1.一種TLR7配體GD聯(lián)合CEA抗原制備特異性GD-DC-CTL的方法,包括步驟:
1) 采集外周血,分離提取單個核細(xì)胞;
2) 誘導(dǎo)活化DC細(xì)胞與CTL細(xì)胞;
3) 使用TLR7配體聯(lián)合CEA抗原刺激未成熟DC細(xì)胞;
4)進(jìn)一步通過細(xì)胞因子誘導(dǎo)未成熟DC細(xì)胞成為成熟DC細(xì)胞;
5)將成熟DC細(xì)胞與CTL細(xì)胞共培養(yǎng),獲得具有CEA抗原特異性GD-DC-CTL細(xì)胞。
2.如權(quán)利要求1所述的TLR7配體GD聯(lián)合CEA抗原制備特異性GD-DC-CTL的方法,其特征是 :所述步驟1)具體包括:采集人外周血至含有肝素鈉的離心管中,離心獲得血漿和血細(xì)胞,將血細(xì)胞用Ficoll淋巴細(xì)胞分離液進(jìn)行密度梯度離心獲得單個核細(xì)胞。
3.如權(quán)利要求1所述的TLR7配體GD聯(lián)合CEA抗原制備特異性GD-DC-CTL的方法,其特征是 :所述步驟2)具體包括:通過貼壁法將步驟1)中分離獲得的單個核細(xì)胞進(jìn)一步分離為單核細(xì)胞和淋巴細(xì)胞,淋巴細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng),備用;單核細(xì)胞經(jīng)體外誘導(dǎo)分化為未成熟DC細(xì)胞。
4.如權(quán)利要求3所述的TLR7配體GD聯(lián)合CEA抗原制備特異性GD-DC-CTL的方法,其特征是 :淋巴細(xì)胞重懸于培養(yǎng)基中,并加入IFN-γ;培養(yǎng)20-28小時后加入抗CD3單抗、抗CD28單抗、IL-1α、IL-2,其中每2-3天補(bǔ)加含有IL-2的培養(yǎng)基,使補(bǔ)加培養(yǎng)基后的細(xì)胞密度控制在(1-2)×106/ml。
5.如權(quán)利要求3所述的TLR7配體GD聯(lián)合CEA抗原制備特異性GD-DC-CTL的方法,其特征是 :單核細(xì)胞重懸于培養(yǎng)基中,并加入GM-CSF、IL-4。
6.如權(quán)利要求1所述的TLR7配體GD聯(lián)合CEA抗原制備特異性GD-DC-CTL的方法,其特征是 :所述步驟3)具體包括: 在培養(yǎng)基中加入TLR7配體GD和CEA抗原,刺激上述單核細(xì)胞。
7.如權(quán)利要求1所述的TLR7配體GD聯(lián)合CEA抗原制備特異性GD-DC-CTL的方法,其特征是 :所述步驟4)具體包括: 在培養(yǎng)上述單核細(xì)胞的第5天加入TNF-α。
8.如權(quán)利要求1所述的TLR7配體GD聯(lián)合CEA抗原制備特異性GD-DC-CTL的方法,其特征是 :所述步驟5)具體包括: 將步驟4)中培養(yǎng)的成熟DC細(xì)胞及步驟2)中培養(yǎng)的CTL細(xì)胞收集并重懸于含有IL-2的培養(yǎng)基中進(jìn)行共培養(yǎng)至第14-21天,獲得具有CEA抗原特異性DC-CTL細(xì)胞。