化試驗和NK細胞 活性測定；二硝基氟苯誘導(dǎo)小鼠遲發(fā)型變態(tài)反應(yīng)（DTH)試驗；抗體生成細胞檢測和血清溶 血素測定；小鼠碳廓清試驗；小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞試驗。SPF級實驗動物環(huán)境設(shè) 施合格證：SYXK (蘇）2012-0037.全部動物均給予滅菌鼠飼料和滅菌水自由取用。
[0063] 2.劑量設(shè)計
[0064] 成人（按60kg體重計）每日推薦攝入量為1000 mg(總番爺紅素為20mg、其中含 順式番爺紅素不低于3. 2mg),相當(dāng)于16. 7mg/kg b. wt/d,實驗設(shè)人體推薦量的10倍，即每 日167mg/kg b.wt作為中劑量組，上下各1個劑量組：500mg/kg b.wt和83mg/kg b.wt作 為高劑量組和低劑量組（分別相當(dāng)于人體推薦量的30倍和5倍）。分別稱取片劑500mg、 lOOOmg、3000mg加入純凈水使之完全崩解，定容至120ml，經(jīng)口灌胃小鼠，灌胃容積20ml/kg b.wt.，容積對照組以等容積純凈水灌胃，連續(xù)灌胃30d后測各項免疫指標(biāo)。
[0065] 3.結(jié)果
[0066] 3. 1樣品對實驗動物體重的影響
[0067] 實驗終末受試各劑量組小鼠體重和增重分別于溶劑對照組相比無統(tǒng)計學(xué)顯著性 差異（P > 0· 05)。
[0068] 3. 2樣品對臟器/體重比值的影響
[0069] 實驗終末受試各劑量組小鼠胸腺/體比值、脾/體比值與溶劑對照組相比無統(tǒng)計 學(xué)顯著性差異（P > 0. 05)。
[0070] 3. 3細胞免疫
[0071] UConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細胞轉(zhuǎn)化實驗（MTT法）：各各受試物劑量組光密度差值 均高于溶劑對照組，方差分析及兩兩比較顯示低，中劑量組光密度差值與溶劑對照組相比 有統(tǒng)計學(xué)極顯著性和顯著性差異（P < 〇. 01，P < 〇. 05)，該項實驗結(jié)果陽性。
[0072] 2、二硝基氟苯（DNFB)誘導(dǎo)的小鼠遲發(fā)性變態(tài)反應(yīng)（DHT):各組小鼠耳廓腫脹度經(jīng) 方差分析無統(tǒng)計學(xué)顯著差異（P > 〇. 05)，該項實驗結(jié)果陰性。
[0073] -項實驗的兩個劑量組結(jié)果顯陽性，提示優(yōu)選方案產(chǎn)品能增強小鼠細胞免疫功 能。
[0074] 4.體液免疫功能實驗
[0075] 1、抗體生成細胞檢測（瓊脂糖平板法）：各受試物劑量組小鼠溶血斑數(shù)均高于溶 劑對照組，方差分析及兩兩比較顯示低、中劑量組溶血斑數(shù)與對照組相比有統(tǒng)計學(xué)顯著差 異（P < 0. 05)，該項實驗結(jié)果陽性。
[0076] 2、血清溶血素測定：各小鼠血清半數(shù)溶血值（HCJ經(jīng)方差分析無統(tǒng)計學(xué)顯著差異 (P > 0. 05)，該項實驗結(jié)果陰性。
[0077] -項實驗的兩個劑量組結(jié)果顯陽性，提示優(yōu)選方案產(chǎn)品能增強小鼠體液免疫功 能。
[0078] 5.單核-巨噬細胞功能實驗
[0079] (1)小鼠碳廓清實驗：各組小鼠吞噬指數(shù)a值經(jīng)方差分析無統(tǒng)計學(xué)顯著差異（P > 0. 05)，該項實驗結(jié)果陰性。
[0080] (2)小鼠腹腔巨噬細胞吞噬雞紅細胞實驗（滴片法）：各組小鼠的單核--巨噬 細胞吞噬百分率及吞噬指數(shù)經(jīng)方差分析無統(tǒng)計學(xué)顯著性差異（P > 〇. 05)，該項實驗結(jié)果陰 性。
[0081] 6. NK細胞活性測定：
[0082] 受試物各劑量組小鼠的NK細胞活性均高于溶劑對照組，經(jīng)方差分析及兩兩比較 有統(tǒng)計學(xué)顯著性和極顯著性差異（P < 0. 05，p < 0. 01)，該項實驗結(jié)果陽，提示本發(fā)明產(chǎn)品 能增強小鼠 NK細胞活性。
[0083] 以上結(jié)果表明：體液免疫功能、細胞免疫功能和NK細胞活性三方面測定結(jié)果均為 陽性，根據(jù)保健食品增強免疫力功能評價標(biāo)準(zhǔn)，本發(fā)明產(chǎn)品具有增強免疫力的功能。
[0084] 實施例4
[0085] 將番茄紅素油樹脂（含番茄紅素1%，其中順式番茄紅素占比番茄紅素總量的 3. 1% )100g與20g水以及150g倍他環(huán)糊精混合均勻，在30°C條件下攪拌研磨30min，轉(zhuǎn) 移濕料至微波真空干燥箱中，箱體內(nèi)真空度達到0.1 Mpa以下，開啟微波，控制微波工藝參 數(shù)為7w/g，處理60min，得富含順式番茄紅素原料，其中順式番茄紅素占比番茄紅素總量的 15. 2%。將上述的富含順式番茄紅素原料2. 5份粉碎過篩后加入淀粉0. 25份，糊精0. 2 份，交聯(lián)聚維酮0.05份，混合均勻，用1%羧甲基纖維素鈉溶液制軟材，造20目粒，將上述 濕粒轉(zhuǎn)移至微波真空干燥箱中，箱體內(nèi)真空度達到0.1 Mpa以下，開啟微波，控制微波工藝 參數(shù)為7w/g，處理30min，20目整粒，壓片，每片500mg，制成的片劑中順式番茄紅素含量為 ： 0· 05%〇
[0086] 實施例5
[0087] 將蕃茄紅素油樹脂（含番茄紅素6%，其中順式番茄紅素占比番茄紅素總量的 2. 4% ) 100g與50g水以及500g倍他環(huán)糊精混合均勻，在40°C條件下攪拌研磨40min，轉(zhuǎn) 移濕料至微波真空干燥箱中，箱體內(nèi)真空度達到0.1 Mpa以下，開啟微波，控制微波工藝參 數(shù)為8w/g，處理90min，得富含順式番茄紅素原料，其中順式番茄紅素占比番茄紅素總量的 15. 0%。將上述的富含順式番茄紅素原料6份粉碎過篩后加入乳糖1. 5份，羧甲基淀粉鈉 0.05份，混合均勻，用1%聚維酮溶液制軟材，造20目粒，將上述濕粒轉(zhuǎn)移至微波真空干燥 箱中，箱體內(nèi)真空度達到0.1 Mpa以下，開啟微波，控制微波工藝參數(shù)為7w/g，處理30min，20 目整粒，加入二氧化硅0. 05份，硬脂酸鎂0. 05份混合均勻，壓片，每片500mg，制成的片劑中 順式番爺紅素含量為：〇. 11%。
[0088] 實施例6
[0089] 將番茄紅素油樹脂（含番茄紅素10%，其中順式番茄紅素占比番茄紅素總量的 3. 8 % ) 100g與100g水以及500g倍他環(huán)糊精混合均勻，在50°C條件下攪拌研磨50min，轉(zhuǎn) 移濕料至微波真空干燥箱中，箱體內(nèi)真空度達到0.1 Mpa以下，開啟微波，控制微波頻率為 工藝參數(shù)為9w/g，處理120min，得富含順式番茄紅素原料，其中順式番茄紅素占比番茄紅 素總量的12. 6%。將上述的富含順式番茄紅素原料粉6份碎過篩后加入預(yù)膠化淀粉1. 5 份混合均勻，用2%甲基纖維素溶液制軟材，造20目粒，將上述濕粒轉(zhuǎn)移至微波真空干燥箱 中，箱體內(nèi)真空度達到0.1 Mpa以下，開啟微波，控制微波工藝參數(shù)為7w/g，處理30min，20目 整粒，加入二氧化硅0. 05份，硬脂酸鎂0. 05份混合均勻，壓片，每片500mg，制成的片劑中順 式番爺紅素含量為：〇. 16%。
[0090] 實施例7
[0091] 將番茄紅素油樹脂（含番茄紅素20%，其中順式番茄紅素占比番茄紅素總量的 4. 1% )100g與200g水以及1000 g倍他環(huán)糊精混合均勻，在60°C條件下攪拌研磨60min，轉(zhuǎn) 移濕料至微波真空干燥箱中，箱體內(nèi)真空度達到0.1 Mpa以下，開啟微波，控制微波工藝參 數(shù)為l〇w/g，處理180min，得富含順式番茄紅素原料，其中順式番茄紅素占比番茄紅素總量 的16. 1%。將上述的富含順式番茄紅素原料11份粉碎過篩后加入微晶纖維素3份、預(yù)膠化 淀粉1. 5份、羧甲基淀粉鈉0. 1份、乙基纖維素0. 1份，硬脂酸鎂0. 075份、二氧化硅0. 075 份混合均勻，粉末直接壓片，每片485mg，制成片劑，用水溶性包衣粉約0. 5份，包衣增重約 3. 0%至500mg/片，所得片劑的順式番茄紅素含量為：0. 19%。
【主權(quán)項】
1. 一種具有增強免疫力的順式番茄紅素制劑，其特征在于番茄紅素制劑的組成為：富 含順式番茄紅素原料2. 5~11重量份，常規(guī)藥用輔料0. 5~20. 03重量份；所述的順式番 茄紅素制劑中順式番茄紅素質(zhì)量百分含量為0. 05~0. 8%。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有增強免疫力的順式番茄紅素制劑，其特征在于番茄紅素 制劑的組成為：富含順式番茄紅素原料2. 5~11重量份，常規(guī)藥用輔料0. 5~5. 23重量 份。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有增強免疫力的順式番茄紅素制劑，其特征在于所述的制 劑劑型為片劑。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有增強免疫力的順式番茄紅素制劑，其特征在于所述的常 規(guī)藥用輔料為制備片劑時使用的輔料。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的具有增強免疫力的順式番茄紅素制劑，其特征在于所述的常 規(guī)藥用輔料選自淀粉、糊精、乳糖、微晶纖維素、預(yù)膠化淀粉、羧甲基淀粉鈉、硬脂酸鎂、二氧 化硅、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、乙基纖維素、交聯(lián)聚維酮、聚維酮、交聯(lián)羧甲基纖維素 鈉、包衣粉中的1種或多種。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的具有增強免疫力的順式番茄紅素制劑，其特征在于所述的富 含順式番茄紅素原料通過以下方法制備得到： (1) 將番茄紅素含量為1~20wt%的天然番茄紅素油樹脂與β-環(huán)糊精混合均勻，形 成番茄紅素-β-環(huán)糊精混合物； (2) 在真空狀態(tài)下，用加熱處理或微波處理番茄紅素-β-環(huán)糊精混合物，使番茄紅 素-β-環(huán)糊精混合物中的反式番茄紅素轉(zhuǎn)化為順式番茄紅素，直至水份小于10.0%得富 含順式番茄紅素原料。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的具有增強免疫力的順式番茄紅素制劑，其特征在于所述的真 空狀態(tài)的真空度小于〇.IMpa，加熱處理的溫度50°C±5°C，微波處理的條件為7~10w/g， 處理60~180min。8. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的具有增強免疫力的順式番茄紅素制劑，其特征在于將所述的 富含順式番茄紅素原料與常規(guī)藥用輔料混合，按照片劑制備方法制備得到所述的具有增強 免疫力的順式番茄紅素制劑。9. 權(quán)利要求1所述的具有增強免疫力的順式番茄紅素制劑的制備方法，其特征在于包 含以下步驟： (1) 將番茄紅素含量為1~20wt%的天然番茄紅素油樹脂與β-環(huán)糊精混合均勻，形 成番茄紅素-β-環(huán)糊精混合物， (2) 在真空狀態(tài)下，用加熱或微波處理番茄紅素-β-環(huán)糊精混合物，使番茄紅素-β-環(huán)糊精混合物中的反式番茄紅素轉(zhuǎn)化為順式番茄紅素，直至水份小于10. 〇%得富含順式番 茄紅素原料； (3) 將所述的富含順式番茄紅素原料與常規(guī)藥用輔料混合，按照片劑制備方法制備得 到所述的具有增強免疫力的順式番茄紅素制劑。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種具有增強免疫力的順式番茄紅素制劑及其制備方法。番茄紅素制劑的組成為：富含順式番茄紅素原料2.5～11重量份，常規(guī)藥用輔料0.5～5.23重量份；所述的富含順式番茄紅素原料通過以下方法制備得到：(1)將番茄紅素油樹脂與β-環(huán)糊精混合均勻，形成番茄紅素-β-環(huán)糊精混合物，(2)在真空狀態(tài)下，用加熱處理或微波處理番茄紅素-β-環(huán)糊精混合物，使其中的反式番茄紅素轉(zhuǎn)化為順式番茄紅素，直至水份小于10.0％得富含順式番茄紅素原料。本發(fā)明提供了一種具有增強免疫力的順式番茄紅素制劑。該制劑中順式番茄紅素的百分含量達2％，且含量穩(wěn)定，具有增強免疫力的效果。
【IPC分類】A61K9/20, A61P37/04, A61K31/01
【公開號】CN105434406
【申請?zhí)枴緾N201410419964
【發(fā)明人】孫紅日, 董祥玉, 孫曉東
【申請人】南京生磯坊生物工程有限公司
【公開日】2016年3月30日
【申請日】2014年8月22日