H]+calcd for〔42&9?^〇6:697. 5156 ;found:697. 5151。
[0027]
[0028] 實(shí)施例4 Schiglautone A的0-(贓嗦基）乙基衍生物（IV)的合成
[0029] 將化合物II (358mg，0. 5mmol)溶于30血乙臘當(dāng)中，向其中加入無水碳酸鐘 (1380mg，10.0 mmol),艦化鐘（336mg，2. Ommol)和無水贓嗦（3446mg，40mmol)，混合物加熱 回流化。反應(yīng)結(jié)束后將反應(yīng)液倒入冰水中，用等量二氯甲燒萃取3次，合并有機(jī)相。依次用 水和飽和食鹽水洗涂合并之后的有機(jī)相，再用無水硫酸鋼干燥，減壓濃縮去除溶劑得到產(chǎn) 物粗品。產(chǎn)物粗品用硅膠柱層析純化（流動(dòng)相為：石油酸/丙酬=100:0.5, v/v)，收集淡 棟色集中洗脫帶即得到化合物IV的淡棟色固體（261. 4mg，72%)。 W30] 'H NMR (500MHz, DMS〇-d6) 5 13. 14(s, 1H),6. 14(s, lH),5.57(d, J = 21. 3Hz, 2H), 3. 59 (s, 2H), 3. 52 (s, 2H), 3. Ol (s, IH), 2. 68 (s, 8H), 2. 57 (d, J = 3. 3Hz, 4H)，2. 39 (s, 2H)，2. 34 (d, J = 4. 3Hz, 8H)，2. 33 (s, IH)，2. 22 (s, IH)，I. 88 (d, J = 11. 7Hz，4H), I. 79(s, IH), I. 73(s, IH), I. 66(s, IH), I. 60 - I. 53(m, 3H), I. 50(s, IH), I. 37 (s, IH)，I. 28 (dd, J = 21. 3, 8. 7Hz, 4H)，I. 07 (d, J = 6. 6Hz, 2H)，I. 06 (s, IH)，0. 99 (t, J = 12. OHz, 3H)，0. 96 (t, J = 12. 5Hz, 6H)，0. 94 (t, J = 12. 5Hz, 3H)，0. 88 (d, J = 20.0 Hz, 6H). 陽的1] 口C NMR (125MHz, DMS0-d6) 5 211. 55 (S)，209. 25 (S)，170. 19 (S)，161. 22 (S)，143. 6 2 (S)，132. 14 (S)，127. 86 (S)，86. 08 (S)，82. 53 (S)，67. 07 (S)，66. 22 (S)，57. 27 (S)，54. 54 (s )，54. 24 (S)，52. 84 (S)，52. 00 (S)，45. 88 (S)，45. 35 (S)，40. 76 (S)，38. 67 (S)，38. 45 (S)，35. 12 (S)，33. 65 (S)，29. 96 (S)，29. 07 (S)，26. 83 (S)，25. 61 (S)，24. 15 (S)，22. 43 (S)，21. 16 (S) ,20. 68 (s), 20. 11 (s), 18. 76 (s), 18. 23 (s), 15. 18 (s).
[0032] HRMS(ESI) :m/z[M+H]+calcd for〔42&風(fēng)〇6:727. 5374 ;found:727. 5379。
[0033]
[0034] 實(shí)施例5組合物抗病毒活性
[0035] (一）實(shí)驗(yàn)例：組合物對(duì)瘤疹病毒的作用研究：
[0036] (1)細(xì)胞株與病毒株：
[0037] 人胚腎細(xì)胞（肥K293,為服V-1、服V-2病毒敏感細(xì)胞）購自美國Clontech公司； 單純瘤疹病毒1型化SV-1)Sm44株、單純瘤癥病毒2型化SV-2) 333株引自中國CDC病毒病 研究所。 陽〇3引 似細(xì)胞毒性測定：
[0039] 組合物31091302050629的制備：將研磨之后過200目網(wǎng)的45mg化合物III的粉 末和研磨之后過200目網(wǎng)的55mg化合物IV的粉末裝入帶蓋的小管中并用滿輪攬拌儀混 合即得到IOOmg組合物31091302050629,使用時(shí)用水溶解運(yùn)IOOmg的組合物即得到組合物 31091302050629 的溶液。
[0040] 參照文獻(xiàn)（汪受傳，王霖，陳超等，清肺口服液含藥血清對(duì)病毒抑制作用的實(shí)驗(yàn)研 究，南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2008 ;24(1) :25~27)的方法，將各樣品W2倍比做系列稀釋 (2°一 5)，然后按稀釋順序橫向接種于96板孔中的肥K293上，每孔100祉，每稀釋度縱向重 復(fù)3孔（A、B、C行），平行設(shè)微孔板D的1~6孔為細(xì)胞對(duì)照，7~12孔不接種細(xì)胞為空白 對(duì)照，顯微鏡下每日觀察CPE，連續(xù)觀察7山中性紅染色，在540nm波長測定OD值，將實(shí)驗(yàn) 組與細(xì)胞對(duì)照組OD值相比計(jì)算細(xì)胞存活率，用Reed-Muench方法計(jì)算藥物半數(shù)細(xì)胞中毒濃 度仰加)。 陽OW (4)抑毒試驗(yàn)：
[0042] 參照文獻(xiàn)（汪受傳，王霖，陳超等，清肺口服液含藥血清對(duì)病毒抑制作用的實(shí)驗(yàn)研 究，南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2008;24(1) :25~27)的方法，將樣品按稀釋順序（2 M)橫向 接種于96板孔中的單層細(xì)胞上，每孔IOOuL每稀釋度縱向重復(fù)4孔，微孔板的A、B、C行 加含100個(gè)TCI^。的病毒IOOuL作為試驗(yàn)組，D行補(bǔ)充等容量細(xì)胞維持液為不同濃度藥物 對(duì)照，平行設(shè)F行作為病毒對(duì)照，E行的1~12作為細(xì)胞對(duì)照。37°C、5% C〇2培養(yǎng)，每日觀 察CPE,連續(xù)觀察4d。病毒對(duì)照出現(xiàn)90%W上C陽時(shí)，加1%中性紅染色，用酶標(biāo)儀在波長 540皿波長讀取A值，各組A值去除病毒對(duì)照組A值，將各試驗(yàn)組與細(xì)胞對(duì)照組A值相比，獲 得細(xì)胞存活率，用Reed-Muench方法計(jì)算半數(shù)抑毒濃度（ICJ，最終將TDw和IC5。相比獲得 抑毒指數(shù)燈I)。 陽0創(chuàng) 妨結(jié)果：
[0044] ①樣品TDs。的測定：對(duì)照組細(xì)胞顯微鏡下觀察貼壁生長致密、形態(tài)良好。組合物 31091302050629、化合物III和化合物IV的TDsd在肥K293分別為2 2'32、2 2'26、2 2'89。
[0045] ②抑毒實(shí)驗(yàn)：對(duì)照組細(xì)胞貼壁致密、形態(tài)良好。鏡下觀察發(fā)現(xiàn)，服V-1、服V-2病毒 對(duì)照組分別在第3d、3d出現(xiàn)90%W上的CPE，服V1和服V2在肥K293C陽則W腫脹、多細(xì) 胞融合化SV1致多個(gè)細(xì)胞融和成大泡，而HSV2致融合為小泡）、變圓、脫落為主要特征。
[0046] 而組合物31091302050629抑毒試驗(yàn)各組細(xì)胞，按照組合物31091302050629樣品 稀釋梯度，梯度規(guī)律出現(xiàn)CPE:HSV1-HEK293在第10稀釋度之前、HSV2-HEK293組在第9稀 釋度之前細(xì)胞完全被保護(hù)，之后出現(xiàn)CPE，CPE隨樣品濃度減少逐漸加重。
[0047] 而化合物HI和化合物IV處理組在2 6濃度范圍內(nèi)才觀察到抑制病毒的效應(yīng)。
[0048] 將上述實(shí)驗(yàn)板用1 %中性紅染色、用酶標(biāo)儀測450nmA值，各組A值減掉病毒對(duì) 照組A值后，各實(shí)驗(yàn)組A值與細(xì)胞對(duì)照組A值相比獲得ICs。，ICs。與TD5。相比獲得組合物 31091302050629 的1'1:抑制服￥-1、服￥-2在肥1(293細(xì)胞發(fā)生〔?6，1〔5。分別為2 11'14、2 12'39， 1'1分別為451.9、1074.9?；衔?11的1'1:對(duì)應(yīng)的1〔5。分別為2 5'12、2 5'38，口分別為7.3、 8. 7?；衔颕V的TI對(duì)應(yīng)的ICw分別為2 5'"、2 4'97,TI分別為4. 9、4. 2。
[0049] 結(jié)論：組合物31091302050629具有顯著的抗瘤疹科病毒（包括服V-1、肥V-2)的 作用，而且安全性高，因此組合物31091302050629在治療瘤疹病毒感染疾病中具有廣泛的 應(yīng)用背景?；衔颕II和化合物IV不具有顯著的抗瘤疹科病毒（包括HSV-1、肥V-2)的作 用，而且安全性極低，因此化合物III和化合物IV在治療瘤疹病毒感染疾病中沒有應(yīng)用背 景。
[0050] (二）實(shí)驗(yàn)例：組合物對(duì)呼吸道合胞病毒巧SV)的作用研究
[0051] (1)組合物31091302050629、化合物III和化合物IV的配置：將藥物溶于細(xì)胞維 持液（含2%新生牛血清的MEM，GIBICO公司產(chǎn)品）中備用。
[0052] (2)細(xì)胞株與病毒株：
[0053] 人胚腎細(xì)胞（肥K293，RSV病毒敏感細(xì)胞）購自美國Clontech公司；呼吸道合胞病 毒巧SV)Long株引自中國CDC病毒病研究所。
[0054] (3)細(xì)胞毒性測定：
[00對(duì)參照文獻(xiàn)（汪受傳，王霖，陳超等，清肺日服液含藥血清對(duì)呼吸道合胞病毒抑制作 用的實(shí)驗(yàn)研究，南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2008 ;24(1) :25~27)的方法，將樣品W2倍比做系 列稀釋（2°一 5)，然后按稀釋順序橫向接種于96板孔中的肥K293上，每孔100祉，每稀釋度 縱向重復(fù)3孔（A、B、C行），平行設(shè)微孔板D的1~6孔為細(xì)胞對(duì)照，7~12孔不接種細(xì)胞 為空白對(duì)照，顯微鏡下每日觀察CPE，連續(xù)觀察7山中性紅染色，在540nm波長測定OD值，將 實(shí)驗(yàn)組