1.突變體v3或v2 fHbp,其為:
(A)包含突變體fHbp v2氨基酸序列的多肽,其中:(a)所述氨基酸序列與SEQ ID NO:5具有至少80%序列同一性,和/或包含SEQ ID NO:5的至少7個氨基酸長且含有來自SEQ ID NO:5的S32的片段;但(b)所述氨基酸序列在殘基S32處不同于SEQ ID NO:5,條件是如果突變體fHbp v2氨基酸序列包括僅殘基32處的取代,則該取代不是被丙氨酸取代,或以下殘基中的至少一個被取代;V33、L39、L41、F69、V100、I113、F122、L123、V124、S125、G126、L127、G128、S151、H239和/或E240;
或者
(B)包含突變體fHbp v3氨基酸序列的多肽,其中:(a)所述氨基酸序列與SEQ ID NO:17具有至少80%序列同一性,和/或包含SEQ ID NO:17的至少7個氨基酸長且含有來自SEQ ID NO:17的S32的片段;但(b)所述氨基酸序列在殘基S32處不同于SEQ ID NO:17,條件是如果突變體fHbp v3氨基酸序列包括僅殘基32處的取代,則該取代不是被丙氨酸取代,或以下殘基中的至少一個被取代;I33、L39、L41、F72、V103、T116、F125、L126、V127、S128、G129、L130、G131、S154、H242和/或E243。
2.權(quán)利要求1的多肽,其中:(A)所述氨基酸序列與SEQ ID NO:5的不同在于S32和以下中的一個或多個處的取代:V33、L39、L41、F69、V100、I113、F122、L123、V124、S125、G126、L127、G128、S151、H239和/或E240;例如,其中所述取代選自:S32V;V33C;L39C;L41C;F69C;V100T;I113S;F122C;L123R;V124I;S125G或S125T;G126D;L127I;G128A;S151C;H239R;E240H;或(B)所述氨基酸序列與SEQ ID NO:17的不同在于S32和以下中的一個或多個處的取代:I33、L39、L41、F72、V103、T116、F125、L126、V127、S128、G129、L130、G131、S154、H242和/或E243;例如,其中所述取代選自:S32V;I33C;L39C;L41C;F72C;V103T;T116S;F125C;L126R;V127I;S128G or S128T;G129D;L130I;G131A;S154C;H242R;和E243H。
3.權(quán)利要求1(A)的多肽,其包含多個殘基處的取代,其中所述多個殘基選自如下組2B、2I、2J或2O:
2B:殘基32和123;
2I:殘基32和125;
2J:殘基32、123和125;或
2O:殘基32、123、124、125、126、127和128。
4.權(quán)利要求3的多肽,其包含相對于SEQ ID NO:5的取代S32V和L123R,任選地進一步包含取代V124I、S125G、G126D、L127I、G128A;例如,包含SEQ ID NO:20或SEQ ID NO:45或SEQ ID NO:58。
5.權(quán)利要求1(B)的多肽,其包含多個殘基處的取代,其中所述多個殘基選自如下組3B、3I、3J或3O:
3B:殘基32和126;
3I:殘基32和128;
3J:殘基32、126和128;或
3O:殘基32、126、127、128、129、130和131。
6.權(quán)利要求5的多肽,其包含相對于SEQ ID NO:17的取代S32V和L126R,任選地進一步包含取代V127I、S128G、G129D、L130I、G131A;例如,包含SEQ ID NO:44或SEQ ID NO:61。
7.任一前述權(quán)利要求的多肽,其還包括破壞所述多肽結(jié)合至人因子H的能力的一個或多個進一步突變;例如,在v2中,包括在殘基R73、D203、E210、G228、S121、F122、A192、E194、V199、I200、L201、T213、H215、F219、T231和E240中的一個或多個處的取代,或者在v3中,包括在殘基Q35、I178、L87、A88、V127、V202、E213、T216、H218、T234、V241、E243和G248中的一個或多個處的取代。
8.多肽,其包含:
? 氨基酸序列SEQ ID NO:45,其任選地具有1、2、3、4或5個單一氨基酸取代、缺失和/或插入,其中所述多肽可以引發(fā)抗體,所述抗體結(jié)合至腦膜炎球菌fHbp多肽,所述腦膜炎球菌fHbp多肽由SEQ ID NO:2的氨基酸序列組成(例如,包含氨基酸序列SEQ ID NO:45且具有1、2或3個單一氨基酸取代),但不在殘基V32或R123處突變;
? 氨基酸序列SEQ ID NO:44,其任選地具有1、2、3、4或5個單一氨基酸取代、缺失和/或插入,其中所述多肽可以引發(fā)抗體,所述抗體結(jié)合至腦膜炎球菌fHbp多肽,所述腦膜炎球菌fHbp多肽由SEQ ID NO:40的氨基酸序列組成(例如,包含氨基酸序列SEQ ID NO:44且具有1、2或3個單一氨基酸取代),但不在殘基V32或R126處突變;
? 氨基酸序列SEQ ID NO:58,其任選地具有1、2、3、4或5個單一氨基酸取代、缺失和/或插入,其中所述多肽可以引發(fā)抗體,所述抗體結(jié)合至腦膜炎球菌fHbp多肽,所述腦膜炎球菌fHbp多肽由SEQ ID NO:2的氨基酸序列組成(例如,包含氨基酸序列SEQ ID NO:58且具有1、2或3個單一氨基酸取代),但不在殘基V32處突變;
? 氨基酸序列SEQ ID NO:61,其任選地具有1、2、3、4或5個單一氨基酸取代、缺失和/或插入,其中所述多肽可以引發(fā)抗體,所述抗體結(jié)合至腦膜炎球菌fHbp多肽,所述腦膜炎球菌fHbp多肽由SEQ ID NO:2的氨基酸序列組成(例如,包含氨基酸序列SEQ ID NO:61且具有1、2或3個單一氨基酸取代),但不在殘基V32處突變;
? fHbp v3氨基酸序列,其中所述v3氨基酸序列與v3野生型氨基酸序列是相同的,除了對應(yīng)于SEQ ID NO:17的Leu-126的氨基酸位置處的突變,條件是所述突變不是取代為丙氨酸(例如,其中所述突變是取代為精氨酸);
? fHbp v2氨基酸序列,其中所述v2氨基酸序列與v2野生型氨基酸序列是相同的,除了對應(yīng)于SEQ ID NO:5的Leu-123的氨基酸位置處的突變,條件是所述突變不是取代為丙氨酸(例如,其中所述突變是取代為精氨酸);或
? 氨基酸序列SEQ ID NO:47,其任選地具有1、2、3、4或5個單一氨基酸取代、缺失和/或插入,其中所述多肽可以引發(fā)結(jié)合至以下中每一種的抗體:由SEQ ID NO:46的氨基酸序列組成的腦膜炎球菌fHbp多肽;由SEQ ID NO:4的氨基酸序列組成的腦膜炎球菌fHbp多肽;和由SEQ ID NO:40的氨基酸序列組成(例如,由SEQ ID NO:48組成)的腦膜炎球菌fHbp多肽。
9.質(zhì)?;蚱渌怂?,其包含編碼權(quán)利要求1至8中任一項的多肽的核苷酸序列。
10.用權(quán)利要求9的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化的宿主細胞;例如,其中所述細胞是腦膜炎球菌細菌,諸如具有mltA的下調(diào)或敲除的腦膜炎球菌細菌,并且也任選地具有以下的下調(diào)或敲除:(i)至少一種參與使得LPS的脂質(zhì)A部分有毒的基因,特別是lpxl1;和/或(ii)至少一種參與莢膜多糖合成或輸出的基因,特別是synX和/或ctrA。
11.從權(quán)利要求9的宿主細胞制備的膜囊泡,其中所述囊泡包括權(quán)利要求1至8中任一項的多肽。
12.免疫原性組合物,其包含權(quán)利要求1至8中任一項的多肽,或權(quán)利要求11的囊泡。
13.權(quán)利要求12的組合物,其進一步包含第二多肽,當(dāng)施用于哺乳動物時,所述第二多肽引發(fā)針對腦膜炎球菌殺細菌的抗體應(yīng)答。
14.權(quán)利要求12或權(quán)利要求13的組合物,其進一步包含(i)綴合的來自腦膜炎奈瑟氏菌血清群A、C、W135和/或Y的莢膜糖和/或(ii)綴合的來自肺炎鏈球菌的莢膜糖。
15.用于在哺乳動物中產(chǎn)生抗體應(yīng)答的方法,其包括施用權(quán)利要求12至14中任一項的免疫原性組合物。