例用于說(shuō)明本發(fā)明而非對(duì)其進(jìn)行限制。 實(shí)施例
[0144] 細(xì)胞
[0145] 從ATCC獲得MV4 ;11(CRL-9591)細(xì)胞。根據(jù)英國(guó)維爾康姆基金會(huì)桑格研究所 (WellcomeTrustSangerInstitute,UK)的癌癥體細(xì)胞突變目錄（CatalogueofSomatic MutationsinCancer)，該細(xì)胞系攜帶有FLT3基因中的突變。將細(xì)胞在37°C和5 % 0)2培 養(yǎng)于T175組織培養(yǎng)瓶中。使用的培養(yǎng)基是補(bǔ)充有10%胎牛血清、1 %NEAA、1 %丙酮酸鈉和 1%谷氨酰胺的IMDM。
[0146] 小鼠
[0147] 小鼠為 8-9 周齡的無(wú)胸腺雌性BomTac:購(gòu)自Taconic,Denmark的NMRI_Foxnlnu。 在到達(dá)動(dòng)物設(shè)施后，允許小鼠適應(yīng)環(huán)境條件至少3周，然后將它們用于實(shí)驗(yàn)。將它們按每組 5只在標(biāo)準(zhǔn)條件（21. 5±1. 5°C溫度和55±10%濕度）下養(yǎng)在Macrolon'Π型籠中。標(biāo)準(zhǔn) 化的飲食（PR0V頂IKLIBA)和熱壓處理過(guò)的自來(lái)水供其任取。
[0148] 腫瘤的發(fā)生（Establishmentoftumors)，隨機(jī)化
[0149] 為了發(fā)生皮下腫瘤，收取MV4 ;11細(xì)胞并使其按5xl07個(gè)細(xì)胞/ml懸浮于PBS+5% FCS中。然后將含有2. 5xl06個(gè)細(xì)胞的50μ1細(xì)胞懸液皮下注射入小鼠的右側(cè)腋下（每只 小鼠1個(gè)部位）。在注射前，以1:1的比例向細(xì)胞懸液添加生長(zhǎng)因子減少BDMatrigel?基 質(zhì)（BDBiosciences)。當(dāng)腫瘤充分發(fā)生并已達(dá)到約90mm3的腫瘤體積時(shí)，在注射細(xì)胞12天 后將小鼠在治療組和溶媒對(duì)照組之間隨機(jī)分配。
[0150] 測(cè)試化合物的施用
[0151] 將伏拉塞替（BI6727)溶解于鹽酸（0. 1N)中，用0. 9 %NaCl稀釋并靜脈注射至尾 靜脈中。使用l〇ml/kg體重的施用體積。每個(gè)注射日現(xiàn)配溶液。
[0152] 將地西他濱溶解于0. 9%NaCl中并進(jìn)行腹膜腔內(nèi)注射施用。使用10ml/kg體重的 施用體積。
[0153] 將施用溶液于4°C儲(chǔ)存數(shù)天。
[0154] 監(jiān)測(cè)腫瘤生長(zhǎng)和副作用
[0155] 每周用卡尺測(cè)量腫瘤直徑3次。根據(jù)公式"腫瘤體積=長(zhǎng)度*直徑2*π/6"計(jì)算 每個(gè)腫瘤的體積[以_3計(jì)]。為監(jiān)測(cè)治療的副作用，每天檢查小鼠的異常并每周3次測(cè)定 體重。當(dāng)對(duì)照腫瘤達(dá)到平均約1100mm3的尺寸時(shí)，在研究結(jié)束時(shí)處死動(dòng)物。此外，出于倫理 考慮，在研究早期處死腫瘤尺寸超過(guò)2000mm3的動(dòng)物。
[0156] 實(shí)施例1:來(lái)源于人AML細(xì)胞系MV4 ;11的裸小鼠異種移植模型
[0157] 比較了用下述物質(zhì)來(lái)治療小鼠的異種移植物的實(shí)驗(yàn)結(jié)果：?jiǎn)为?dú)的伏拉塞替 (10mg/kg，靜脈注射）每周施用1次，單獨(dú)的地西他濱（1.25mg/kg，腹膜腔內(nèi)注射）每周在 連續(xù)兩天施用2次，以及伏拉塞替/地西他濱的組合（10mg/kg靜脈注射/1. 25mg/kg腹膜 腔內(nèi)注射），該結(jié)果在圖1中顯示。處理動(dòng)物21天。
[0158] 每周1次靜脈注射10mg/kg伏拉塞替連同每周在連續(xù)兩天2次腹膜腔內(nèi)注射 1. 25mg/kg地西他濱的組合（T/C= 40% ;T/C:治療的腫瘤的中位腫瘤體積與對(duì)照腫瘤的 中位腫瘤體積之比）顯示出與任一單藥劑治療（伏拉塞替：T/C= 76% ;地西他濱：T/C= 59%)相比降低的腫瘤生長(zhǎng)。有益的副作用特性的證據(jù)為，組合組中的體重增加與單藥劑 伏拉塞替或單藥劑地西他濱相當(dāng)，如圖2中所示。
[0159] 實(shí)施例2:來(lái)源于人AML細(xì)胞系MV4 ;11的裸小鼠異種移植模型
[0160] 比較了用下述物質(zhì)來(lái)治療小鼠的異種移植物的實(shí)驗(yàn)結(jié)果：?jiǎn)为?dú)的伏拉塞替 (10mg/kg，靜脈注射）每周施用1次，單獨(dú)的地西他濱（2. 5mg/kg，腹膜腔內(nèi)注射）每周在連 續(xù)兩天施用2次，以及伏拉塞替/地西他濱的組合（10mg/kg靜脈注射/2. 5mg/kg腹膜腔內(nèi) 注射），該結(jié)果在圖3中顯示。處理動(dòng)物21天。
[0161] 每周1次靜脈注射10mg/kg伏拉塞替連同每周在連續(xù)兩天2次腹膜腔內(nèi)注射 2. 5mg/kg地西他濱的組合（T/C= 22%)顯示出與任一單藥劑治療（伏拉塞替：T/C= 76%; 地西他濱：T/C= 53% )相比降低的腫瘤生長(zhǎng)。有益的副作用特性的證據(jù)為，組合組中的體 重增加與單藥劑伏拉塞替或單藥劑地西他濱相當(dāng)，如圖4中所示。
[0162] 實(shí)施例3:來(lái)源于人AML細(xì)胞系MV4 ; 11的裸小鼠異種移植模型
[0163] 比較了用下述物質(zhì)來(lái)治療小鼠的異種移植物的實(shí)驗(yàn)結(jié)果：?jiǎn)为?dú)的伏拉塞替 (20mg/kg，靜脈注射）每周施用1次，單獨(dú)的地西他濱（1.25mg/kg，腹膜腔內(nèi)注射）每周在 連續(xù)兩天施用2次，以及伏拉塞替/地西他濱的組合（20mg/kg靜脈注射/1. 25mg/kg腹膜 腔內(nèi)注射），該結(jié)果在圖5中顯示。處理動(dòng)物21天。
[0164] 每周1次靜脈注射20mg/kg伏拉塞替連同每周在連續(xù)兩天2次腹膜腔內(nèi)注射 1. 25mg/kg地西他濱的組合（T/C= 20% )顯示出與任一單藥劑治療（伏拉塞替：T/C= 38% ;地西他濱：T/C= 59% )相比降低的腫瘤生長(zhǎng)。有益的副作用特性的證據(jù)為，組合組 中的體重增加與單藥劑伏拉塞替或單藥劑地西他濱相當(dāng)，如圖6中所示。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 任選地呈其藥學(xué)上可接受的鹽或其水合物的形式的伏拉塞替用于治療急性骨髓性 白血病和/或骨髓增生異常綜合征的用途，其特征為所述伏拉塞替與地西他濱組合施用， 所述地西他濱任選地呈其藥學(xué)上可接受的鹽或其水合物的形式，其中兩種活性成分同時(shí)施 用、分開施用、或是依次施用。2. 任選地呈其藥學(xué)上可接受的鹽或其水合物的形式的地西他濱用于治療急性骨髓性 白血病和/或骨髓增生異常綜合征的用途，其特征為所述地西他濱與伏拉塞替組合施用， 所述伏拉塞替任選地呈其藥學(xué)上可接受的鹽或其水合物的形式，其中兩種活性成分同時(shí)施 用、分開施用、或是依次施用。3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2的任選地呈其藥學(xué)上可接受的鹽或其水合物的形式的伏拉塞替 用于治療急性骨髓性白血病和/或骨髓增生異常綜合征的用途，其特征為根據(jù)包含如下步 驟或由如下步驟組成的劑量方案（I)，將所述伏拉塞替與任選地呈其藥學(xué)上可接受的鹽或 其水合物的形式的地西他濱對(duì)罹患急性骨髓性白血病和/或骨髓增生異常綜合征的患者 進(jìn)行組合施用： a) 在4周治療周期期間的最少1天施用有效量的伏拉塞替或其藥學(xué)上可接受的鹽或其 水合物，和 b) 在所述4周治療周期期間的最少1天施用有效量的地西他濱。4. 根據(jù)權(quán)利要求1或2的任選地呈其藥學(xué)上可接受的鹽或其水合物的形式的伏拉塞替 用于治療急性骨髓性白血病和/或骨髓增生異常綜合征的用途，其特征為根據(jù)包含如下步 驟或由如下步驟組成的劑量方案（I)，將所述伏拉塞替與任選地呈其藥學(xué)上可接受的鹽或 其水合物的形式的地西他濱對(duì)罹患急性骨髓性白血病和/或骨髓增生異常綜合征的患者 進(jìn)行組合施用： a) 在4周治療周期期間的最少2天施用有效量的伏拉塞替或其藥學(xué)上可接受的鹽或其 水合物，和 b) 在所述4周治療周期期間的最少1天施用有效量的地西他濱。5. 根據(jù)權(quán)利要求1-4的一項(xiàng)或多項(xiàng)的伏拉塞替或其藥學(xué)上可接受的鹽或其水合物的 用途，其中在施用的每天中，施用250至500mg的伏拉塞替或其藥學(xué)上可接受的鹽或其水合 物。6. 根據(jù)權(quán)利要求1-5的一項(xiàng)或多項(xiàng)的伏拉塞替或其藥學(xué)上可接受的鹽或其水合物的 用途，其中在施用的每天中，施用5至50mg/m2體表面積的地西他濱。7. 根據(jù)權(quán)利要求1-6的一項(xiàng)或多項(xiàng)的伏拉塞替或其藥學(xué)上可接受的鹽或其水合物的 用途，其中在所述4周治療周期的5天施用地西他濱。8. 根據(jù)權(quán)利要求1-6的一項(xiàng)或多項(xiàng)的伏拉塞替或其藥學(xué)上可接受的鹽或其水合物的 用途，其中在所述4周治療周期的10天施用地西他濱。9. 根據(jù)權(quán)利要求1-8的一項(xiàng)或多項(xiàng)的伏拉塞替或其藥學(xué)上可接受的鹽或其水合物的 用途，其特征為患有所述急性骨髓性白血病和/或骨髓增生異常綜合征的患者大于60歲。10. 藥物組合物，其包含有效量的伏拉塞替或其藥學(xué)上可接受的鹽或其水合物，和有效 量的地西他濱或其藥學(xué)上可接受的鹽或其水合物。11. 藥物試劑盒，其包含第一隔室和第二隔室，所述第一隔室包含有效量的伏拉塞替或 其藥學(xué)上可接受的鹽或其水合物，所述第二隔室包含有效量的地西他濱或其藥學(xué)上可接受 的鹽或其水合物。12. 根據(jù)權(quán)利要求10或11的藥物組合物或藥物試劑盒，其用于同時(shí)、分開或依次使用， 作為治療急性骨髓性白血病和/或骨髓增生異常綜合征的藥劑。13. -種藥物組合，特征為其包含任選地呈其藥學(xué)上可接受的鹽或其水合物的形式的 伏拉塞替和任選地呈其藥學(xué)上可接受的鹽或其水合物的形式的地西他濱，其用于同時(shí)、分 開或依次地使用作為治療急性骨髓性白血病和/或骨髓增生異常綜合征的藥劑的活性成 分。
【專利摘要】本發(fā)明涉及伏拉塞替(Volasertib)或其鹽或其水合物與地西他濱(Decitabine)或其鹽或其水合物組合用于治療罹患急性骨髓性白血病(AML)或骨髓增生異常綜合征(MDS)的患者的用途。
【IPC分類】A61K31/519, A61K31/7068, A61K45/06, A61P35/02, A61P7/00
【公開號(hào)】CN105407893
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201480041933
【發(fā)明人】D·魯?shù)婪? T·陶布
【申請(qǐng)人】勃林格殷格翰國(guó)際有限公司
【公開日】2016年3月16日
【申請(qǐng)日】2014年7月24日
【公告號(hào)】CA2919294A1, EP3024465A1, US20150031642, WO2015011234A1