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      一種生物光敏劑的制作方法_2

      文檔序號(hào):9606188閱讀:來源:國知局
      :Yb/Er)表面連接氨基:
      [0030]稱取30mg介孔二氧化娃包覆的上轉(zhuǎn)換納米顆粒(NaYF4:Yb/Er),加到裝有3ml甲苯溶液的小瓶中,密封常溫300rpm旋轉(zhuǎn)6h (旋轉(zhuǎn)速度不宜太快,不超過600rpm)。再加入50ul APTMS (體積比甲苯:APTMS = 60:1),溶液密封常溫旋轉(zhuǎn)24h。旋轉(zhuǎn)結(jié)束后,離心收集納米顆粒,相對(duì)離心力為3500g,時(shí)間6min。取甲苯溶液3ml,吹打溶液直到顆?;靹颍芤撼蕬页匾?,再離心收集納米顆粒,相對(duì)離心力為3500g,時(shí)間6min,再重復(fù)以上步驟,用3ml甲苯清洗一遍,然后放通風(fēng)櫥風(fēng)干。此時(shí)獲得表面接有氨基(-NH2)的納米顆粒。
      [0031]2)納米顆粒的介孔二氧化硅層負(fù)載光敏劑酞菁二氯化鈦:
      [0032]稱取2.5mg酞菁二氯化鈦溶于3ml的吡啶溶液中,密封超聲40min (超聲池中放冰袋,保證超聲過程水溫常溫),之后溶液3000rpm離心lOmin,取上清液放于25ml小瓶中,沉淀放通風(fēng)櫥風(fēng)干后稱量質(zhì)量叫。則上清液中酞菁二氯化鈦的濃度是[(2.5-1^)/3=11^/ml ο (酞菁二氯化鈦的稱量質(zhì)量1?,溶于吡啶之后,只溶解一部分,此時(shí)離心收集不溶解的沉淀,風(fēng)干后稱量m2.我們?nèi)∮蒙锨逡?,所以上清液中的酞菁二氯化鈦的質(zhì)量為(m1-ng,濃度
      上清液體積V))。將30mg表面接有氨基(_NH2)的納米顆粒浸入上清液中,密閉瓶口超聲40min (超聲水溫保持不變)后,室溫600rpm旋轉(zhuǎn)24h。離心收集納米顆粒,3000rpm離心lOmin。吸取5ml PBS溶液(0.1M PH7.5)吹打溶液直到顆?;靹?,溶液呈懸濁液,再離心收集納米顆粒,3000rpm離心lOmin。重復(fù)以上步驟,再次用5mlPBS溶液清洗納米顆粒。最后顆粒存放于2ml MES緩沖液中。獲得負(fù)載有光敏劑酞菁二氯化鈦的納米顆粒
      [0033]3)介孔二氧化娃包覆的上轉(zhuǎn)換納米顆粒(NaYF4:Yb/Er)表面修飾透明質(zhì)酸:
      [0034]稱取30mg透明質(zhì)酸(HA)放入4ml超純水中活化過夜,再加入2ml MES緩沖液(緩沖液中EDC (9mg/ml)和NHS (9mg/ml)),保證EDC和NHS對(duì)透明質(zhì)酸的作用終濃度都為3mg/ml ο溶液常溫600rpm旋轉(zhuǎn)30min。取2ml含有30mg納米顆粒的MES緩沖液加入上面的溶液中,溶液密封超聲40min后,室溫旋轉(zhuǎn)300rpm,8h,充分進(jìn)行酰胺化反應(yīng)。反應(yīng)完成后lOOOOrpm離心lOmin離心收集產(chǎn)品,取4ml超純水吹打溶液直到顆?;靹?,溶液呈懸濁液,離心收集納米顆粒,lOOOOrpm離心lOmin。重復(fù)以上步驟,再次用4ml超純水清洗納米顆粒。納米顆粒清洗2次后完成生物光敏劑的制備。將產(chǎn)品存放于2ml超純水中,密封4°C保存。
      [0035]對(duì)本實(shí)施例制備的新型生物光敏劑進(jìn)行單線態(tài)氧產(chǎn)率的檢測(cè)。單線態(tài)氧產(chǎn)率是利用熒光物質(zhì)ABDA對(duì)單線態(tài)氧敏感而使其自身的熒光強(qiáng)度降低來檢測(cè)的。負(fù)載不同光敏劑的納米顆粒單線態(tài)氧產(chǎn)率檢測(cè)結(jié)果顯示:負(fù)載部花青MC540的上轉(zhuǎn)換納米顆粒的單線態(tài)氧產(chǎn)率為20%;負(fù)載酞菁鋅(ZnPc)的上轉(zhuǎn)換納米顆粒的單線態(tài)氧產(chǎn)率為10%;負(fù)載酞菁二氯化鈦的上轉(zhuǎn)換納米顆粒的單線態(tài)氧產(chǎn)率為40.7 %。本實(shí)施例制備的負(fù)載酞菁二氯化鈦的上轉(zhuǎn)換納米顆粒單線態(tài)氧的產(chǎn)率與之前的相比有了大大的提高。
      [0036]利用傅立葉紅外光譜儀對(duì)制備的新型生物光敏劑進(jìn)行檢測(cè),從紅外光譜圖分析得;3313cm 1處的吸收峰來源于HA的0 - Η伸縮鍵,2931cm 1處的吸收峰來代表C - Η伸縮鍵,1637cm 1處的吸收峰代表-CH2shoulder peak,810andlll0,1637cm 1處的吸收峰代表S1-ο-Si伸縮鍵。綜合以上分析透明質(zhì)酸分子(HA)已經(jīng)包覆到顆粒的表面。
      [0037]實(shí)施例3
      [0038]本發(fā)明的生物光敏劑可用于深層組織的高效強(qiáng)靶向的光動(dòng)力治療。光的波長越大,組織穿透能力越強(qiáng),近紅外光可以到達(dá)組織深層。由于i3-NaYF4:Yb/Er這種晶相的上轉(zhuǎn)換納米顆粒,可以吸收近紅外980nm的激光,而發(fā)射出520nm,540nm和653nm波長的可見光。其上負(fù)載光敏劑,就可以實(shí)現(xiàn)深層組織的光動(dòng)力治療。
      [0039]本發(fā)明將酞菁二氯化鈦和透明質(zhì)酸負(fù)載到介孔二氧化硅包覆的上轉(zhuǎn)換納米顆粒(NaYF4:Yb/Er)上,透明質(zhì)酸可以特異性識(shí)別CD44過量表達(dá)的癌細(xì)胞,例如:結(jié)腸癌細(xì)胞和乳腺癌細(xì)胞等,賦予了生物光敏劑的高靶向性。酞菁二氯化鈦這種光敏劑與上轉(zhuǎn)換納米顆粒之間能量轉(zhuǎn)換效率高,吸收上轉(zhuǎn)換熒光產(chǎn)生大量的單線態(tài)氧,單線態(tài)氧可以損害細(xì)胞膜表面的蛋白質(zhì)和磷脂,從而實(shí)現(xiàn)對(duì)癌細(xì)胞的殺傷功能。本發(fā)明制備的強(qiáng)穿透性和高靶向性的新型生物光敏劑可以有效提高深層組織光動(dòng)力治療的效果。
      【主權(quán)項(xiàng)】
      1.一種生物光敏劑,其特征在于,所述的生物光敏劑的制備過程如下: 1)在介孔二氧化硅包覆的上轉(zhuǎn)換納米顆粒的表面連接上氨基,獲得表面接有氨基的納米顆粒; 2)將酞菁二氯化鈦浸入到表面接有氨基的納米顆粒的介孔二氧化硅層中;獲得負(fù)載有酞菁二氯化鈦的納米顆粒; 3)將負(fù)載有光敏劑酞菁二氯化鈦的納米顆粒表面修飾透明質(zhì)酸完成制備。2.如權(quán)利要求1所述的生物光敏劑,其特征在于,所述的步驟1)是將介孔二氧化硅包覆的上轉(zhuǎn)換納米顆粒溶解在甲苯中,再加入APTMS制成混合溶液,混合溶液進(jìn)行密封常溫旋轉(zhuǎn);旋轉(zhuǎn)結(jié)束后離心收集納米顆粒,用甲苯清洗風(fēng)干后獲得表面接有氨基的納米顆粒。3.如權(quán)利要求2所述的生物光敏劑,其特征在于,所述的混合溶液中介孔二氧化硅包覆的上轉(zhuǎn)換納米顆粒的濃度為2-10mg/ml。4.如權(quán)利要求2所述的生物光敏劑,其特征在于,所述的混合溶液中甲苯和APTMS的體積比為40-60: 1 ο5.如權(quán)利要求1所述的生物光敏劑,其特征在于,所述的步驟2)是將將酞菁二氯化鈦溶于吡啶溶液中,密封溶解后進(jìn)行離心,取上清液;將表面接有氨基的納米顆粒浸入上清液中,密閉進(jìn)行懸浮,然后離心收集納米顆粒,將顆粒清洗后存放于MES緩沖液中,獲得負(fù)載有酞菁二氯化鈦的納米顆粒。6.如權(quán)利要求5所述的生物光敏劑,其特征在于,所述的顆粒清洗是用PBS溶液進(jìn)行的。7.如權(quán)利要求1所述的生物光敏劑,其特征在于,所述的步驟3)是將透明質(zhì)酸活化后加入MES緩沖液中,并加入步驟2)制備的負(fù)載有酞菁二氯化鈦的納米顆粒,溶液密封超聲室溫旋轉(zhuǎn)進(jìn)行酰胺化反應(yīng)制成產(chǎn)品。8.如權(quán)利要求7所述的生物光敏劑,其特征在于,所述的MES緩沖液中EDC和NHS對(duì)透明質(zhì)酸的作用終濃度為l_3mg/ml。
      【專利摘要】本發(fā)明的目的是提供一種生物光敏劑,即一種強(qiáng)穿透性和高靶向性的新型生物光敏劑.本發(fā)明將酞菁二氯化鈦和透明質(zhì)酸以合適的負(fù)載順序和高效的結(jié)合方式對(duì)納米顆粒進(jìn)行修飾,修飾后的上轉(zhuǎn)換納米顆粒有高的單線態(tài)氧的產(chǎn)率,和對(duì)過量表達(dá)CD44蛋白的細(xì)胞的特異性識(shí)別的高靶向功能。
      【IPC分類】A61K9/14, A61K47/04, A61K47/36, A61K41/00, A61P35/00
      【公開號(hào)】CN105363032
      【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510875313
      【發(fā)明人】姜磊, 燕照霞, 劉涵云, 楊麗敏, 馬洪超
      【申請(qǐng)人】中國石油大學(xué)(華東)
      【公開日】2016年3月2日
      【申請(qǐng)日】2015年12月3日
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