有包含SEQIDNO: 1的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū) 化CVR)和包含SEQID^:2的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)化0^時。
[0045] 18.如第17項(xiàng)中的方法，其中人抗體具有IgGl重鏈恒定區(qū)。
[0046] 19.如第17項(xiàng)中的方法，其中人抗體具有IgG4重鏈恒定區(qū)。
[0047] 20.如第17項(xiàng)中的方法，其中人抗體是F油片段。
[004引 21.如第17項(xiàng)中的方法，其中人抗體是單鏈Fv片段。
[0049] 22. -種在人受試者中抑制人TNFa活性的方法，其中所述人受試者患有其中 TNFa活性有害的失調(diào)，所述方法包括每兩周皮下施用一種組合物，所述組合物包含人 抗TNFa抗體，其中所述人抗體或其抗原結(jié)合部分具有輕鏈可變區(qū)化CVR)或重鏈可變區(qū) (HCVR)，輕鏈可變區(qū)具有CDR3結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域包含選自SEQIDN0:3、SEQIDN0:11、SEQ IDNO: 12、沈QIDNO: 13、沈QIDNO: 14、沈QIDNO: 15、沈QIDNO: 16、沈QIDNO: 17、沈Q IDNO:18、沈QIDNO:19、沈QIDNO:20、沈QIDNO:21、沈QIDNO:22、沈QIDNO:23、沈Q IDN0:24、SEQIDN0:25、SEQID^:26的氨基酸序列；重鏈可變區(qū)具有〔033結(jié)構(gòu)域，該結(jié) 構(gòu)域包含選自沈QIDNO:4、SEQIDNO:27、沈QIDNO:28、沈QIDNO:29、沈QIDNO:30、 沈QIDNO:31、沈QIDNO:32、沈QIDNO:33 和沈QIDNO:34 的氨基酸序列。
[0050] 23. -種在人受試者中抑制人TNFa活性的方法，所述人受試者患有其中TNFa活 性有害的失調(diào)，所述方法包括每兩周皮下施用一種組合物，所述組合物包含人抗TNFα抗 體，其中所述人抗體是D2E7抗體或其抗原結(jié)合部分。
[0051] 24. -種試劑盒，它包含一種制劑，所述制劑包含：
[0052]a) -種藥物組合物，其包含抗TNFα抗體和藥學(xué)上可接受的載體；
[0053]b)每兩周施用一次藥物組合物W治療失調(diào)的說明，其中抗TNFa抗體或其抗原結(jié) 合部分在治療失調(diào)時有效。
[0054] 25.如第24項(xiàng)中所述的試劑盒，其中所述抗體包含第2-22項(xiàng)的任一項(xiàng)中的抗體或 其抗原結(jié)合部分。
[00巧]26. -種包含藥物組合物的預(yù)裝注射器，所述藥物組合物中包含抗TNFα抗體和 藥學(xué)上可接受的載體。
[0056] 27.如第26項(xiàng)中的注射器，其中人抗體包含第2-22項(xiàng)任一項(xiàng)中的抗體或其抗原結(jié) 合部分。
[0057] 28. -種治療失調(diào)的方法，其中抗TNFa抗體或其抗原結(jié)合部分在治療失調(diào)時有 效，所述方法包括給人受試者皮下施用一種組合物，所述組合物包含抗TNFα抗體或其抗 原結(jié)合部分W及氨甲蝶嶺，用W治療失調(diào)。
[0058] 29.如第28項(xiàng)中的方法，其中氨甲蝶嶺與抗TNFα抗體或其抗原結(jié)合部分一起施 用。
[0059] 30.如第28項(xiàng)中的方法，其中氨甲蝶嶺在施用抗TNFα抗體或其抗原結(jié)合部分前 施用。
[0060] 31.如第28項(xiàng)中的方法，其中氨甲蝶嶺在施用抗TNFa抗體或其抗原結(jié)合部分后 施用。
[0061] 32.如第28項(xiàng)中的方法，其中抗TNFa抗體是人抗TNFa抗體或其抗原結(jié)合部分。
[0062]33.如第28項(xiàng)中的方法，其中由表面等離子共振測定，人抗體或其抗原結(jié)合部分 WKd為1X10 8Μ或更低，Kwf速率常數(shù)為1X10^秒或更低從人TNFa上解離，而且在標(biāo)準(zhǔn) 的體外L929檢測方法中WICw為1 X 107m或更低中和人TNFα細(xì)胞毒性。
[006引 34.如第28項(xiàng)中的方法，其中人抗體或其抗原結(jié)合部分WKw謎率常數(shù)為5X10 ^ 秒或更低從人TNFa上解離。
[0064] 35.如第28項(xiàng)中的方法，其中人抗體或其抗原結(jié)合部分WKw謎率常數(shù)為1X10 ^ 秒或更低從人TNFa上解離。
[0065] 36.如第28項(xiàng)中的方法，其中人抗體或其抗原結(jié)合部分，在標(biāo)準(zhǔn)體外L929檢測方 法中，WICs。為1X10 8M或更低中和人TNFα細(xì)胞毒性。
[0066] 37.如第28項(xiàng)中的方法，其中人抗體或其抗原結(jié)合部分，在標(biāo)準(zhǔn)體外L929檢測方 法中，WICs。為1 X 10 9Μ或更低中和人TNFα細(xì)胞毒性。
[0067] 38.如第28項(xiàng)中的方法，其中人抗體或其抗原結(jié)合部分，在標(biāo)準(zhǔn)體外L929檢測方 法中，WICs。為1X101°Μ或更低中和人TNF α細(xì)胞毒性。
[0068] 39.如第28項(xiàng)中的方法，其中人抗體或其抗原結(jié)合部分是一種重組抗體或其重組 的抗原結(jié)合部分。
[0069] 40.如第28項(xiàng)中的方法，其中人抗體或其抗原結(jié)合部分能夠抑制人TNFa誘導(dǎo)的 ELAM-1在人廝帶靜脈內(nèi)皮細(xì)胞上的表達(dá)。
[0070] 41. -種在人受試者中抑制人TNFa活性的方法，所述人受試者患有其中TNFa活 性有害的失調(diào)，所述方法包括給人受試者施用氨甲蝶嶺并皮下施用人抗TNFa抗體，其中 所述人抗體或其抗原結(jié)合部分具有下列特性：
[0071] a)由表面等離子共振測定，WKw速率常數(shù)為1X10 ^秒或更低從人TNFα上解 離；
[0072]b)具有輕鏈CDR3結(jié)構(gòu)域，其包含SEQIDΝ0:3的氨基酸序列，或通過在1、4、5、7 或8位進(jìn)行單一丙氨酸替代，或在1、3、4、6、7、8和/或9位進(jìn)行1至5個保守氨基酸替代 由SEQIDNO:3修飾的氨基酸序列；
[0073] C)具有重鏈CDR3結(jié)構(gòu)域，其包含SEQIDNO: 4的氨基酸序列，或通過在2、3、4、5、 6、8、9、10或11位進(jìn)行單一丙氨酸替代，或在2、3、4、5、6、8、9、10、11和/或12位進(jìn)行1至 5個保守氨基酸替代由SEQIDN0:4修飾的氨基酸序列。
[0074] 42.如第41項(xiàng)中的方法，其中所述人抗體或其抗原結(jié)合部分WKw速率常數(shù)為 5 X 10^秒或更低從人TNFα上解離。
[0075] 43.如第41項(xiàng)中的方法，其中所述人抗體或其抗原結(jié)合部分WKw速率常數(shù)為 IX 10^秒或更低從人TNFa上解離。
[007引44. 一種在人受試者中抑制人TNFa活性的方法，所述人受試者患有其中TNFa活 性有害的失調(diào)，所述方法包括施用氨甲蝶嶺并皮下施用人抗TNFa抗體，其中人抗體或其 抗原結(jié)合部分具有輕鏈可變區(qū)化CVR)和重鏈可變區(qū)（HCVR)，輕鏈可變區(qū)具有CDR3結(jié)構(gòu)域， 該結(jié)構(gòu)域包含SEQIDN0:3的氨基酸序列，或通過在1、4、5、7或8位進(jìn)行單一丙氨酸替代由 SEQIDNO: 3修飾的氨基酸序列；重鏈可變區(qū)具有CDR3結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域包含SEQIDNO: 4 的氨基酸序列，或通過在2、3、4、5、6、8、9、10或11位進(jìn)行單一丙氨酸替代由56010^:4 修飾的氨基酸序列。
[0077] 45.如第44項(xiàng)中的方法，其中人抗體或其抗原結(jié)合部分的LCVR進(jìn)一步具有包含 569 10^:5的氨基酸序列的〔032結(jié)構(gòu)域，版：￥1?進(jìn)一步具有包含569 10^:6的氨基酸序 列的CDR2結(jié)構(gòu)域。
[0078] 46.如第44項(xiàng)中的方法，其中人抗體或其抗原結(jié)合部分的LCVR進(jìn)一步具有包含 569 10^:7的氨基酸序列的〔031結(jié)構(gòu)域，版：￥1?進(jìn)一步具有包含569 10^:8的氨基酸序 列的CDR1結(jié)構(gòu)域。
[0079] 47. -種在人受試者中抑制人TNFa活性的方法，所述人受試者患有其中TNFa活 性有害的失調(diào)，所述方法包括施用氨甲蝶嶺并皮下施用人抗TNFa抗體，其中所述人抗體 或其抗原結(jié)合部分具有包含SEQIDNO: 1的氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)化CVR)，和包含SEQ IDNO:2的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)化CVR)。
[0080] 48.如第47項(xiàng)中的方法，其中人抗體具有IgGl重鏈恒定區(qū)。
[0081] 49.如第47項(xiàng)中的方法，其中人抗體具有IgG4重鏈恒定區(qū)。
[0082] 50.如第47項(xiàng)中的方法，其中人抗體是F油片段。
[0083] 51.如第47項(xiàng)中的方法，其中人抗體是單鏈Fv片段。
[0084] 52. -種在人受試者中抑制人TNFα活性的方法，所述人受試者患有其中TNFα 活性有害的失調(diào)，所述方法包括施用氨甲蝶嶺并皮下施用人抗TNFa抗體或其抗原結(jié)合部 分，其中所述人抗體或其抗原結(jié)合部分具有輕鏈可變區(qū)化CVR)或重鏈可變區(qū)（HCVR)，輕鏈 可變區(qū)具有CDR3結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域包含選自SEQIDN0:3、SEQIDN0:11、沈QIDN0:12、SEQ IDNO: 13、沈QIDNO: 14、沈QIDNO: 15、沈QIDNO: 16、沈QIDNO: 17、沈QIDNO: 18、沈Q IDNO:19、沈QIDNO:20、沈QIDNO:21、沈QIDNO:22、沈QIDNO:23、沈QIDNO:24、沈Q IDN0:25、SEQIDN0:26的氨基酸序列；重鏈可變區(qū)具有CDR3結(jié)構(gòu)域，該結(jié)構(gòu)域包含選自 沈QIDN0:4、SEQIDN0:27、沈QIDN0:28、沈QIDN0:29、沈QIDN0:30、沈QIDN0:31、 沈QIDNO:32、沈QIDNO:33和沈QIDNO:34的氨基酸序列。
[00財(cái) 53. -種在人受試者中抑制人TNFa活性的方法，所述人受試者患有其中TNFa活 性有害的失調(diào)，所述方法包括施用氨甲蝶嶺并皮下施用人抗TNFa抗體，其中所述人抗體 是D2E7抗體或其抗原結(jié)合部分。
[0086] 54. -種試劑盒，它包含一種制劑，所述制劑包含：
[0087] a) -種藥物組合物，其包含抗TNFa抗體或其抗原結(jié)合部分、氨甲蝶嶺和藥學(xué)上 可接受的載體；
[0088]b)皮下施用用于治療失調(diào)的藥物組合物的說明，其中所述失調(diào)中TNFa活性是有 害的。
[0089] 55.如第54項(xiàng)中的試劑盒，其中所述抗體包含第32-51項(xiàng)中任一項(xiàng)中的抗體或其 抗原結(jié)合部分。
[0090] 56. -種包含藥物組合物的預(yù)裝注射器，所述藥物組合物中包含抗TNFa抗體、氨 甲蝶嶺和藥學(xué)上可接受的載體。
[0091] 57.如第56項(xiàng)中的注射器，其中所述抗體包含第32-52項(xiàng)任一項(xiàng)中的抗體或其抗 原結(jié)合部分。
[0092] 58.如第1或28項(xiàng)中的方法，其中所述失調(diào)是敗血癥。
[009引59.如第1或28項(xiàng)中的方法，其中所述抗體與細(xì)胞因子白介素-6(比-6) -起給人 受試者施用，或W血清或血漿IL-6濃度在5(K)pg/mlW上給人受試者施用。
[0094] 60.如第1或28項(xiàng)中的方法，其中所述疾病是自身免疫性疾病。
[0095] 61.如第60項(xiàng)中的方法，其中自身免疫性疾病選自類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性脊 椎炎、骨關(guān)節(jié)炎和痛風(fēng)性關(guān)節(jié)炎。
[0096] 62.如第61項(xiàng)中的方法，其中自身免疫性疾病是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎。
[0097] 63.如第60項(xiàng)中的方法，其中自身免疫性疾病選自變態(tài)反應(yīng)、多發(fā)性硬化病、自免 性糖尿病、自免性色素層炎和腎病綜合征。
[009引 64.如第1或28項(xiàng)中的方法，其中失調(diào)是一種傳染病。
[0099] 65.如第1或28項(xiàng)中的方法，其中失調(diào)是移植排斥或移植物抗宿主病。
[0100] 66.如第1或28項(xiàng)中的方法，其中失調(diào)是惡性腫瘤。
[0101] 67.如第1或28項(xiàng)中的方法，其中失調(diào)是肺病。
[0102] 68.如第1或28項(xiàng)中的方法，其中失調(diào)是腸道失調(diào)。
[0103] 69.如第1或28項(xiàng)中的方法，其中失調(diào)是屯、臟失調(diào)。
[0104] 70.如第1或28項(xiàng)中的方法，其中失調(diào)選自炎性骨病、骨吸收疾病、酒精性肝炎、病 毒性肝炎、凝血障礙、燒傷、再輸注損傷、癒痕瘤形成、癒痕組織形成和發(fā)熱。
[0105] 71. -種試劑盒，其包含：
[0106]a)-種藥物組合物，其包含人抗TNFa抗體或其抗原結(jié)合部分，和藥學(xué)上可接受 的載體；
[0107]b) -種藥物組合物，其包含氨甲蝶嶺和藥學(xué)上可接受的載體；
[0108]C)皮下施用抗TNFα抗體藥物組合物和在施用抗TNFα抗體藥物組合物之前、之 后或同時施用氨甲蝶嶺藥物組合物的說明。
[0109] 72.如第71項(xiàng)中的試劑盒，其中抗TNFa抗體或其抗原結(jié)合部分是D2E7或其抗原 結(jié)合部分。
[0110] 附圖簡述
[0111] 圖1A和1B顯示了患類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎（RA)患者在每周皮下施用一次D2E7抗體， 共施用12周后的美國風(fēng)濕病學(xué)會20 (ACR20)和ACR50反應(yīng)結(jié)果（圖1A)，或在隔周皮下施 用一次D2E7抗體和氨甲蝶嶺，共施用24周后的美國風(fēng)濕病學(xué)會20(ACR20)和ACR50反應(yīng) 結(jié)果（圖1B)。運(yùn)些資料表明隔周施用與每周施用一樣有效。
[0112] 圖2顯示了患類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者在隔周皮下施用一次D2E7抗體和氨甲蝶嶺，施 用24周后的ACR20、ACR50和ACR70反應(yīng)結(jié)果。
[0113] 圖3顯示了患類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者在隔周皮下施用一次D2E7抗體和氨甲蝶嶺，施 用24周后的疼痛關(guān)節(jié)計(jì)數(shù)（3A)和腫脹關(guān)節(jié)計(jì)數(shù)（3B)隨時間的結(jié)果。
[0114] 圖4顯示了患類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者在隔周皮下施用一次D2E7抗體和氨甲蝶嶺，施 用24周后的體檢結(jié)果簡表（SF-36)。RP，身體狀況（rolephysical) ;PF，身體功能；BP，身 體疼痛；GH，總體健康狀態(tài)；V，活力；SF，社會功能；RE，情緒狀況；和ME，精神健康。
[0115] 圖5顯示了患類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎患者在靜脈注射一次D2E7抗體和氨甲蝶嶺后ACR 反應(yīng)的百分比。
[011引發(fā)明詳述
[0117] 本發(fā)明設(shè)及治療失調(diào)的方法，在所述失調(diào)中施用抗TNFa抗體對患者有益，所述 方法包括施用分離的人抗體或其抗原結(jié)合部分，所述抗體或其抗原結(jié)合部分W高親和力、 低解離速率和高的中和能力與人TNFa結(jié)合，從而治療失調(diào)。本發(fā)明的各個方面設(shè)及用抗 體和抗體片段進(jìn)行治療，W及它們的藥物組合物。
[0118] 為了使本發(fā)明更易于理解，首先定義某些術(shù)語。
[0119] 本文所用術(shù)語"用藥（dosing)"，是指施用一種物質(zhì)（如抗TNFa抗體）W獲得治 療目的（如治療TNFα相關(guān)的失調(diào)）。
[0120] 本文所用術(shù)語"兩周一次用藥方案"，"兩周一次用藥"，"兩周一次施用"，是指為獲 得治療目的（如治療TNFa相關(guān)的疾?。┒o受試者用藥（如抗TNFa抗體）的時間間隔。 兩周一次用藥方案并不包括每周一次用藥方案。優(yōu)選每9-19天用藥一次，進(jìn)一步優(yōu)選的是 每11-17天用藥一次，更優(yōu)選的是每13-15天用藥一次，最優(yōu)選的是每14天用藥一次。
[012。 本文所用術(shù)語"聯(lián)合治療"是指施用兩種或兩種W上的治療物質(zhì)，如抗TNFα抗體 和氨甲蝶嶺。氨甲蝶嶺可W與抗TNFa抗體同時施用，也可W在施用抗TNFa抗體前施用， 或者在施用抗TNFa抗體后施用。
[0122] 本文所用術(shù)語"人TNFa"(縮寫為hTNFa或hTNF)，是指一種人的細(xì)胞因子， 該因子W分泌形式存在時分子量為17kD，W膜相關(guān)形式存在時分子量為26kD，生物活 性形式是由17kD的分子W非共價鍵方式結(jié)合的Ξ聚體形式存在。TNFa的結(jié)構(gòu)在如 化nnica'D等（1984)Nature312 :724-729 ;Davis，J.M.等（1987)Biochemistry26: 1322-1326和化nes，E.Y.等化Uire338 :225-228中有進(jìn)一步的描述。人TNFa包括重組 人TNFa(riiTNFa)，該蛋白可W通過標(biāo)準(zhǔn)的重組表達(dá)方法制備或購自商品化的產(chǎn)品（R&D systems，catalogNo. 210-TA,Minneapolis，MN)。
[0123] 本文所用術(shù)語"抗體"，是指由四條多膚鏈組成的免疫球蛋白分子，其中兩條重鏈 (H) 和兩條輕鏈（L)通過二硫鍵相互鏈接。每條重鏈又由重鏈可變區(qū)（縮寫為HCVR或VH) 和重鏈恒定區(qū)組成，重鏈恒定區(qū)由CH1、C肥和C冊Ξ個結(jié)構(gòu)域組成；每條輕鏈又由輕鏈可 變區(qū)（縮寫為LCVR或VL)和輕鏈恒定區(qū)組成，輕鏈恒定區(qū)由化一個結(jié)構(gòu)域組成。VH和化 又進(jìn)一步的細(xì)分為超變區(qū)，命名為互補(bǔ)決定區(qū)（CDR)，分散分布的較保守的區(qū)域，命名為框 架區(qū)（FR)。每條VH和化又由Ξ個CDR區(qū)和4個FR區(qū)組成，從氨基端至簇基端按照下列順 序排列：FR1，CDR1，F(xiàn)R2,CDR2,FR3,CDR3,FR4。
[0124] 本文所用的術(shù)語抗體的"抗原結(jié)合部分"（或簡寫為"抗體部分"），是指抗體的一 個或多個片段，該片段保留了特異性與抗原（如hTNFa)結(jié)合的能力。抗體的抗原結(jié)合功 能可由全長抗體的片段來實(shí)現(xiàn)。抗體的"抗原結(jié)合部分"一詞所包含的結(jié)合片段實(shí)例，包括 (I)F油片段，由VL、VH、化和CH1結(jié)構(gòu)域組成的單價片段；似F(油'）2片段，由兩個F油片 段在較鏈區(qū)通過一個二硫鍵結(jié)合在一起的雙價片段；（3)由VH和化組成的Fd片段；(4)由 抗體的單臂的化和VH結(jié)構(gòu)域組成的Fv片段；（5)dAb片段（ward等，（1989)化化re341 : 544-546)，由VH結(jié)構(gòu)域組成；（6)分離的互補(bǔ)決定區(qū)（CDR)。雖然Fv片段的兩個結(jié)構(gòu)域化 和VH是由獨(dú)立的基因編碼，但通過重組方法，可W用合成的接頭鏈接而成為一個蛋白，其 中的化和VH配對形成單價分子（稱為單鏈Fv(scFv);參見Bird等（1988)Science242: 423-426 及Huston等（1988)化tl.Acad.Sci.USA85 :5879-5883)。運(yùn)類單鏈抗體也包括 在抗體的"抗原結(jié)合部分"中。其它形式的單鏈抗體，如di油odies也包括在內(nèi)。Di油odies 是雙價、雙特異性的抗體，其中VH和VL結(jié)構(gòu)域表達(dá)在單一的多膚鏈上，但由于所用的接頭 太短而不能使同一條鏈上的兩個結(jié)構(gòu)域配對，因而迫使其與另一條鏈上的互補(bǔ)結(jié)構(gòu)域配對 而產(chǎn)生了兩個抗原結(jié)合位點(diǎn)（參見Holliger，P.等（1993)P;roc.PfetLAcad.Sci.USA90: 6444-6448 ;Poljak，R.J.等（1994)Structure2 :1121-1123)。
[0125] 進(jìn)一步來講，抗體或其抗原結(jié)合部分可W是一個大的免疫粘附分子的部分，可W 由抗體或抗體部分通過共價或非共價方式與一個或多個其它的蛋白或多膚連接形成。運(yùn) 類免疫粘附分子的實(shí)例包括，用鏈霉抗生物素核屯、區(qū)制得的scFv的四聚體化ipriyanov， S.Μ.等（1995)HumanantibodiesandHybridomas6 :93-101)和用一個半脫氨酸殘基， 一個標(biāo)記膚和C末端多聚組氨酸標(biāo)記而制成的雙價和生物素化的scFv分子化ipriyanov， S.Μ.等（1994)Mol.Immunol. 31 :1047-1058)。用常規(guī)技術(shù)如木瓜蛋白酶或胃蛋白酶分別消 化完整抗體，可W從完整抗體制備抗體部分，如F油和F(油'）2片段。而且，應(yīng)用如本文所 述的標(biāo)準(zhǔn)重組DNA技術(shù)，可W制備抗體、抗體部分和免疫粘附分子。
[0126] 本文所用的術(shù)語"人抗體"，包括那些具有從人種系（germline)免疫球蛋白序列 衍生的可變區(qū)和恒定區(qū)的抗體。本發(fā)明的人抗體可W包括并非由人種系免疫球蛋白序列編 碼的氨基酸殘基（如體外隨機(jī)或位點(diǎn)特異性的突變或體內(nèi)細(xì)胞突變），如在CDR區(qū)，尤其是