μ M濃度 的伏立康唑?qū)φ０唏R魚運(yùn)動(dòng)的影響。及在PTZ誘導(dǎo)癲癇模型中，考察100 μ M濃度的伏 立康唑?qū)Π唏R魚快速運(yùn)動(dòng)距離的影響，判斷其有無抗癲癇藥效。
[0029] 結(jié)果見圖3、4、5。伏立康唑在100 μ M濃度的對(duì)正常斑馬魚總的運(yùn)動(dòng)距離抑制率 為2%，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，結(jié)果表明其在此濃度下，斑馬魚無毒性反應(yīng)。在PTZ誘導(dǎo)癲癇模型中， 伏立康唑在100 μ M濃度抗癲癇抑制率分別為54% (ρ〈0. 01)，表現(xiàn)出較好的抗癲癇效果。
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【主權(quán)項(xiàng)】
1. 伏立康唑在制備治療或預(yù)防癲癇藥物中的應(yīng)用。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物為口服給藥劑型、注射給藥劑 型、粘膜給藥劑型或經(jīng)皮給藥劑型。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述藥物為片劑、膠囊劑、顆粒劑、口服 液、注射液、貼劑或凝膠劑形式。
【專利摘要】本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及伏立康唑在制備治療或預(yù)防癲癇藥物中的應(yīng)用。經(jīng)過戊四唑（PTZ）誘導(dǎo)斑馬魚癲癇模型篩選化合物，伏立康唑可顯著降低癲癇斑馬魚快速運(yùn)動(dòng)距離（V>20mm/sec），但對(duì)總的運(yùn)動(dòng)距離無影響，說明其在無毒濃度下，伏立康唑在治療或預(yù)防癲癇疾病中表現(xiàn)出較好的藥效。
【IPC分類】A61K31/506, A61P25/08
【公開號(hào)】CN105326843
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410388915
【發(fā)明人】李春?jiǎn)? 周娟, 宋如順, 郭勝亞, 高羽軍, 吳耀東
【申請(qǐng)人】杭州雷索藥業(yè)有限公司
【公開日】2016年2月17日
【申請(qǐng)日】2014年8月8日