本發(fā)明涉及一種噻唑并嘧啶酮化合物及其制備方法，以及其在制備用于治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的藥物中的應用。

背景技術：

老年癡呆癥，又名阿爾茨海默癥，是一種進行性發(fā)展的致死性神經(jīng)退行性疾病，臨床表現(xiàn)為認知和記憶功能不斷惡化，日常生活能力進行性減退，并有各種神經(jīng)精神癥狀和行為障礙。很多研究明確表明AD患者腦中乙酰膽堿缺乏、煙堿型乙酰膽堿受體(nAChRs)表達減少是常見的現(xiàn)象。

根據(jù)文獻報道，α7煙堿型乙酰膽堿受體正向變構(gòu)調(diào)節(jié)劑(PAM)都有增加學習記憶的作用，實驗表明缺乏nAChRα7亞基的小鼠與含有α7nAChR亞基小鼠的對照組相比，在水迷宮實驗中學習記憶能力降低。α7尼古丁乙酰膽堿受體正向變構(gòu)調(diào)節(jié)劑(nAChRPAMs)作用方式不同于激動劑，不易產(chǎn)生脫敏現(xiàn)象，潛在的毒副作用也會大大下降。通過調(diào)控α7尼古丁乙酰膽堿受體這一通路，希望發(fā)現(xiàn)一種新型療法，用于治療一系列中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病如阿爾茲海默癥和帕金森癥等。

技術實現(xiàn)要素：

因此，本發(fā)明的目的是提供一種治療一系列中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病如阿爾茲海默癥和帕金森癥的藥物活性成分。

本發(fā)明人的前期工作開發(fā)了多種一鍋法串聯(lián)反應和金屬催化的脫硫偶聯(lián)反應，利用這些反應合成了近百個結(jié)構(gòu)多樣的化合物。體外活性篩選發(fā)現(xiàn)多個化合物對α7煙堿型乙酰膽堿受體具有一定的激動或拮抗活性，其中，編號為LD486的化合物是一種結(jié)構(gòu)全新的噻唑并嘧啶酮類化合物；研究結(jié)果表明：其α7尼古丁乙酰膽堿受體正向變構(gòu)調(diào)節(jié)劑的活性較強，Ki值為～3uM，且活性-濃度量效關系明顯；其選擇性高，對其它亞型沒有作用；對CHO細胞表達的hERG離子通道沒有作用，心臟毒性風險小。

因此，本發(fā)明提供了一種噻唑并嘧啶酮化合物，該化合物具有如化學式(I)所示的結(jié)構(gòu)：

其中，X＝O或S，Y＝C或N，

當Y＝C時，R₃選自H、C1-C12烴基、苯基、五元或六元雜環(huán)；

R₂選自H、C1-C12烴基、苯基、五元或六元雜環(huán)；

R₁選自H、C1-C6烷基、C1-C6烷氧基、C1-C6烷硫基、C1-C6烷胺基、苯基、被鹵素、C1-C4烷基和C1-C4烷氧基中的一個或多個取代的苯基、芐硫基、芳胺、被鹵素、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、五元或六元雜環(huán)和被C1-C4烷基或羥基取代的五元或六元雜環(huán)中的一個或多個取代的芳胺、芳酰胺基。

優(yōu)選地，本發(fā)明提供的噻唑并嘧啶酮化合物的化學式(I)中，X＝O，Y＝C，R₁選自C1-C6烷硫基、C1-C6烷胺基、苯基、被鹵素、C1-C4烷基和C1-C4烷氧基中的一個或多個取代的苯基、芐硫基、芳胺以及被鹵素、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、五元或六元雜環(huán)和被C1-C4烷基或羥基取代的五元或六元雜環(huán)中的一個或多個取代的芳胺或芳酰胺基；R₂選自被鹵素、C1-C4烷基和C1-C4烷氧基中的一個或多個取代的苯基；R₃為H。

本發(fā)明還提供了化學式(I)所示的噻唑并嘧啶酮化合物的制備方法，該方法包括：

(1)將氯乙酰氯與被鹵素、C1-C4烷基和C1-C4烷氧基中的一個或多個取代的苯基或烴基反應生成化合物II；

(2)將化合物II與氰胺二硫代甲酸二鉀；碘甲烷或碘乙烷或鹵代的C1-C6烷胺基；被鹵素、C1-C4烷基和C1-C4烷氧基中的一個或多個取代的苯基；芳胺；或被鹵素、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、五元或六元雜環(huán)和被C1-C4烷基或羥基取代的五元或六元雜環(huán)中的一個或多個取代的芳胺反應生成化合物III(2-烷硫基-4-氨基-噻唑-5-甲酰胺)；

(3)將化合物III與甲酸或NaNO₂反應，生成合環(huán)產(chǎn)物IV(2-烷硫基噻唑并[4,5-d]吡啶-7(6H)-酮或6-烷硫基噻唑并[4,5-d][1,2,3]三嗪-4(3H)-酮)及部分式(I)所示的化合物；然后合環(huán)產(chǎn)物IV在氧化劑作用下生成 化合物V(2-烷磺?；邕虿4,5-d]吡啶-7(6H)-酮或6-烷磺?；邕虿4,5-d][1,2,3]三嗪-4(3H)-酮)；

(4)化合物IV或V與C1-C6烷胺基、被鹵素、C1-C4烷基和C1-C4烷氧基中的一個或多個取代的苯基、芳胺、被鹵素、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、五元或六元雜環(huán)和被C1-C4烷基或羥基取代的五元或六元雜環(huán)中的一個或多個取代的芳胺反應生成式(I)所示的化合物。

具體地，對于不同的式(I)化合物，其制備方法可以為以下四種合成路線中的任一種。

合成路線一：

合成路線二：

合成路線三：

合成路線四：

本發(fā)明還提供了化學式(I)所示的噻唑并嘧啶酮化合物在制備用于治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的藥物中的應用。

本發(fā)明的噻唑并嘧啶酮化合物具有以下有益效果：其α7尼古丁乙酰膽堿受體正向變構(gòu)調(diào)節(jié)劑的活性較強，EC₅₀值為0.1～100μM，且活性-濃度量效關系明顯；其選擇性高，對其它亞型沒有作用；對CHO細胞表達的hERG離子通道沒有作用，心臟毒性風險小。

附圖說明

以下，結(jié)合附圖來詳細說明本發(fā)明的實施方案，其中：

圖1是在逐漸提高內(nèi)源性配體拮抗劑PNU-282987或LD486的濃度情況下取代結(jié)合于大鼠腦細胞膜的[³H]-Methyllycaconitine放射性配體的速率曲線；

圖2是100μM ACh在不添加LD486以及添加不同濃度的LD486下蛙卵細胞膜片鉗響應強度；

圖3是LD486的濃度響應曲線；

圖4左圖是在30μM ACh刺激下的蛙卵細胞對α4β2及α3β4的響應 強度曲線，右圖是在30μM ACh以及10μM LD486刺激下的蛙卵細胞對α4β2及α3β4的響應強度曲線。

具體實施方式

下面結(jié)合具體實施方式對本發(fā)明進行進一步的詳細描述，給出的實施例僅為了闡明本發(fā)明，而不是為了限制本發(fā)明的范圍。

實施例1：制備6-(2-氯-6-甲基苯基)-2-苯胺基噻唑并[4,5-d]嘧啶-7(6H)-酮(編號：JWX-A0824)

1、合成2-氯-N-(2-氯-6-甲基苯基)乙酰胺(A2)

將化合物A1(14.2g，100mmol)溶于100ml乙酸和80ml乙酸鈉飽和水溶液，冰浴下加入氯乙酰氯(17.0g，150mmol)，很快出現(xiàn)渾濁，緩慢升至室溫，攪拌過夜。加水100ml，抽濾、水洗、烘干，得白色固體12.7g，記作A2，收率58.0％。粗品未經(jīng)純化，直接投下一步。

2、合成4-氨基-N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-乙硫基噻唑-5-甲酰胺(A3)

將化合物A2(10.9g，50mmol)溶于100ml丙酮，室溫下將溶有氰胺二硫代甲酸二鉀鹽(9.7g，50mmol)水溶液100ml加到體系中，加入2mol/lNaOH水溶液25ml，室溫攪拌2h，再加熱到80℃反應0.5h，冷卻至室溫。滴加碘乙烷(7.8g，50mmol)，很快出現(xiàn)大量黃色固體，室溫反應1h后倒入冰水中，抽濾、水洗、烘干，得黃色固體13.3g，記作A3，收率81.0％。

3、合成6-(2-氯-6-甲基苯基)-2-乙磺?；邕虿4,5-d]吡啶-7(6H)-酮(A5)

將化合物A3(6.56g，20mmol)溶于15ml甲酸中，加熱回流1h，冷卻至室溫。加水100ml，用乙酸乙酯萃取5次，旋干，得A4。加入100ml乙醇，加入Na₂WO₄·2H₂O(1.0g，3.0mmol)。緩慢滴加30％雙氧水20ml，室溫反應1h。升溫至50℃繼續(xù)反應1h。加水100ml，抽濾、水洗、烘干，得白色固體3.98g，記作A5，收率54.0％。

4、合成6-(2-氯-6-甲基苯基)-2-苯胺基噻唑并[4,5-d]嘧啶-7(6H)-酮(編號：JWX-A0824)

將化合物A5(0.37g，1mmol)溶于7ml乙酸中，加入苯胺a1(0.189g，2mmol)，40℃反應過夜。加水、抽濾、水洗、烘干，得白色固體0.155g，收率42.0％，m.p.為150-153℃，記作JWX-A0824。

¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ10.42(s,1H),8.04–6.91(m,9H),2.13(s,3H).¹³C-NMR(101MHz,CDCl₃)δ170.7,166.1,155.7,149.2,139.1,138.7,133.7,132.9,130.9,129.7,129.5,128.1,125.0,120.5,108.6,18.4.HRMS:m/z理論值C₁₈H₁₄ClN₄OS[M+H]⁺369.0571；實測值369.0573.

實施例2：制備2-(6-氯-2-甲基嘧啶-4-氨基)-6-(2-氯-6-甲基苯基)噻唑并[4,5-d]嘧啶-7(6H)-酮(編號：LD486)

將化合物A5(370mg，1.0mmol)和2-甲基-4-氨基-6-氯嘧啶b1(287mg，2.0mmol)溶于3ml無水THF中，加入NaH(48mg，2.0mmol)，加干燥冷凝管，上方加氣球。加熱回流0.5h。停止反應，冷卻至室溫，倒入冰 水中，滴加稀鹽酸調(diào)節(jié)PH至中性，析出大量固體。抽濾，洗滌，烘干，得黃色固體398mg，收率95.0％。乙醇重結(jié)晶，m.p.>300℃，記作LD486。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.44(s,1H),7.65–7.40(m,3H),6.99(s,1H),2.56(s,3H),2.15(s,3H).¹³C-NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ167.8,164.0,159.5,158.1,155.9,150.9,139.1,134.0,132.3,131.4,130.3,128.1,112.0,104.6,25.5,18.2.HRMS:m/z理論值C₁₇H₁₃Cl₂N₆OS[M+H]⁺419.0243；實測值419.0243.

實施例3：制備6-(2-氯-6-甲基苯基)-2-對甲基苯胺基噻唑并[4,5-d]嘧啶-7(6H)-酮(編號：JWX-A1029)

合成方法同化合物JWX-A0824。白色固體，收率88.8％，m.p.為241-246℃，記作JWX-A1029。

¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ10.08(s,1H),7.81(s,1H),7.45(d,J＝8.3Hz,2H),7.33(d,J＝7.8Hz,1H),7.26(t,J＝7.8Hz,1H),7.19(d,J＝9.8Hz,1H),7.12(d,J＝8.2Hz,2H),2.27(s,3H),2.13(s,3H).¹³C-NMR(101MHz,CDCl₃)δ171.41,165.98,155.47,149.13,138.64,136.39,135.17,133.73,132.90,130.77,130.08,129.59,128.03,121.07,108.21,21.02,18.35.

實施例4：制備6-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(4-甲氧基苯基氨基)噻唑并[4,5-d]嘧啶-7(6H)-酮(編號：JWX-A1030)

合成方法同化合物JWX-A0824?；野咨腆w，收率75.0％，m.p.為214-218℃，記作JWX-A1030。

¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ10.21(s,1H),7.90(s,1H),7.58(d,J＝8.9Hz,2H),7.46–7.25(m,3H),6.96(d,J＝8.9Hz,2H),3.85(s,3H),2.23(s, 3H).¹³C-NMR(101MHz,CDCl₃)δ172.46,166.09,157.67,155.39,149.16,138.64,133.75,132.90,131.86,130.73,129.57,128.01,123.67,114.82,108.10,55.55,18.33.

實施例5：制備6-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(4-氯苯基氨基)噻唑并[4,5-d]嘧啶-7(6H)-酮(編號：JWX-A1104)

合成方法同化合物JWX-A0824。白色固體，收率94.0％，m.p.為258-264℃，記作JWX-A1104。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.28(s,1H),8.40(s,1H),7.78(d,J＝8.7Hz,2H),7.62–7.33(m,5H),2.13(s,3H).¹³C-NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ167.46,166.29,155.15,150.81,139.08,138.92,133.98,132.28,131.40,130.21,129.55,128.05,127.41,120.56,108.67,18.16.

實施例6：制備6-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(4-溴苯基氨基)噻唑并[4,5-d]嘧啶-7(6H)-酮(編號：JWX-A1105)

合成方法同化合物JWX-A0824。白色固體，收率82.7％，m.p.為281-286℃，記作JWX-A1105。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.28(s,1H),8.40(s,1H),7.73(d,J＝8.5Hz,2H),7.51(ddd,J＝19.5,15.6,8.0Hz,5H),2.13(s,3H).¹³C-NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ167.40,166.28,155.15,150.83,139.33,139.08,133.97,132.45,132.28,131.41,130.22,128.05,120.91,115.37,108.70,18.17.

實施例7：制備6-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(3-甲氧苯基氨基)噻唑并[4,5-d]嘧啶-7(6H)-酮(編號：JWX-A1106)

合成方法同化合物JWX-A0824。紅棕色固體，收率85.5％，m.p.為194-197℃，記作JWX-A1106。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.16(s,1H),8.39(s,1H),7.68–7.13(m,6H),6.71(d,J＝6.6Hz,1H),3.78(s,3H),2.13(s,3H).¹³C-NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ167.74,166.39,160.39,155.15,150.75,141.06,139.09,134.02,132.31,131.37,130.52,130.19,128.04,111.50,109.19,108.36,105.25,55.60,18.17.

實施例8：制備6-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(3-溴苯基氨基)噻唑并[4,5-d]嘧啶-7(6H)-酮(編號：JWX-A1113)

合成方法同化合物JWX-A0824。白色固體，收率75.0％，m.p.為261-265℃，記作JWX-A1113。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.33(s,1H),8.42(s,1H),8.16(s,1H),7.65–7.26(m,6H),2.14(s,3H).¹³C-NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ167.36,166.17,155.17,150.87,141.49,139.08,133.96,132.28,131.59,131.43,130.23,128.06,126.33,122.46,121.18,117.84,108.87,18.18.

實施例9：制備6-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(3-氯苯基氨基)噻唑并[4,5-d]嘧啶-7(6H)-酮(編號：JWX-A1116)

合成方法同化合物JWX-A0824。白色固體，收率81.1％，m.p.為244-252℃， 記作JWX-A1116。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.33(s,1H),8.41(s,1H),8.02(s,1H),7.60–7.37(m,5H),7.16(d,J＝7.9Hz,1H),2.13(s,3H).¹³C-NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ167.39,166.17,155.17,150.86,141.35,139.07,134.01,133.95,132.27,131.42,131.29,130.22,128.05,123.42,118.37,117.46,108.87,18.16.

實施例10：制備6-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(4-氟苯基氨基)噻唑并[4,5-d]嘧啶-7(6H)-酮(編號：JWX-A1119)

合成方法同化合物JWX-A0824。泛紅白色固體，收率73.0％，m.p.為285-291℃，記作JWX-A1119。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.18(s,1H),8.38(s,1H),7.76(dd,J＝8.6,4.7Hz,2H),7.62–7.41(m,3H),7.27(t,J＝8.7Hz,2H),2.13(s,3H).¹³C-NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ167.94,166.43,159.87,157.47,155.11,150.77,139.09,136.41,134.01,132.30,131.38,130.20,128.04,121.15,121.07,116.45,116.22,108.33,18.16.

實施例11：制備6-(2-氯-6-甲基苯基)-2-苯基甲胺基噻唑并[4,5-d]嘧啶-7(6H)-酮(編號：JWX-A1114)

合成方法同化合物JWX-A0824。黃綠色固體，收率34.7％，m.p.為169-177℃，記作JWX-A1114。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.35(s,1H),7.51(m,8H),3.60(s,3H),2.10(s,3H).¹³C-NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ173.08,166.80,154.92,150.84,144.60,139.09,134.03,132.32,131.36,130.80,130.18,128.94, 128.04,126.46,108.41,41.22,18.13.

實施例12：制備6-(2-氯-6-甲基苯基)-2-間甲基苯胺基噻唑并[4,5-d]嘧啶-7(6H)-酮(編號：JWX-A1211)

合成方法同化合物JWX-A0824。棕色固體，收率78.3％，m.p.為203-209℃，記作JWX-A1211。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.09(s,1H),8.37(s,1H),7.61–7.42(m,5H),7.29(t,J＝8.0Hz,1H),6.95(d,J＝7.4Hz,1H),2.34(s,3H),2.13(s,3H).¹³C-NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ168.46,166.97,155.64,151.21,140.41,139.58,134.52,132.80,131.89,130.71,130.07,128.54,125.35,120.19,116.99,108.68,22.21,18.67.

實施例13：制備6-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(3-氟苯基氨基)噻唑并[4,5-d]嘧啶-7(6H)-酮(編號：JWX-A1214)

合成方法同化合物JWX-A0824。白色固體，收率93.6％，m.p.為238-245℃，記作JWX-A1214。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.38(s,1H),8.41(s,1H),7.82(d,J＝10.9Hz,1H),7.64–7.34(m,5H),6.94(s,1H),2.13(s,3H).¹³C-NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ167.42,166.19,164.10,161.69,155.21,150.87,141.63,141.52,139.08,133.94,132.26,131.44,131.36,131.27,130.24,128.06,114.83,110.32,110.11,108.82,106.00,105.73,18.16.

實施例14：制備6-(2-氯-6-甲基苯基)-2-對甲基苯胺基噻唑并[4,5-d]嘧啶-7(6H)-酮(編號：JWX-A1218)

合成方法同化合物JWX-A0824。白色固體，收率63.2％，m.p.為236-244℃，記作JWX-A1218。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.03(s,1H),8.35(s,2H),7.81–7.39(m,10H),7.24(d,J＝7.9Hz,4H),2.59(dd,J＝14.5,7.1Hz,4H),2.13(s,6H),1.18(t,J＝7.4Hz,6H).¹³C-NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ168.08,166.65,155.07,150.60,139.58,139.11,138.06,134.11,132.34,131.31,130.17,128.89,128.02,119.54,107.87,28.09,18.17,16.12.

實施例15：制備6-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(3,4-二甲基苯胺基)噻唑并[4,5-d]嘧啶-7(6H)-酮(編號：JWX-A0315)

合成方法同化合物JWX-A0824。白色針狀固體，收率87.7％，記作JWX-A0315。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.03(s,1H),8.38(s,1H),7.57(d,J＝7.5Hz,1H),7.47(dd,J＝20.9,8.3Hz,4H),7.17(d,J＝7.8Hz,1H),2.25(s,3H),2.21(s,3H),2.13(s,3H).¹³C-NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ168.16,166.58,155.10,150.72,139.10,137.71,137.55,134.06,132.31,131.39,130.59,130.21,128.05,120.60,117.01,107.88,20.17,19.31,18.18.

實施例16：制備6-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(3,4,5-三甲基苯胺基)噻唑并[4,5-d]嘧啶-7(6H)-酮(編號：JWX-A0322)

合成方法同化合物JWX-A0824。淡黃色固體，收率82.0％，記作JWX-A0322。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ10.97(s,1H),8.37(s,1H),7.56(d,J＝7.3Hz,1H),7.47(dd,J＝19.2,7.2Hz,2H),7.31(s,2H),2.26(s,6H),2.13(s,3H),2.10(s,3H).¹³C-NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ168.36,166.60,155.09,150.67,139.10,137.35,136.94,134.08,132.32,131.37,130.95,130.20,128.04,118.75,107.75,20.97,18.18,15.17.

實施例17：制備6-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(吡啶-2-氨基)噻唑并[4,5-d]嘧啶-7(6H)-酮(編號：JWX-A0828)

將化合物A5(370mg，1.0mmol)和2-氨基吡啶b2(189mg，2.0mmol)溶于3ml無水THF中，加入NaH(48mg，2.0mmol)，加干燥冷凝管，上方加氣球。加熱回流0.5h。停止反應，冷卻至室溫，加少量乙醇破壞剩余NaH。濃縮拌樣，經(jīng)柱層析分離純化(CH₂Cl₂:MeOH＝50:1)得黃色固體208mg，收率56.2％，m.p.為270-271℃，記作JWX-A0828。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.33(s,1H),8.50–8.42(m,1H),8.38(s,1H),7.89–7.80(m,1H),7.59–7.45(m,3H),7.19(d,J＝8.3Hz,1H),7.13–7.10(m,1H),2.13(s,3H).¹³C-NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ164.3,164.0,155.4,150.7,150.0,146.4,138.7,133.7,131.9,130.8,129.7,127.6,117.8,111.8,109.5,17.7.HRMS:m/z理論值C₁₇H₁₃ClN₅OS[M+H]⁺370.0524；實測值370.0526.

實施例18：制備6-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(6-氯嘧啶-4-氨基)噻唑并[4,5-d]嘧啶-7(6H)酮(編號：JWX-A0912)

合成方法同化合物LD486。收率65.0％，m.p.>250℃，記作JWX-A0912。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.90(s,1H),8.88(s,1H),8.46(s,1H),7.65–7.40(m,3H),7.20(s,1H),2.15(s,3H).¹³C-NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ163.97,159.66,158.17,155.89,150.94,139.13,133.96,132.30,131.45,130.25,128.08,112.07,107.83,18.21.

實施例19：制備6-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(6-氯噠嗪-3-氨基)噻唑并[4,5-d]嘧啶-7(6H)酮(編號：JWX-A0918)

合成方法同化合物LD486?；疑腆w，收率99.9％，m.p.>250℃，記作JWX-A0918。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.77(s,1H),8.46(s,1H),7.91(d,J＝9.3Hz,1H),7.53(ddd,J＝19.2,15.3,8.3Hz,4H),2.16(s,3H).¹³C-NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ163.97,155.96,153.10,151.05,150.89,139.15,134.04,132.34,131.42,131.35,130.24,128.07,121.44,18.21.

實施例20：制備6-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(6-(4-(2-羥乙基)哌嗪-1-基)-2-甲基嘧啶-4-氨基)噻唑并[4,5-d]嘧啶-7(6H)-酮(編號：JWX-A0728)

將化合物LD486(0.50g，1.2mmol)溶于5ml無水NMP中，加入羥乙基哌嗪b5(0.31g，2.4mmol)，80℃反應2h。冷卻至室溫，倒入冰水中，抽濾、洗滌、烘干，得黃色固體0.62g，收率95.6％。乙醇重結(jié)晶，m.p.為284-285℃，記作JWX-A0728。

¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.86(s,1H),7.55–7.31(m,3H),6.92(s,1H),3.86–3.59(m,6H),2.65–2.50(m,9H),2.25(s,3H).¹³C-NMR(101MHz, DMSO-d₆)δ165.5,165.0,164.3,162.9,157.2,155.9,150.4,139.1,134.2,132.4,131.3,130.2,128.0,111.2,83.8,60.6,59.0,53.2,44.1,25.9,18.2.HRMS:m/z理論值C₂₃H₂₆ClN₈O₂S[M+H]⁺513.1583；實測值513.1592.

實施例21：制備6-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(2-甲基-6-嗎啉嘧啶-4-氨基)噻唑并[4,5-d]嘧啶-7(6H)酮(編號：JWX-A1012)

合成方法同化合物JWX-A0728。白色固體，收率49.6％，m.p.>300℃，記作JWX-A1012。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.12(s,1H),8.34(s,1H),7.54(d,J＝7.3Hz,1H),7.45(dd,J＝18.8,7.1Hz,3H),6.06(s,1H),3.65(s,4H),3.49(s,4H),2.42(s,3H),2.10(s,3H).¹³C-NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ165.59,164.96,164.30,163.15,157.21,155.94,150.52,139.14,134.18,132.35,131.35,130.22,128.07,111.17,83.95,66.22,44.39,25.87,18.18.

實施例22：制備6-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(2-甲基-6-(4-甲基哌嗪-1-嘧啶)-4-氨基)噻唑并[4,5-d]嘧啶-7(6H)酮(編號：JWX-A1022)

合成方法同化合物JWX-A0728。白色固體，收率95.4％，m.p.>300℃，記作JWX-A1022。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ12.08(s,1H),δ8.31(s,1H),7.51(d,J＝7.5Hz,1H),7.47–7.37(m,2H),6.04(s,1H),3.48(s,4H),2.38(s,3H),2.31(s,4H),2.15(s,3H),2.08(s,3H).¹³C-NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ165.55,165.00,164.31,162.88,157.19,155.93,150.48,139.14,134.18,132.35,131.33,130.21,128.06,111.15,83.87,54.58,46.18,43.94,25.88,18.18.

實施例23：制備6-(2,4,6-三甲基苯基)-2-苯胺基噻唑并[4,5-d]嘧啶-7(6H)-酮(編號：LD252)

1、合成2-氯-N-(2,4,6-三甲基苯基)乙酰胺(B2)

合成方法同化合物A2，得白色固體，收率57.0％，記作B2。粗品未經(jīng)純化，直接投下一步。

2、合成4-氨基-N-(2,4,6-三甲基苯基)-2-乙硫基噻唑-5-甲酰胺(B3)

合成方法同化合物A3，得淡黃色固體，收率84.0％，記作B3。

3、合成6-(2,4,6-三甲基苯基)-2-乙磺?；邕虿4,5-d]吡啶-7(6H)-酮(B5)

合成方法同化合物A5，得白色固體，收率77.0％，記作B5。粗品未經(jīng)純化，直接投下一步。

4、合成6-(2,4,6-三甲基苯基)-2-苯胺基噻唑并[4,5-d]嘧啶-7(6H)-酮(編號：LD252)

合成方法同化合物JWX-A0824。得白色固體，收率73.0％，m.p.為151-153℃，記作LD-252。

¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ10.25(s,1H),7.91(s,1H),7.63(d,J＝7.8Hz,2H),7.32(t,J＝7.5Hz,2H),7.12(t,J＝7.1Hz,1H),6.98(s,2H),2.30(s, 3H),2.08(s,6H).¹³C-NMR(101MHz,CDCl₃)δ169.2,165.2,155.3,148.6,138.8,138.2,134.5,131.8,128.6,128.3,123.7,119.3,108.0,20.1,16.9.HRMS:m/z理論值C₂₀H₁₉N₄OS[M+H]⁺363.1274；實測值363.1276.

實施例24：制備6-(2,4,6-三甲基苯基)-2-(吡啶-2-氨基)噻唑并[4,5-d]嘧啶-7(6H)-酮(編號：LD286)

合成方法同化合物JWX-A0828，記作LD-286。

實施例25：制備6-(2,4,6-三甲基苯基)-2-(吡啶-4-氨基)噻唑并[4,5-d]嘧啶-7(6H)-酮(編號：LD293)

合成方法同化合物JWX-A0828，記作LD-293。

實施例26：制備6-(2,6-二氯苯基)-2-甲硫基噻唑并[4,5-d]吡啶-7(6H)-酮(編號：LD493)

1、合成2-氯-N-(2,6-二氯苯基)乙酰胺(C2)

合成方法同化合物A2，得白色鱗片狀固體，收率98.0％，記作C2。粗品未經(jīng)純化，直接投下一步。

2、合成4-氨基-N-(2,6-二氯苯基)-2-甲硫基噻唑-5-甲酰胺(C3)

合成方法同化合物A3，得橙紅色固體，收率59.0％，記作C3。

3、合成6-(2,6-二氯苯基)-2-甲硫基噻唑并[4,5-d]吡啶-7(6H)-酮(編號：LD493)

合成方法同化合物A4，得淡黃色固體，收率93.0％，m.p.為134-135℃。記作LD-493。

實施例27：制備6-(6-氯-2-甲基嘧啶-4-氨基)-3-(2-氯-6-甲基苯基)噻唑并[4,5-d][1,2,3]三嗪-4(3H)-酮(編號：JWX-A3N)

1、合成3-(2-氯-6-甲基苯基)-6-乙磺酰基噻唑并[4,5-d][1,2,3]三嗪-4(3H)-酮(A5’)

將化合物A3(1.31g，4.0mmol)溶于4.0ml濃鹽酸中，冷卻至0℃。緩慢滴加NaNO₂(0.35g，5.0mmol)的水溶液1.0ml。緩慢升至室溫，反應2h。加水20ml，抽濾，水洗，烘干，得粉紅色固體，記作A4’。

將化合物A4’(6.78g，20mmol)混懸于100ml乙醇中，加入Na₂WO₄·2H₂O(1.0g，3.0mmol)。緩慢滴加30％雙氧水15ml，室溫反應1h，升溫至50℃繼續(xù)反應1h。反應結(jié)束后，加水未析出固體。加乙酸乙酯萃取3次，合并有機相，飽和食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥。濃縮得黃色泡沫狀固體，收率70.0％，記作A5’。粗品未經(jīng)純化，直接投下一步。

2、合成6-(6-氯-2-甲基嘧啶-4-氨基)-3-(2-氯-6-甲基苯基)噻唑并[4,5-d][1,2,3]三嗪-4(3H)-酮(編號：JWX-A3N)

將化合物A5’(370mg，1.0mmol)和2-甲基-4-氨基-6-氯嘧啶b1(287mg，2.0mmol)溶于3ml無水THF中，加入NaH(48mg，2.0mmol)，加干燥冷凝管，上方加氣球。加熱回流0.5h。停止反應，冷卻至室溫，倒入冰水中，滴加稀鹽酸調(diào)節(jié)PH至中性，析出大量固體。抽濾，洗滌，烘干。得黃色固體294mg，收率70.0％，m.p.>250℃，記作JWX-A3N。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.19(s,1H),7.64–7.48(m,3H),7.06(s,1H),2.67(s,3H),2.14(s,3H).¹³C-NMR(101MHz,CDCl₃)δ172.58,169.59,165.26,164.54,162.57,157.32,143.67,139.97,136.74,135.14,132.90,122.16,109.72,30.21,22.62.

實施例28：制備3-(2,6-二氯苯基)-6-甲硫基噻唑并[4,5-d][1,2,3]三嗪-4(3H)-酮(編號：LD496)

合成方法同化合物A4’，得紅褐色固體，收率84.0％，記作LD496。

實施例29：制備6-(2-氯-6-甲基苯基)-2-羥基噻唑并[4,5-d]嘧啶-7(6H)酮(編號：JWX-A0903)

將化合物A5(0.37g，1mmol)溶于7ml乙酸中，110℃反應2h。加水，析出固體，抽濾，烘干，得白色固體0.218g，收率74.2％，m.p.為230-233℃，記作JWX-A0903。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.05(s,1H),δ8.46(s,1H),7.61– 7.54(m,1H),7.48(dt,J＝14.7,7.3Hz,2H),2.14(s,3H).¹³C-NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ169.57,153.89,153.71,151.96,138.99,133.60,132.10,131.60,130.28,128.07,101.68,18.13.

實施例30：制備6-(2-氯-6-甲基苯基)-2-芐基噻唑并[4,5-d]吡啶-7(6H)-酮(編號：JWX-A1223)

1、合成4-氨基-N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-芐基硫基噻唑-5-甲酰胺(A3-1)

將化合物A2(10.9g，50mmol)溶于100ml丙酮，室溫下將溶有氰胺二硫代甲酸二鉀鹽(9.7g，50mmol)水溶液100ml加到體系中，加入2mol/lNaOH水溶液25ml，室溫攪拌2h，再加熱到80℃反應0.5h，冷卻至室溫。滴加芐溴(8.55g，50mmol)，很快出現(xiàn)大量黃色固體，室溫反應1h后倒入冰水中，抽濾、水洗、烘干，得黃色固體16.2g，收率83.1％，記作A3-1。

2、合成6-(2-氯-6-甲基苯基)-2-芐基硫基噻唑并[4,5-d]吡啶-7(6H)-酮(編號：JWX-A1223)

將化合物A3-1(1.17g，3mmol)溶于2ml甲酸中，加熱回流1h，冷卻至室溫。加水，靜置，棄去水層。加入乙酸乙酯，溶解后加入無水硫酸鈉干燥，濃縮拌樣，經(jīng)柱層析分離純化(PE:EA＝10:1)得黃色固體255mg，收率21.3％，m.p.為134-138℃，記作JWX-A1223。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.52(s,1H),7.44(m,8H),4.70(s,2H),2.13(s,3H).¹³C-NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ175.72,166.23,155.04,151.27,139.06,136.22,133.57,130.31,129.62,129.15,128.90,128.30,128.10,116.81,37.54,18.15.

實施例31：制備6-(2-氯-6-甲基苯基)-2-芐基氨基噻唑并[4,5-d]吡啶-7(6H)-酮(編號：JWX-A1228)

將化合物A5(0.37g，1mmol)溶于5ml四氫呋喃中，加入芐胺a16(0.321g，3mmol)及0.5ml三乙胺，50℃反應過夜。濃縮拌樣，經(jīng)柱層析分離純化(CH₂Cl₂:MeOH＝150:1)得白色固體0.127g，收率33.2％，m.p.為155-161℃，記作JWX-A1228。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ9.44(s,1H),8.28(s,1H),7.62–7.21(m,8H),4.65(s,2H),2.12(s,3H).¹³C-NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ172.04,166.93,155.00,150.43,139.12,138.27,134.18,132.38,131.25,130.12,128.99,128.03,127.99,127.83,107.36,48.13,18.17.

實施例32：制備6-(2-氯-6-甲基苯基)-2-正丙基氨基噻唑并[4,5-d]吡啶-7(6H)-酮(編號：JWX-A1229)

合成方法同化合物JWX-A1228。淡黃色固體，收率60.7％，m.p.為193-196℃，記作JWX-A1229。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.94(s,1H),8.27(s,1H),7.73–7.23(m,3H),3.35(m,2H),2.12(s,3H),1.81–1.48(m,2H),0.94(t,J＝7.3Hz,3H).¹³C-NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ172.00,167.12,154.94,150.37,139.12,134.21,132.37,131.23,130.11,127.98,106.78,46.66,22.19,18.15,11.78,11.30.

實施例33：制備6-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(3-氟-4-甲基苯基氨基)噻唑并[4,5-d]嘧啶-7(6H)-酮(編號：JWX-A0108)

合成方法同化合物JWX-A0824。白色固體，收率91.3％，m.p.為222-226℃，記作JWX-A0108。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.27(s,1H),8.41(s,1H),7.74(d,J＝12.6Hz,1H),7.57(dd,J＝7.7,1.0Hz,1H),7.53–7.43(m,2H),7.34–7.28(m,2H),2.22(s,3H),2.13(s,3H).¹³C-NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ167.47,166.30,162.18,159.78,155.15,150.85,139.22,139.09,133.99,132.38,132.28,131.42,130.23,128.06,119.28,119.11,114.76,108.51,106.03,105.75,18.17,14.13.

實施例34：制備N-(6-(2-氯-6甲基苯基)-7-氧代-6,7-二氫噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-基)苯甲酰胺(編號：JWX-A0121)

合成方法同化合物JWX-A0828。淡黃色固體，收率45.5％，記作JWX-A0121。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.49(s,1H),8.50(s,1H),8.18(d,J＝7.5Hz,2H),7.70(t,J＝7.2Hz,1H),7.60(t,J＝7.1Hz,3H),7.55–7.45(m,2H),2.15(s,3H).¹³C-NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ166.95,165.01,163.81,156.13,151.04,139.13,133.97,133.85,132.31,131.64,131.49,130.29,129.27,128.97,128.10,111.68,18.2

實施例35：制備N-(6-(2-氯-6甲基苯基)-7-氧代-6,7-二氫噻唑并[4,5-d]嘧啶-2-基)-4-甲基苯甲酰胺(編號：JWX-A0310)

合成方法同化合物JWX-A0828。白色固體，收率47.0％，記作JWX-A0310。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ13.41(s,1H),8.49(s,1H),8.08(d,J＝8.0Hz,2H),7.61–7.43(m,3H),7.37(d,J＝8.0Hz,2H),2.38(s,3H),2.15(s,3H).¹³C-NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ166.63,164.96,163.81,156.14,150.98,144.30,139.13,133.98,132.32,131.45,130.26,129.79,129.00,128.71,128.09,111.70,21.63,18.21.

實施例36：制備6-(2-氯-6-甲基苯基)-2-苯基噻唑并[4,5-d]嘧啶-7(6H)-酮(編號：JWX-C1200)

將化合物A4(100mg，0.3mmol)溶于5ml四氫呋喃中，加入苯硼酸(73mg，0.6mmol)、CuTC(190mg，1mmol)及三苯基膦鈀(34mg，0.015mmol)，110℃反應過夜。硅藻土過濾后用乙酸乙酯與NaHCO₃水溶液萃取三次，取乙酸乙酯層旋干拌樣，經(jīng)柱層析分離純化(PE:EA＝10:1)得白色固體148mg，收率84.0％，m.p.為135-136℃，記作JWX-C1200。

¹H-NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.16(dd,J＝8.1,1.5Hz,1H),8.03(s,1H),7.59–7.50(m,2H),7.46(d,J＝7.0Hz,1H),7.40(t,J＝7.8Hz,1H),7.33(d,J＝7.6Hz,1H),2.24(s,2H).¹³C-NMR(101MHz,CDCl₃)δ175.28,166.9,155.99,149.43,138.51,133.44,132.81,132.54,132.33,130.97,129.70,129.30,128.15,127.53,118.30,18.32.HRMS:m/z理論值C₁₈H₁₃ClN₃OS[M+H]⁺354.04624；實測值354.04635。

實施例37：制備6-(2-甲基苯基)-2-對甲基苯胺基噻唑并[4,5-d]嘧啶-7(6H)-酮(編號：JWX-A0414)

1、合成2-氯-N-(2-甲基苯基)乙酰胺(D2)

合成方法同化合物A2，得白色固體，收率33.1％，記作D2。粗品未經(jīng)純化，直接投下一步。

2、合成4-氨基-N-(2-甲基苯基)-2-乙硫基噻唑-5-甲酰胺(D3)

合成方法同化合物A3，得白色固體，收率87.6％，記作D3。

3、合成6-(2-甲基苯基)-2-乙磺?；邕虿4,5-d]吡啶-7(6H)-酮(D5)

合成方法同化合物A5，得白色固體，收率77.5％，記作D5。粗品未經(jīng)純化，直接投下一步。

4、合成6-(2-甲基苯基)-2-對甲基苯胺基噻唑并[4,5-d]嘧啶-7(6H)-酮(編號：JWX-A0414)

合成方法同化合物JWX-A0824。得白色固體，收率34.7％，記作JWX-A0414。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.06(s,1H),8.32(s,1H),7.62(d,J＝8.2Hz,2H),7.51–7.31(m,4H),7.21(d,J＝8.2Hz,2H),2.29(s,3H),2.10(s,3H).¹³C-NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ167.70,166.45,155.81,150.69,137.63,136.89,136.05,133.06,131.23,130.07,129.96,128.84,127.47,119.23,108.15,20.93,17.67.

實施例38：制備6-(2-氯苯基)-2-對甲基苯胺基噻唑并[4,5-d]嘧啶-7(6H)-酮(編號：JWX-A0415)

1、合成2-氯-N-(2-氯苯基)乙酰胺(E2)

合成方法同化合物A2，得白色固體，收率75.5％，記作E2。粗品未經(jīng)純化，直接投下一步。

2、合成4-氨基-N-(2-甲基苯基)-2-乙硫基噻唑-5-甲酰胺(E3)

合成方法同化合物A3，得黃色固體，收率77.2％，記作E3。

3、合成6-(2-甲基苯基)-2-乙磺酰基噻唑并[4,5-d]吡啶-7(6H)-酮(E5)

合成方法同化合物A5，得黃色固體，收率63.4％，記作E5。粗品未經(jīng)純化，直接投下一步。

4、合成6-(2-氯苯基)-2-對甲基苯胺基噻唑并[4,5-d]嘧啶-7(6H)-酮(編號：JWX-A0415)

合成方法同化合物JWX-A0824。得黃色固體，收率49.8％，記作JWX-A0415。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ11.07(s,1H),8.40(s,1H),7.79–7.66(m,2H),7.65–7.51(m,4H),7.22(d,J＝8.1Hz,2H),2.29(s,3H).¹³C-NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ167.85,166.42,155.50,150.62,137.55,135.11, 133.17,132.01,131.80,131.14,130.48,130.09,128.82,119.30,107.92,20.94.

實施例39：制備6-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(2-氟芐基)噻唑并[4,5-d]吡啶-7(6H)-酮(編號：LYH150309-2F)

1、合成4-氨基-N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(2-氟芐基)硫基噻唑-5-甲酰胺(A3-2)

合成方法同A3-1，得黃色固體，收率65.8％，記作A3-2。

2、合成6-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(2-氟芐基)硫基噻唑并[4,5-d]吡啶-7(6H)-酮(編號：LYH150309-2F)

合成方法同JWX-A1223，得黃色固體，收率44.1％，記作LYH150309-2F。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.54(s,1H),7.65(td,J＝7.7,1.4Hz,1H),7.58(d,J＝6.8Hz,1H),7.55–7.44(m,2H),7.39(tt,J＝5.2,2.6Hz,1H),7.32–7.18(m,2H),4.74(s,2H),2.13(s,3H).¹³C-NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ175.04,166.18,159.78,155.08,151.34,139.06,133.54,132.16,132.01,131.97,131.63,130.82,130.74,130.34,128.11,125.20,125.17,123.36,123.22,116.97,116.19,115.98,31.24,18.13.

實施例40：制備6-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(3-氟芐基)噻唑并[4,5-d]吡啶-7(6H)-酮(編號：LYH150310-3F)

1、合成4-氨基-N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(3-氟芐基)硫基噻唑-5-甲酰胺(A3-3)

合成方法同A3-1，得黃色固體，收率84.5％，記作A3-3。

2、合成6-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(3-氟芐基)硫基噻唑并[4,5-d]吡啶-7(6H)-酮(編號：LYH150310-3F)

合成方法同JWX-A1223，得黃色固體，收率32.2％，記作LYH150310-3F。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.53(s,1H),7.61–7.54(m,1H),7.53–7.35(m,5H),7.15(ddd,J＝9.4,6.9,2.1Hz,1H),4.72(s,2H),2.13(s,3H).¹³C-NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ175.39,166.17,163.75,161.32,155.06,151.33,139.41,139.33,139.06,133.54,132.17,131.62,131.15,131.07,130.33,128.11,125.77,116.91,116.51,116.29,115.27,115.06,36.79,18.14.

實施例41：制備6-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(4-氟芐基)噻唑并[4,5-d]吡啶-7(6H)-酮(編號：LYH150312-4F)

1、合成4-氨基-N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(4-氟芐基)硫基噻唑-5-甲酰胺(A3-4)

合成方法同A3-1，得黃色固體，收率73.5％，記作A3-4。

2、合成6-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(4-氟芐基)硫基噻唑并[4,5-d]吡啶-7(6H)-酮(編號：LYH150312-4F)

合成方法同JWX-A1223，得黃色固體，收率25.6％，記作LYH150312-4F。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.53(s,1H),7.64–7.54(m,3H),7.53–7.42(m,2H),7.26–7.16(m,2H),4.70(s,2H),2.13(s,3H).¹³C-NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ175.55,166.20,163.34,155.05,151.31,139.06,133.55,132.66,132.63,132.17,131.77,131.69,131.62,130.33,128.11,116.82,116.08,115.87,36.65,18.13.

實施例42：制備6-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(4-甲基芐基)噻唑并[4,5-d]吡啶-7(6H)-酮(編號：LYH150318-4Me)

1、合成4-氨基-N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(4-甲基芐基)硫基噻唑-5-甲酰胺(A3-5)

合成方法同A3-1，得黃色固體，收率77.8％，記作A3-5。

2、合成6-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(4-甲基芐基)硫基噻唑并[4,5-d]吡啶-7(6H)-酮(編號：LYH150318-4Me)

合成方法同JWX-A1223，得黃色固體，收率63.8％，記作LYH150318-4Me。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.52(s,1H),7.62–7.56(m,1H),7.54–7.39(m,4H),7.18(d,J＝7.9Hz,2H),4.65(s,2H),2.28(s,3H),2.12(s,3H).¹³C-NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ175.83,175.75,166.23,155.04,151.29,139.05,137.65,133.55,133.03,132.17,131.62,130.33,129.72,129.56,128.11,116.71,37.33,21.19,18.13.

實施例43：制備6-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(3-甲基芐基)噻唑并[4,5-d]吡啶-7(6H)-酮(編號：LYH150324-3Me)

1、合成4-氨基-N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(3-甲基芐基)硫基噻唑-5-甲酰胺(A3-6)

合成方法同A3-1，得黃色固體，收率85.3％，記作A3-6。

2、合成6-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(3-甲基芐基)硫基噻唑并[4,5-d]吡啶-7(6H)-酮(編號：LYH150324-3Me)

合成方法同JWX-A1223，得黃色固體，收率30.2％，記作LYH150324-3Me。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.52(s,1H),7.58(d,J＝7.8Hz,1H),7.47(s,1H),7.33(d,J＝8.6Hz,2H),7.27(d,J＝7.5Hz,1H),7.13(d,J＝7.4Hz,1H),4.65(s,2H),2.30(s,3H),2.12(s,3H).¹³C-NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ175.80,166.23,151.32,139.05,138.36,135.97,133.54,130.12,129.00,128.10,116.74,21.41,18.12.

實施例44：制備6-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(2-甲基芐基)噻唑并[4,5-d]吡啶-7(6H)-酮(編號：LYH150325-2Me)

1、合成4-氨基-N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(2-甲基芐基)硫基噻唑-5-甲酰胺(A3-7)

合成方法同A3-1，得黃色固體，收率78.9％，記作A3-7。

2、合成6-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(2-甲基芐基)硫基噻唑并[4,5-d]吡啶-7(6H)-酮(編號：LYH150325-2Me)

合成方法同JWX-A1223，得黃色固體，收率63.9％，記作LYH150325-2Me。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.54(s,1H),7.58(d,J＝7.7Hz,1H),7.55–7.44(m,3H),7.28–7.17(m,3H),4.71(s,2H),2.42(s,3H),2.13(s,3H).¹³C-NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ175.52,166.23,155.07,151.32,139.06,137.49,133.53,132.16,131.63,131.02,130.55,130.34,128.74,128.11,126.73,116.81,36.11,19.32,18.13.

實施例45：制備6-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(4-甲氧基芐基)噻唑并[4,5-d]吡啶-7(6H)-酮(編號：LYH150326-4OCH3)

1、合成4-氨基-N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(4-甲氧基芐基)硫基噻唑-5-甲酰胺(A3-8)

合成方法同A3-1，得黃色固體，收率52.8％，記作A3-8。

2、合成6-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(4-甲氧基芐基)硫基噻唑并[4,5-d]吡啶-7(6H)-酮(編號：LYH150326-4OCH3)

合成方法同JWX-A1223，得黃色固體，收率47.0％，記作LYH150326-4OCH3。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.52(s,1H),7.58(d,J＝7.2Hz,1H),7.54–7.44(m,4H),6.94(d,J＝8.6Hz,2H),4.64(s,2H),3.74(s,3H),2.12(s, 3H).¹³C-NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ175.87,166.24,159.38,155.05,151.30,139.06,133.57,132.17,131.62,130.96,130.34,128.11,127.79,116.68,114.57,55.59,37.17,18.13.

實施例46：制備6-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(4-三氟甲基芐基)噻唑并[4,5-d]吡啶-7(6H)-酮(編號：LYH150409-4CF3)

1、合成4-氨基-N-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(4-三氟甲基芐基)硫基噻唑-5-甲酰胺(A3-9)

合成方法同A3-1，得黃色固體，收率58.9％，記作A3-9。

2、合成6-(2-氯-6-甲基苯基)-2-(4-三氟甲基芐基)硫基噻唑并[4,5-d]吡啶-7(6H)-酮(編號：LYH150409-4CF3)

合成方法同JWX-A1223，得黃色固體，收率52.4％，記作LYH150409-4CF3。

¹H-NMR(400MHz,DMSO-d₆)δ8.53(s,1H),7.77(q,J＝8.6Hz,4H),7.58(dd,J＝7.8,1.0Hz,1H),7.54–7.43(m,2H),4.80(s,2H),2.12(s,3H).¹³C-NMR(101MHz,DMSO-d₆)δ175.25,166.17,155.05,151.35,141.69,139.06,133.53,132.16,131.63,130.42,130.34,128.11,126.02,125.98,116.96,36.70,18.13

藥效實施例(LD486)

1.LD486不影響內(nèi)源性配體與放射性配體[³H]-Methyllycaconitine(美國Radiolabeled Chemicals公司)([³H]-MLA)的結(jié)合。

利用放射性同位素配體結(jié)合實驗(Wallace,T.L.,Callahan,P.M.,Tehim,A.,Bertrand,D.,Tombaugh,G.,Wang,S.,Xie,W.,Rowe,W.B.,Ong,V.,Graham,E.,Terry,A.V.,Jr.,Rodefer,J.S.,Herbert,B.,Murray,M.,Porter,R.,Santarelli,L.,Lowe,D.A.,The Journal of pharmacology and experimental therapeutics.2011,336,242-253)，在逐漸提高內(nèi)源性配體拮抗劑PNU-282987(美國sigma公司)或LD486的濃度情況下取代結(jié)合于大鼠腦細胞膜的[³H]-Methyllycaconitine放射性配體的速率曲線，結(jié)果如圖1所示。從圖1可以看出，隨著PNU-282987濃度逐漸增加，[³H]-MLA的結(jié)合量逐漸減少，Ki值為34.1±4.3nM；而對于化合物LD486，其濃度加至10μM時仍不會減少[³H]-MLA與大鼠海馬區(qū)α7nAChR的結(jié)合，說明LD486與α7nAChR的結(jié)合位點并不是目前認為激動劑在α7nAChR結(jié)合位點。

2.利用雙電極電壓鉗實驗(Prickaerts,J.,van Goethem,N.P.,Chesworth,R.,Shapiro,G.,Boess,F.G.,Methfessel,C.,Reneerkens,O.A.,Flood,D.G.,Hilt,D.,Gawryl,M.,Bertrand,S.,Bertrand,D.,Konig,G.,Neuropharmacology 2012,62,1099-1110)發(fā)現(xiàn)LD486作為α7尼古丁乙酰膽堿受體正向變構(gòu)調(diào)節(jié)劑的活性較強。

圖2表示的是100μM Ach(乙酰膽堿，美國sigma公司)在不添加LD486以及添加不同濃度的LD486下蛙卵細胞膜片鉗響應強度。從圖2可以看出，以單獨加入100μM ACh引起的電流作為對照，可以看到只加入不同濃度的LD486(0.1-10μM)并不會誘發(fā)α7nAChR特征性電流，但LD486孵育1min后再同時加入相同濃度的LD486和100μM ACh，可以觀察到100μM ACh所誘發(fā)的電流幅度與對照組相比顯著增加。

圖3為LD486的濃度響應曲線。峰值電流幅值只通過100μM ACh與不同濃度LD486產(chǎn)生的振幅作出歸一化曲線。EC₅₀＝3.2μM，Emax＝320％，nHill＝1.4(所有數(shù)據(jù)測量次數(shù)為6次)。從圖3可以看出，采用Hill方程擬合量效曲線并計算其動力學參數(shù)，結(jié)果顯示LD486最大程度可調(diào)節(jié)內(nèi)源性激動劑ACh電流幅度為3.2倍左右，EC₅₀值為3.2±0.3μM，希爾系數(shù)為1.4±0.2(n＝6)。

3.利用雙電極電壓鉗實驗(Prickaerts,J.,van Goethem,N.P.,Chesworth, R.,Shapiro,G.,Boess,F.G.,Methfessel,C.,Reneerkens,O.A.,Flood,D.G.,Hilt,D.,Gawryl,M.,Bertrand,S.,Bertrand,D.,Konig,G.,Neuropharmacology 2012,62,1099-1110)，發(fā)現(xiàn)LD486不增強蛙卵細胞中α4β2和α3β4受體的電流強度。

圖4左圖顯示的是只在30μM ACh刺激下的蛙卵細胞對α4β2的響應強度曲線。圖4右圖顯示的是在30μM ACh以及10μM LD486刺激下的蛙卵細胞對α4β2的響應強度曲線。蛙卵細胞預先被10μM LD486刺激60秒。

α4β2如今也被認為是AD的潛在治療靶點，但本發(fā)明的目的是篩選α7nAChR靶向化合物，以利于研究α7nAChR在神經(jīng)精神疾病中作用；靶向nAChR研發(fā)的藥物目前在臨床上發(fā)現(xiàn)普遍存在胃腸道不良反應，因此我們希望LD486對于nAChR家族范圍內(nèi)的靶點專一性較好，以減少作用于其它無關靶點而帶來的不良反應。

以蛙卵作為外源表達系統(tǒng)，以1：1比例注射不同的α亞基和β亞基。48h后檢測通道是否表達，發(fā)現(xiàn)10μM ACh可分別激活α4β2、α3β4受體，但加入LD486對10μM ACh誘發(fā)電流的幅度無明顯影響。

4.利用全自動膜片鉗Qplate-16(Schmalhofer,W.A.,Swensen,A.M.,Thomas,B.S.,Felix,J.P.,Haedo,R.J.,Solly,K.,Kiss,L.,Kaczorowski,G.J.,Garcia,M.L.,Assay and drug development technologies 2010,8,714-726)發(fā)現(xiàn)LD486對表達于CHO(中國倉鼠卵巢細胞)細胞株上的hERG(人類ether-a-go-go相關基因)通道沒有抑制作用。

hERG通道在不添加或添加不同濃度的LD486或cisapride(西沙必利，美國Sigma公司)藥物相關的hERG鉀通道抑制能夠?qū)е滦氖已舆t復極(長QT間期綜合征)，可能引發(fā)尖端扭轉(zhuǎn)室速等致命性心律失常，甚至猝死的條件下的響應電流強度。結(jié)果顯示，LD486對于hERG通道有輕微的抑制作用，但由于抑制效應較弱，仍可作為先導化合物，對其進行結(jié)構(gòu)優(yōu)化以期得到調(diào)節(jié)α7nAChR能力更強的化合物。