一種生物光敏劑的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于光敏試劑制備技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種生物光敏劑。
【背景技術(shù)】
[0002]在目前生物光敏劑制備領(lǐng)域中當(dāng)前存在的問(wèn)題主要包括負(fù)載的光敏劑與納米顆粒之間的能量轉(zhuǎn)換效率低，因此生物光敏劑的單線態(tài)氧的產(chǎn)率低。重要的原因是與納米顆粒負(fù)載的光敏劑本身的特性有關(guān)，一般的光敏劑吸收光子之后，與氧分子之間的能量交換率低，產(chǎn)生的單線態(tài)氧量少。一般的生物光敏劑對(duì)作用對(duì)象都沒(méi)有特定的靶向。無(wú)靶向的生物光敏劑，由于對(duì)癌細(xì)胞沒(méi)有特異性識(shí)別的功能，同樣也會(huì)攻擊正常組織細(xì)胞，這樣會(huì)極大的增加了光動(dòng)力治療的副作用。同時(shí)，生物光敏劑只有進(jìn)入到細(xì)胞內(nèi)部，對(duì)癌細(xì)胞的殺傷力才大，而癌細(xì)胞對(duì)沒(méi)有靶向納米顆粒的吸收率不高。從而導(dǎo)致光動(dòng)力治療的效果不佳。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的是提供一種生物光敏劑，即一種強(qiáng)穿透性和高靶向性的新型生物光敏劑，從而彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)的不足。
[0004]本發(fā)明的生物光敏劑，其制備過(guò)程如下:
[0005]1)在介孔二氧化娃包覆的上轉(zhuǎn)換納米顆粒(NaYF4:Yb/Er)的表面連接上氨基(-NH2)，獲得表面接有氨基(-nh2)的納米顆粒；
[0006]2)將酞菁二氯化鈦浸入到表面接有氨基(-NH2)的納米顆粒的介孔二氧化硅層中；獲得負(fù)載有酞菁二氯化鈦的納米顆粒；
[0007]3)將負(fù)載有光敏劑酞菁二氯化鈦的納米顆粒表面修飾透明質(zhì)酸完成制備。
[0008]上述制備過(guò)程，其一種具體過(guò)程如下:
[0009]1)將介孔二氧化硅包覆的上轉(zhuǎn)換納米顆粒溶解在甲苯中，再加入APTMS制成混合溶液，混合溶液進(jìn)行密封常溫旋轉(zhuǎn)；旋轉(zhuǎn)結(jié)束后離心收集納米顆粒，用甲苯清洗風(fēng)干后獲得表面接有氨基的納米顆粒；
[0010]作為優(yōu)選，混合溶液中介孔二氧化娃包覆的上轉(zhuǎn)換納米顆粒的濃度為2-10mg/ml ；
[0011]作為優(yōu)選，混合溶液中甲苯和APTMS的體積比為40-60:1 ；
[0012]2)將酞菁二氯化鈦溶于吡啶溶液中，密封溶解后進(jìn)行離心，取上清液；將表面接有氨基(_nh2)的納米顆粒浸入上清液中，密閉進(jìn)行懸浮，然后離心收集納米顆粒，將顆粒清洗后存放于MES緩沖液中，獲得負(fù)載有酞菁二氯化鈦的納米顆粒；
[0013]其中顆粒清洗是用PBS溶液進(jìn)行的；
[0014]3)將透明質(zhì)酸活化后加入MES緩沖液中，并加入步驟2)制備的負(fù)載有酞菁二氯化鈦的納米顆粒，溶液密封超聲室溫旋轉(zhuǎn)進(jìn)行酰胺化反應(yīng)制成產(chǎn)品。
[0015]在MES緩沖液中NHS(N-羥基琥珀酰亞胺)和EDC(l-(3_ 二甲氨基丙基)_3_乙基碳二亞胺鹽酸鹽)對(duì)透明質(zhì)酸的作用終濃度為l_3mg/ml。
[0016]本發(fā)明將酞菁二氯化鈦和透明質(zhì)酸以合適的負(fù)載順序和高效的結(jié)合方式對(duì)納米顆粒進(jìn)行修飾，修飾后的上轉(zhuǎn)換納米顆粒有高的單線態(tài)氧的產(chǎn)率，和對(duì)過(guò)量表達(dá)CD44蛋白的細(xì)胞的特異性識(shí)別的高靶向功能。
【附圖說(shuō)明】
[0017]圖1:負(fù)載酞菁二氯化鈦的上轉(zhuǎn)換納米顆粒單線態(tài)氧的產(chǎn)率圖。
【具體實(shí)施方式】
[0018]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)的描述。
[0019]實(shí)施例1:生物光敏劑的制備
[0020]1)介孔二氧化娃包覆的上轉(zhuǎn)換納米顆粒(NaYF4:Yb/Er)表面連接氨基:
[0021]稱取15mg介孔二氧化娃包覆的上轉(zhuǎn)換納米顆粒(NaYF4:Yb/Er)，加到裝有3ml甲苯溶液的小瓶中，密封常溫300rpm旋轉(zhuǎn)6h (旋轉(zhuǎn)速度不宜太快，不超過(guò)600rpm)。再加入50ul APTMS (體積比甲苯:APTMS = 60:1)，溶液密封常溫旋轉(zhuǎn)24h。旋轉(zhuǎn)結(jié)束后，離心收集納米顆粒，相對(duì)離心力為3500g，時(shí)間6min。取甲苯溶液3ml，吹打溶液直到顆?；靹颍芤撼蕬页匾?，再離心收集納米顆粒，相對(duì)離心力為3500g，時(shí)間6min，再重復(fù)以上步驟，用3ml甲苯清洗一遍，然后放通風(fēng)櫥風(fēng)干。此時(shí)獲得表面接有氨基(-NH2)的納米顆粒。
[0022]2)納米顆粒的介孔二氧化硅層負(fù)載光敏劑酞菁二氯化鈦:
[0023]稱取0.5mg酞菁二氯化鈦溶于3ml的吡啶溶液中，密封超聲40min (超聲池中放冰袋，保證超聲過(guò)程水溫常溫)，之后溶液3000rpm離心lOmin，取上清液放于25ml小瓶中，沉淀放通風(fēng)櫥風(fēng)干后稱量質(zhì)量叫。則上清液中酞菁二氯化鈦的濃度是[(0.5-1?)/3]mg/ml ο (酞菁二氯化鈦的稱量質(zhì)量1?，溶于吡啶之后，只溶解一部分，此時(shí)離心收集不溶解的沉淀，風(fēng)干后稱量m2.我們?nèi)∮蒙锨逡?，所以上清液中的酞菁二氯化鈦的質(zhì)量為(m1-ng，濃度
上清液體積V))。將15mg表面接有氨基(_NH2)的納米顆粒浸入上清液中，密閉瓶口超聲40min (超聲水溫保持不變)后，室溫600rpm旋轉(zhuǎn)24h。離心收集納米顆粒，3000rpm離心lOmin。吸取2ml PBS溶液(0.1M PH7.5)吹打溶液直到顆粒混勻，溶液呈懸濁液，再離心收集納米顆粒，3000rpm離心lOmin。重復(fù)以上步驟，再次用2mlPBS溶液清洗納米顆粒。最后顆粒存放于2ml MES緩沖液中。獲得負(fù)載有光敏劑酞菁二氯化鈦的納米顆粒
[0024]3)介孔二氧化娃包覆的上轉(zhuǎn)換納米顆粒(NaYF4:Yb/Er)表面修飾透明質(zhì)酸:
[0025]稱取15mg透明質(zhì)酸(HA)放入2ml超純水中活化過(guò)夜，再加入2ml MES緩沖液(緩沖液中EDC (4mg/ml)和NHS (4mg/ml))，保證EDC和NHS對(duì)透明質(zhì)酸的作用終濃度都為2mg/ml ο溶液常溫600rpm旋轉(zhuǎn)30min。取2ml含有15mg納米顆粒的MES緩沖液加入上面的溶液中，溶液密封超聲40min后，室溫旋轉(zhuǎn)300rpm，8h，充分進(jìn)行酰胺化反應(yīng)。反應(yīng)完成后lOOOOrpm離心lOmin離心收集產(chǎn)品，取2ml超純水吹打溶液直到顆?；靹?，溶液呈懸濁液，離心收集納米顆粒，lOOOOrpm離心lOmin。重復(fù)以上步驟，再次用2ml超純水清洗納米顆粒。納米顆粒清洗2次后完成生物光敏劑的制備。將產(chǎn)品存放于2ml超純水中，密封4°C保存。
[0026]1)對(duì)本發(fā)明制備的新型生物光敏劑進(jìn)行單線態(tài)氧產(chǎn)率的檢測(cè)。單線態(tài)氧產(chǎn)率是利用熒光物質(zhì)ABDA對(duì)單線態(tài)氧敏感而使其自身的熒光強(qiáng)度降低來(lái)檢測(cè)的。負(fù)載不同光敏劑的納米顆粒單線態(tài)氧產(chǎn)率檢測(cè)結(jié)果顯示:負(fù)載部花青MC540的上轉(zhuǎn)換納米顆粒的單線態(tài)氧產(chǎn)率為20%;負(fù)載酞菁鋅(ZnPc)的上轉(zhuǎn)換納米顆粒的單線態(tài)氧產(chǎn)率為10%;負(fù)載酞菁二氯化鈦的上轉(zhuǎn)換納米顆粒的單線態(tài)氧產(chǎn)率為40.7%。本發(fā)明制備的負(fù)載酞菁二氯化鈦的上轉(zhuǎn)換納米顆粒單線態(tài)氧的產(chǎn)率與之前的相比有了大大的提高(圖1)。
[0027]2)利用傅立葉紅外光譜儀對(duì)制備的新型生物光敏劑進(jìn)行檢測(cè)，從紅外光譜圖分析得；3313cm 1處的吸收峰來(lái)源于HA的0 - Η伸縮鍵，2931cm 1處的吸收峰來(lái)代表C - Η伸縮鍵，1637cm 1處的吸收峰代表-CH2shoulder peak,810andlll0,1637cm 1處的吸收峰代表S1-ο-Si伸縮鍵。綜合以上分析透明質(zhì)酸分子(HA)已經(jīng)包覆到顆粒的表面。
[0028]實(shí)施例2:生物光敏劑的制備
[0029]1)介孔二氧化娃包覆的上轉(zhuǎn)換納米顆粒(NaYF4