環(huán)脂質(zhì)體化ipo)的制備：
[0066] 將溶解在氯仿中的雞蛋銷憐脂（sphingomyelin，SM)、膽固醇（Cholesterol)、 DSPE-PEG2000和DS陽-PEG2000-MAL按摩爾比50:45:5:0.巧日入園底燒瓶中，在70°C下用旋 轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，W轉(zhuǎn)速為10化pm/min旋轉(zhuǎn)并打開真空累抽真空20min形成干燥薄膜，真空干燥儀 過夜干燥W去除殘留的有機溶劑。
[0067] 其中原料SM、膽固醇、DSPE-陽G2000和DS陽-PEG2000-MAL選用的產(chǎn)品與實施例1中 相同。
[0068] 將瓶底的脂質(zhì)薄膜用1 ml SOOmM的構(gòu)祿酸緩沖液(pH = 4.0)進行水化，60°C水浴 超聲30min后，在液氮、50°C水浴反復凍融6次。將產(chǎn)物裝入脂質(zhì)體擠推器，依次通過200nm、 100皿的聚碳酸醋膜各25次，最后過50皿的聚碳酸醋膜15次，開多成直徑在100皿左右的PEG修 飾的空白脂質(zhì)體化ipo)。
[00例 S2、包裹藥物脂質(zhì)體(VCR-Lipo)的制備
[0070]按照抗腫瘤藥物：空白脂質(zhì)體質(zhì)量比1:9，取0.5mg長春新堿溶液（Img/ml)和對應 空白脂質(zhì)體，加入1ml化抽K)4溶液(500mmol/L，pH9.0)調(diào)節(jié)外水相抑為7.2，放置65°C水浴5 分鐘，即制備包裹硫酸長春新堿的納米脂質(zhì)體VCR-Lipo。其中，硫酸長春新堿使用的產(chǎn)品與 實施例1中相同。
[0071 ] S3、連接核酸適配體 SgcS，制備 sgcS/VCR-Lipo;
[0072] 根據(jù)核酸適配體和MAkWG2000-DSPE的摩爾比為1:10,取適量VCR-Lipo，加入適 量核酸適配體sgc8,在氮氣保護環(huán)境下室溫反應24小時。加入2mM的0-半脫胺除去未反應的 MAL基團。用超濾離屯、管對sgc8/VCR-Lipo進行超濾離屯、后，1000 Orpm離屯、IOmin后，加入ImL 去離子水，1000 Orpm離屯、IOmin，洗去游離的硫酸長春新堿、0-半脫胺和核酸適配體SgcS，得 到適配體祀向脂質(zhì)體載藥系統(tǒng)sgc8/VCR-Lipo。
[007；3] 實施例3
[0074] 該實施例3制備適配體祀向脂質(zhì)體載藥系統(tǒng)sgc8/VCR-Lipo。
[0075] SI、PEG長循環(huán)脂質(zhì)體化ipo)的制備：
[0076] 將溶解在氯仿中的雞蛋銷憐脂（sphingomyelin，SM)、膽固醇（Cholesterol)、 DSPE-PEG2000和DS陽-PEG2000-MAL按摩爾比60:35:4:0.4加入園底燒瓶中，在50°C下用旋 轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，W轉(zhuǎn)速為20化pm/min旋轉(zhuǎn)并打開真空累抽真空15min形成干燥薄膜，真空干燥儀 過夜干燥W去除殘留的有機溶劑。
[0077] 其中原料SM、膽固醇、DSPE-陽G2000和DS陽-PEG2000-MAL選用的產(chǎn)品與實施例1中 相同。
[0078] 將瓶底的脂質(zhì)薄膜用1 ml SOOmM的構(gòu)祿酸緩沖液(pH = 4.0)進行水化，55°C水浴 超聲25min后，在液氮、55°C水浴反復凍融4次。將產(chǎn)物裝入脂質(zhì)體擠推器，依次通過200nm、 100皿的聚碳酸醋膜各15次，最后過50皿的聚碳酸醋膜25次，開多成直徑在100皿左右的PEG修 飾的空白脂質(zhì)體化ipo)。
[0079] S2、包裹藥物脂質(zhì)體(VCR-Lipo)的制備
[0080] 按照抗腫瘤藥物:空白脂質(zhì)體質(zhì)量比1:11，取0.5mg長春新堿溶液（Img/ml)和對應 空白脂質(zhì)體，加入1ml化抽K)4溶液(500mmol/L，pH9.0)調(diào)節(jié)外水相抑為7.0，放置50°C水浴8 分鐘，即制備包裹硫酸長春新堿的納米脂質(zhì)體VCR-Lipo。其中，硫酸長春新堿使用的產(chǎn)品與 實施例1中相同。
[0081 ] S3、連接核酸適配體 SgcS，制備 sgcS/VCR-Lipo;
[0082] 根據(jù)核酸適配體和MAL-PEG2000-DS陽的摩爾比為1:5,取適量VCR-Lipo,加入適量 核酸適配體sgc8,在氮氣保護環(huán)境下室溫反應24小時。加入2mM的0-半脫胺除去未反應的 MAL基團。用超濾離屯、管對sgc8/VCR-Lipo進行超濾離屯、后，1000 Orpm離屯、IOmin后，加入ImL 去離子水，1000 Orpm離屯、IOmin，洗去游離的硫酸長春新堿、0-半脫胺和核酸適配體SgcS，得 到適配體祀向脂質(zhì)體載藥系統(tǒng)sgc8/VCR-Lipo。
[008；3] 實施例4
[0084]該實施例4制備適配體祀向脂質(zhì)體載藥系統(tǒng)AlO/ADM-Lipo。其中，ADM為阿霉素。該 實施例4與實施例1相同，只需將其中藥物更換為阿霉素 ADM，核酸適配體更換為AlO即可。
[00化]實施例5
[0086]該實施例5制備適配體祀向脂質(zhì)體載藥系統(tǒng)S2.2/IDA-Lipo。其中，IDA為柔紅霉 素。該實施例5與實施例1相同，只需將其中藥物更換為柔紅霉素（IDA),核酸適配體更換為 S2.2即可。
[0087] 實施例6
[008引該實施例6制備適配體祀向脂質(zhì)體載藥系統(tǒng)AS1411/DDP-Lipo。其中，DDP為順銷。 該實施例6與實施例1相同，只需將其中藥物更換為順銷(DDP)，核酸適配體更換為AS1411即 可。
[0089] 實施例7
[0090] 該實施例7制備適配體祀向脂質(zhì)體載藥系統(tǒng)化Slla/TAX化-Lipo。其中，TAX化為紫 杉醇。該實施例7與實施例1相同，只需將其中藥物更換為紫杉醇(TAX化），核酸適配體更換 為化Slla即可。
[0091] 本發(fā)明對上述各個實施例制備的適配體祀向脂質(zhì)體載藥系統(tǒng)進行了載藥量、包封 率、粒徑及對腫瘤細胞的祀向作用及治療作用的實驗，結(jié)果表明本發(fā)明中最終制得的適配 體祀向脂質(zhì)體載藥系統(tǒng)的粒徑也為100-120nm。運些適配體祀向脂質(zhì)體載藥系統(tǒng)具有良好 的穩(wěn)定性，在體內(nèi)不易被化學和生物降解，能夠很好地祀向至目標部位，且對祀向的腫瘤細 胞具有很好的治療效果，尤其采用實施例1制備的產(chǎn)品效果最佳。下面W實施例1制備的適 配體祀向脂質(zhì)體載藥系統(tǒng)sgcS/VCR-Lipo為例對本發(fā)明的實驗效果進行說明。
[0092] 1、硫酸長春新堿藥物的包封率、載藥量計算
[0093] 取0.3血sgc8/VCR-Lipo樣本加入超濾離屯、管，1000 Orpm離屯、IOmin后，加入1血去 離子水，10000巧m離屯、lOmin，洗去游離的VCR。
[0094] 取超濾離屯、管濾上液，放入5ml容量瓶，加入250化10%聚乙二醇辛基苯基酸 (TritonX-IOO)，室溫放置20min，加入二次去離子水(MillQ)定容至5ml。吸取20化，在上述 色譜條件下注入液相色譜儀中，記錄峰面積，根據(jù)標準曲線計算包入脂質(zhì)體的藥物含量。按 照W下公式計算脂質(zhì)體的載藥量和包封率：
[0095] 化C( % )=[脂質(zhì)體中藥物量/(脂質(zhì)體中藥物+載體總量）]X 100% ;
[0096] 包封率DLE( % )=(脂質(zhì)體中包封的藥物/脂質(zhì)體中藥物總量）X 100%。
[0097] 實驗測得本發(fā)明實施例1制得的sgc8/VCR-Lipo的載藥量為14.16%包封率為 90.63%。
[0098] 2、粒徑檢測
[0099] 請參閱圖3A-C，為根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選實施例的適配體祀向脂質(zhì)體載藥系統(tǒng)各個階段 顆粒的透射電鏡圖。該實驗中使用的透射電鏡為型號為H-7650的日立透射掃描電子顯微 鏡，加速電壓為SOkv，放大倍率為200000X。圖3A為空白脂質(zhì)體Lipo，圖3B為包裹硫酸長春新 堿的納米脂質(zhì)體VCR-Lipo,圖3C為適配體祀向脂質(zhì)體載藥系統(tǒng)sgc8/VCR-Lipo。請結(jié)合參閱 圖4,為根據(jù)本發(fā)明優(yōu)選實施例的適配體祀向脂質(zhì)體載藥系統(tǒng)各個階段顆粒的粒徑分布圖。 其中，A為空白脂質(zhì)體Lipo; B為VCR-Lipo; C為sgcS/VCR-Lipo。結(jié)果顯示，每種納米粒子的粒 徑分布均呈現(xiàn)正態(tài)分布，空白脂質(zhì)體Lipo的粒徑在90nm左右;VCR-Lipo的粒徑在IOOnm左 右；sgc8/VCR-Lipo的粒徑在1 IOnm左右。
[0100] 3、適配體祀向脂質(zhì)體載藥系統(tǒng)sgcS/VCR-Lipo對腫瘤細胞的祀向作用
[0101] 將實施例1的憐脂雙分子層中標記細胞膜紅色巧光探針(DiI)巧光染料，在核酸適 配體SgcS上標記異硫氯酸巧光素(FITC)巧光。分別得到FITC和DiI同時標記的sgc8/VCR- Lipo，W及DiI標記的空白脂質(zhì)體Lipo。
[0102] 在15ml離屯、管中加入3X10化EM細胞，每管分別加入DiI標記的Lipo、sgc8/VCR-Lipo(核酸適配體的終濃度控制在200nM)，37°C解育20-30min。離屯、收集細胞并用PBS洗3 次。用多聚甲醒(4%)固定30min后用PBS洗3次。細胞用Img/ml DAPI染核5分鐘，用PBS洗3次 并離屯、收集細胞。在倒置巧光顯微鏡下觀察細胞的巧光強度并拍照。
[0103] 請參閱圖5,為CEM細胞與sgc8/VCR-Lipo和VCR-Lipo的結(jié)合實驗圖。其中DAPI為 4'，6-二脈基-2-苯基嗎I噪，用于染細胞核，呈藍色巧光;DiI用于標記脂質(zhì)體，呈紅色巧光； FITC用于標記核酸適配體sgc8,呈綠色巧光;Merge表示帶有巧光的納米材料與不同細胞結(jié) 合合并的巧光。圖5中A為sgcS/VCR-Lipo與CEM細胞解育后的巧光圖；B為VCR-Lipo與CEM細 胞解育后的巧光圖；C為con/VCR-Lipo與(EM細胞解育后的巧光圖；Con代表對照適配體，其 與核酸適配體SgcS具有相同堿基數(shù)的DNA序列，但是與祀細胞不結(jié)合。
[0104] 4、適配體祀向脂質(zhì)體載藥系統(tǒng)sgcS/VCR-Lipo對腫瘤的治療作用
[0105] 分別將實施例1的VCR、VCR-Lipo和sgc8/VCR-Lipo用PBS溶解或懸浮，得到VCR濃度 均為l.Ong/yl的VCR注射液、VCR-Lipo注射液和sgcS/VCR-Lipo注射液。
[0106] 取4-6周齡的近交系雌性裸鼠（BAL