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      DON降解酶的提取分離純化方法與流程

      文檔序號:11936677閱讀:來源:國知局

      技術(shù)特征:

      1.一種DON降解酶的提取分離純化方法,其特征在于包括以下步驟:

      a.利用DON作為唯一碳源初篩能夠利用DON的菌株,

      b.以環(huán)氧化合物為底物,篩選步驟a所得菌株的發(fā)酵液、菌懸液和胞內(nèi)液產(chǎn)還氧化合物降解酶中酶活力最強的菌種,

      c.將步驟b所得菌種進行培養(yǎng)發(fā)酵,從菌種中分離出DON降解酶,

      d.純化DON降解酶。

      2.如權(quán)利要求1所述的DON降解酶的提取分離純化方法,其特征在于步驟a中的菌株來自于長期堆放塑料橡膠區(qū)域土壤、環(huán)氧樹脂跑道下層土壤、汽油站廢棄汽油區(qū)域土壤以及食堂下水道土壤。

      3.如權(quán)利要求1所述的DON降解酶的提取分離純化方法,其特征在于步驟b中采用苯基環(huán)氧乙烷作為底物。

      4.如權(quán)利要求1所述的DON降解酶的提取分離純化方法,其特征在于步驟c中,DON降解酶的分離采用硫酸銨分級分離的方法,先以30%飽和度的硫酸銨沉淀出雜蛋白并除去,再以80%飽和度的硫酸銨沉降粗蛋白沉淀,最后將粗蛋白溶解進行透析除去硫酸鹽。

      5.如權(quán)利要求1所述的DON降解酶的提取分離純化方法,其特征在于步驟d中,DON降解酶的純化分別經(jīng)DEAE-52纖維素離子交換柱層析,Sephadex G-100凝膠過濾層析,洗脫緩沖液中含0-1.0mol/L不同梯度濃度的NaCl溶液,使不同的蛋白洗脫出來,測定洗脫得到的蛋白的酶活力和蛋白含量,確定酶活力和蛋白含量較高的位置,合并酶活峰,透析除鹽,冷凍干燥,得到純化的DON降解酶。

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