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      一種通過固體發(fā)酵鐮孢菌Fusariumsp.產(chǎn)生新抗菌劑sambacide的方法與流程

      文檔序號:11827563閱讀:來源:國知局

      技術(shù)特征:

      1.一種通過固態(tài)發(fā)酵鐮孢菌Fusarium sp.B10.1發(fā)酵產(chǎn)生新抗菌劑sambacide,其特征在于通過鐮孢菌Fusarium sp.B10.1固體發(fā)酵產(chǎn)生一個新化合物為sambacide,其化學結(jié)構(gòu)為:

      2.一種通過固態(tài)發(fā)酵鐮孢菌Fusarium sp.B10.1發(fā)酵產(chǎn)生新抗菌劑sambacide的方法,其特征在于按如下步驟進行固體發(fā)酵:

      (1)將擬用微生物鐮孢菌Fusarium sp.B10.1首先進行活化,即將Fusariumsp.B10.1接種到經(jīng)過121℃高溫滅菌處理的PDA斜面培養(yǎng)基后,于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3-7d后,置于4℃冰箱中;

      (2)將活化的菌種接到PDB種子培養(yǎng)基中,于恒溫搖床中培養(yǎng)3-7d;

      (3)取洗凈的土豆切成丁后,取適量的土豆丁置于組織培養(yǎng)瓶中;將裝有土豆的組織培養(yǎng)瓶加蓋包裝后置于121℃高溫滅菌箱中滅菌30min,取出后將組織培養(yǎng)瓶冷卻;

      (4)將步驟(2)的種子培養(yǎng)基在無菌環(huán)境下接種到經(jīng)過步驟(3)前處理的土豆上,加蓋后置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5-40d后取出;

      (5)經(jīng)微生物鐮孢菌Fusarium sp.B10.1發(fā)酵后的土豆培養(yǎng)基經(jīng)過甲醇超聲提取、過濾和濃縮得到粗提物;分離粗提物得到的sambacide的結(jié)構(gòu)式如下:

      (6)經(jīng)TLC薄層層析法檢測,然后經(jīng)過硅膠柱進行分離,分離過程采用梯度洗脫,洗脫劑為氯仿和甲醇混合物,其中氯仿:甲醇按20:1—5:1混合,然后經(jīng)分離得到的化合物上凝膠柱純化,通過1D/2D NMR以及HRESIMS鑒定得到新化合物結(jié)構(gòu);

      (7)采用如下HPLC色譜條件測定sambacide的產(chǎn)量。

      3.根據(jù)權(quán)利要求2所述通過固態(tài)發(fā)酵鐮孢菌Fusarium sp.B10.1發(fā)酵產(chǎn)生新的抗菌劑sambacide的方法,其特征在于所述發(fā)酵方法為固態(tài)發(fā)酵。

      4.根據(jù)權(quán)利要求2所述通過固態(tài)發(fā)酵鐮孢菌Fusarium sp.B10.1發(fā)酵產(chǎn)生新的抗菌劑sambacide的方法,其特征在于所述發(fā)酵時間為5-40d。

      5.根據(jù)權(quán)利要求2所述通過固態(tài)發(fā)酵鐮孢菌Fusarium sp.B10.1發(fā)酵產(chǎn)生新的抗菌劑sambacide的方法,其特征在于所述發(fā)酵溫度為20-30℃。

      6.根據(jù)權(quán)利要求2所述通過固態(tài)發(fā)酵鐮孢菌Fusarium sp.B10.1發(fā)酵產(chǎn)生新的抗菌劑sambacide的方法,其特征在于所述提取溶劑為甲醇。

      7.根據(jù)權(quán)利要求2所述通過固態(tài)發(fā)酵鐮孢菌Fusarium sp.B10.1發(fā)酵產(chǎn)生新的抗菌劑sambacide的方法,其特征在于按如下HPLC條件進行含量測定:

      (1)色譜柱:ODS高效液相色譜柱;

      (2)梯度洗脫程序:0–10min,30–60%乙腈;10–20min,60%乙腈;20–25,60–30%乙腈;

      (3)檢測波長:247nm;

      (4)流速:1.5mL/min;

      (5)柱溫:25℃。

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