針對(duì)艱難梭菌免疫的組合物和方法
【專利說(shuō)明】針對(duì)艱難梭菌免疫的組合物和方法
[0001] 相關(guān)申請(qǐng) 本申請(qǐng)要求2013年6月14日提交的美國(guó)順序號(hào)61/835,246的優(yōu)先權(quán)，其通過(guò)引用W其 整體結(jié)合到本公開(kāi)內(nèi)容中。 發(fā)明領(lǐng)域
[0002] 本公開(kāi)內(nèi)容設(shè)及用于在成人受試者(例如有發(fā)生原發(fā)癥狀性艱難梭菌感染風(fēng)險(xiǎn)的 成人)中誘導(dǎo)針對(duì)艱難梭菌(C. difficile)毒素 A和毒素 B的免疫應(yīng)答的方法。
[0003] 發(fā)明背景 艱難梭菌(Clostridium difficile/C. difficile)是一種革蘭氏陽(yáng)性產(chǎn)芽抱的厭氧 細(xì)菌。艱難梭菌的病理作用由所分泌的毒素 A和B介導(dǎo)，其引起結(jié)腸粘膜損害和炎癥。雖然艱 難梭菌感染(CDI)在一些患者中是無(wú)癥狀的，但是CDI可導(dǎo)致急性腹瀉和結(jié)腸炎，在嚴(yán)重的 情況下可導(dǎo)致假膜性結(jié)腸炎和中毒性巨結(jié)腸。在接受改變正常腸菌群的藥物的住院患者 中，艱難梭菌是醫(yī)源性腹瀉和結(jié)腸炎的臨床上的重要原因，在社區(qū)中CDI的報(bào)告日益增多。 癥狀性艱難梭菌感染的風(fēng)險(xiǎn)因素包括抗生素治療、高齡、基礎(chǔ)疾病和在長(zhǎng)期護(hù)理機(jī)構(gòu)中住 院治療或居住。
[0004] 進(jìn)行了早期臨床試驗(yàn)W評(píng)價(jià)艱難梭菌類毒素疫苗形式的安全性和免疫原性。在健 康成人（18-55歲）和老年人（含65歲）志愿者中，早期評(píng)價(jià)的包含類毒素 A和B的艱難梭菌疫 苗被證明是安全的，并且誘導(dǎo)對(duì)毒素 A和毒素 B兩者的免疫應(yīng)答(Greenberg等，Vaccine 30: 2245-2249 (2012);化glia等，化ccine, 30: 4307-4309 (2012))。所述研究中的最 大劑量為50 yg，且毒素 A與毒素 B的比率為3:1。在第0、28和56天給予候選疫苗。在健康成人 和老年人志愿者組兩者中在多劑量后毒素 A的血清轉(zhuǎn)化高于毒素 B的血清轉(zhuǎn)化，而且觀察到 與較年輕人組相比，老年人受試者中的抗體應(yīng)答更快地下降。由于老年人常常免疫受損 (immunocomprised)，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將此視作是主要問(wèn)題。依然需要用于存在癥狀性 艱難梭菌感染風(fēng)險(xiǎn)的成人(尤其在老年人中）的艱難梭菌疫苗。
[0005] 發(fā)明概述 本公開(kāi)內(nèi)容設(shè)及用于在成人受試者(例如有原發(fā)癥狀性艱難梭菌感染風(fēng)險(xiǎn)的成人）中 誘導(dǎo)針對(duì)艱難梭菌毒素 A和毒素 B的免疫應(yīng)答的方法。在一些實(shí)施方案中，所述方法可包括 使用一次或多次給予(例如3次)通過(guò)任何合適的途徑(例如肌內(nèi)），W有效的類毒素 A:化k率 (例如按重量計(jì)約3:1、3:2或1:1類毒素 A:類毒素 B的任一種)和足夠的純度(例如至少約50-約100%，例如約90-100% (w/w))，將包含有效量的艱難梭菌類毒素 A和類毒素 B (例如約40-約500 yg/劑量(w/w，組合物中類毒素 A和B的總量））的組合物(例如疫苗)給予受試者，彼此 被適當(dāng)分隔（例如相隔約1-10天，例如約7天）的多劑量給藥方案的各劑量可由本領(lǐng)域普通 技術(shù)人員按本文所述確定。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法可包括第一、第二和第=次給予， 其中第二次給予為第一次給予后約7天，第=次給予為第一次和/或第二次給予后至少約30 天和/或至少約180天。在多劑量方案的優(yōu)選實(shí)施方案中，第一劑可在第一劑后約7天給予， 和/或第=劑在第一劑后約30天(或第2劑后約20-25天)給予。在一些實(shí)施方案中，所述方法 可包括一種或多種佐劑(例如侶佐劑）。在某些實(shí)施方案中，所述方法可包括將組合物給予 有感染風(fēng)險(xiǎn)的人類受試者。在一些實(shí)施方案中，人類受試者可為至少約40、50、65歲或更年 長(zhǎng)的任一種。在一些實(shí)施方案中，人類受試者可為約40-約65歲。在一些實(shí)施方案中，人類受 試者可為約65-75歲或更年長(zhǎng)。在某些運(yùn)類實(shí)施方案中，人類受試者在第一次給予前的12個(gè) 月時(shí)間內(nèi)，可能有至少一次或兩次留醫(yī)，每次持續(xù)至少約24、48或72小時(shí)或更久的任一種， 并接受全身(非局部)抗生素;和/或預(yù)期具有用于在第一次給予60天內(nèi)進(jìn)行計(jì)劃的外科手 術(shù)的住院患者的住院治療。在一些實(shí)施方案中，預(yù)期的/即將發(fā)生的留院/住院治療可按計(jì) 劃持續(xù)72小時(shí)或更久，并且可用于設(shè)及腎/膀脫/泌尿系統(tǒng)、肌骨骼系統(tǒng)、呼吸系統(tǒng)、循環(huán)系 統(tǒng)和/或中樞神經(jīng)系統(tǒng)的至少一個(gè)的手術(shù)。優(yōu)選通過(guò)運(yùn)些方法誘導(dǎo)的免疫應(yīng)答足W預(yù)防和/ 或治療和/或改善和/或降低癥狀性艱難梭菌感染的風(fēng)險(xiǎn)。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可從本文 提供的描述推導(dǎo)其它實(shí)施方案。
[0006] 發(fā)明詳述 本公開(kāi)內(nèi)容設(shè)及可用于治療、改善癥狀性艱難梭菌感染、降低其風(fēng)險(xiǎn)和/或預(yù)防癥狀性 艱難梭菌感染的組合物和方法。如上所述，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員遇到設(shè)計(jì)針對(duì)由艱難梭菌 引起的感染的有效疫苗的困難。有效疫苗可W是例如治療、改善癥狀性艱難梭菌感染、降低 其風(fēng)險(xiǎn)和/或預(yù)防癥狀性艱難梭菌感染的有效疫苗。通過(guò)本文所述組合物和方法出乎意料 地解決了運(yùn)些問(wèn)題。本文描述了運(yùn)些出乎意料的有效解決方法的各種實(shí)施方案。提供了示 例性組合物。例如，提供使用一次或多次給予（例如3次給予或劑量)通過(guò)任何合適的途徑 (例如肌內(nèi)），W有效的類毒素 A:化k率(例如W重量計(jì)約10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%，3: 1、3:2或1:1類毒素 A:類毒素 B)和足夠的純度(例如至少約50-約100%，例如約50、55、60、65、 70、75、80、85、90、95或90-100%(*/*)的任一種）的包含有效量的艱難梭菌類毒素4和類毒 素 B (例如約40-約500 yg/劑量，例如約40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、 160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、310、320、330、340、 350、360、370、380、390、400、410、420、430、440、450、460、470、480、490或500 蛇/劑量的任 一種，例如約50-約100 yg/劑量(w/w，組合物中類毒素 A和B的總量））的組合物，其中多劑量 給藥方案的各劑量彼此被適當(dāng)?shù)胤指簦ɡ缰辽偌s1 -約10天例如約1、2、3、4、5、6、7、8、9或 10天的任一種，例如約7天）。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)了解，劑量之間的時(shí)間長(zhǎng)度(時(shí)間間 隔）隨個(gè)體變化，且該間隔應(yīng)足夠長(zhǎng)(例如W天測(cè)量），使得之前劑量的免疫應(yīng)答既有時(shí)間發(fā) 生(例如致敏），又不W任何方式受到隨后劑量(例如一次或多次加強(qiáng)劑量)抑制。例如，一個(gè) 具體個(gè)體在劑量之間可能需要至少約7天(例如5-8天），而另一個(gè)體可能只需要至少約4天 (例如3-5天）。因此，在一些實(shí)施方案中，給藥間隔可改變達(dá)例如約10-20%。本領(lǐng)域普通技術(shù) 人員應(yīng)了解劑量之間的時(shí)間可能需要按本文所述調(diào)節(jié)。在一些實(shí)施方案中，第二次給予為 在第一次給予(例如第0天)后的至少1、2、3、4、5、6、7、8、9或10天，第S次給予為第一次給予 后的至少約 20-200天(例如約 20、30、40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、 170、180、190或200天，例如約30或約180天）。例如，所述方法可包括第一、第二和/或第=次 給予，其中第二次給予為第一次給予后至少7天，第=次給予為第一或第二次給予后至少約 30天和/或至少約180天。在一些實(shí)施方案中，第二次給予為第一次給予后約7天，第=次給 予為第一次給予后約30天。在采用所述方法將所述組合物給予宿主/受試者時(shí)，通常觀察到 免疫應(yīng)答，運(yùn)通常包括體液免疫應(yīng)答，并可包括細(xì)胞免疫應(yīng)答。在某些實(shí)施方案中，所述方 法可包括將免疫原性組合物給予有感染風(fēng)險(xiǎn)的人類受試者。在一些實(shí)施方案中，人類受試 者可為至少約40、50、65歲或更年長(zhǎng)的任一種。在一些實(shí)施方案中，人類受試者可為約40-約 65歲。在一些實(shí)施方案中，人類受試者可為65-75歲。因此，還提供用于給予組合物的方法。 用于制備組合物的方法描述于本文，且對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員是可獲得的。根據(jù)本文提 供的描述，其它實(shí)施方案將是清楚的。
[0007]本公開(kāi)內(nèi)容還描述了通過(guò)給予受試者（例如人類)包含艱難梭菌的一種或多種抗 原的組合物W針對(duì)艱難梭菌使受試者免疫的方法。例如，合適的組合物可包含含或不含佐 劑(例如氨氧化侶）、類毒素 A:類毒素 B比率大致約3:2、共約50或約10化g (或約50-100 yg) 艱難梭菌類毒素(類毒素 A和類毒素 B)。出于比較目的，可將含有抗原的組合物給予一組受 試者，并將安慰劑組合物(例如0.9%生理鹽水)給予（例如在同一方案中）另一組。可在特定 日期(例如在第一次給予后第〇、14、30、60、180和/或210天，和/或多達(dá)1000天)獲得受試者 的免疫學(xué)數(shù)據(jù)和安全性數(shù)據(jù)。給予組合物可發(fā)生在例如第0天(第一次給予）、約第7天(第二 次給予）、約第30天(第=次給予)和/或約第180天(備選第=次給予或第四次給予）。
[000引如上所述，組合物可包含有效的類毒素 A:B比率(例如W重量計(jì)約3:1、3:2或1:1類 毒素 A:類毒素 B的任一種）、足夠的純度(例如約90%或更高純度(w/w))下的艱難梭菌類毒素 A和類毒素 B。例如，組合物可包含類毒素 A:類毒素 B比率大致約3: 2的艱難梭菌類毒素 A和B 的高度純化(例如>90% (w/w/))的制劑。所述組合物可采用可獲得的任何制備方法制備(例 如2013年3月15日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)順序號(hào)61/790,423、2014年3月14日提交的共同待審 的PCT/US2014/029035、2013年3月15日提交的61/793，376和/或2014年3月14日提交的共同 待審的PCT/US2014/029070中所述），其每一個(gè)W其整體結(jié)合到本公開(kāi)內(nèi)容中）。如本公開(kāi)內(nèi) 容的實(shí)施例中所述，毒素 A和B經(jīng)從艱難梭菌的培養(yǎng)物中純化，滅活，并W目標(biāo)的3:2比率混 合，并且在誘導(dǎo)和/或提高針對(duì)艱難梭菌毒素 A和B的免疫應(yīng)答時(shí)顯示是有效的。然而如上所 述，可將類毒素 A和BW任何有效的量和/或有效的比率組合(有效的表示例如提供有效的疫 苗)。
[0009] 本文所用術(shù)語(yǔ)"艱難梭菌類毒素"是指被部分或完全滅活的艱難梭菌毒素（毒素 A 或毒素 B)。通過(guò)例如體外細(xì)胞毒性測(cè)定法或通過(guò)動(dòng)物毒性測(cè)量，如果與未處理的毒素相比 具有較少毒性(例如100%、99%、98%、80%、70%、60%、50%、40%、30%、20%、10%或更少的毒性或它 們之間的任何值），則毒素被滅活?？赏ㄟ^(guò)從艱難梭菌培養(yǎng)物中純化毒素并通過(guò)化學(xué)法(例 如甲醒、戊二醒、過(guò)氧化物或氧處理)使毒素滅活，來(lái)產(chǎn)生艱難梭菌類毒素。或者，可采用重 組方法，產(chǎn)生毒性缺乏或降低的野生型或突變型艱難梭菌毒素。通過(guò)遺傳方法制備類毒素 的方法是本領(lǐng)域眾所周知的。例如，可進(jìn)行導(dǎo)致毒性降低的突變。還可制備缺乏特殊區(qū)域W 降低毒性的野生型或突變型艱難梭菌毒素。
[0010] 組合物(其可為疫苗)可作為凍干制劑提供，在規(guī)定時(shí)，所述凍干制劑可在臨床基 地用稀釋劑復(fù)溶，與佐劑(例如侶佐劑例如憐酸侶或氨氧化侶)或注射用水(WFI)混合。稀釋 劑可為例如任何藥學(xué)上可接受的稀釋劑(例如20 mM巧樣酸鋼、5%薦糖和0.016%甲醒;10 mM 巧樣酸鹽、4%薦糖、0.008%甲醒、0.57%氯化鋼）。佐劑可包含例如合適濃度(例如約800-1600 yg/mL的任一種）的佐劑，例如在WFI中包含侶(例如氨氧化侶或憐酸侶）的佐劑。例如，佐劑 (例如在0.57%氯化鋼中的800-1600 yg /mL氨氧化侶）可用作稀釋劑W使凍干制劑復(fù)溶。 WFI可用來(lái)稀釋凍干疫苗用于未加佐劑的制劑。最后的給藥溶液可包含例如組合物/疫苗、 稀釋劑和佐劑。如上所述，安慰劑還可W液體制劑(例如0.9%生理鹽水)提供。每次遞送劑量 的研究藥物(疫苗或安慰劑)的體積可為約0.5 mL?？赏ㄟ^(guò)任何合適的途徑(例如皮下、靜脈 內(nèi)、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮內(nèi)、結(jié)節(jié)內(nèi)、鼻內(nèi)、口服)給予制劑。
[0011] 可通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的各種方法的任一種，來(lái)評(píng)價(jià)本文所述材料(例如組 合物)和/或方法的任一種的有用性(例如免疫原性）。本文所述測(cè)定法的任一種或多種或任 何其它的一種或多種