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      一種生物轉(zhuǎn)化纖維素水解液生產(chǎn)D?1,2,4?丁三醇的方法與流程

      文檔序號(hào):11809363閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

      技術(shù)特征:

      1.一種生物轉(zhuǎn)化纖維素水解液生產(chǎn)D-1,2,4-丁三醇的方法,其特征在于,構(gòu)建克隆表達(dá)2-酮酸脫羧酶和D-木糖脫氫酶,木糖酸脫水酶和醇脫氫酶的基因,并將構(gòu)建好的基因轉(zhuǎn)入敲除木糖異構(gòu)酶的宿主菌的細(xì)胞內(nèi)得基因工程菌,培養(yǎng)基因工程菌并接種至纖維素水解液中發(fā)酵生產(chǎn)D-1,2,4-丁三醇。

      2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種生物轉(zhuǎn)化纖維素水解液生產(chǎn)D-1,2,4-丁三醇的方法,其特征在于,所述的2-酮酸脫羧酶,GenBank: AY143338.1 ;D-木糖脫氫酶,Gene ID: 7329904;木糖酸脫水酶,Gene ID: 946829;醇脫氫酶,Gene ID:00 946036;木糖異構(gòu)酶,Gene ID: 948141。

      3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種生物轉(zhuǎn)化纖維素水解液生產(chǎn)D-1,2,4-丁三醇的方法,其特征在于:所述的宿主菌為大腸桿菌BL21(DE3)。

      4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種生物轉(zhuǎn)化纖維素水解液生產(chǎn)D-1,2,4-丁三醇的方法,其特征在于,包括如下步驟:

      步驟1,構(gòu)建克隆表達(dá)2-酮酸脫羧酶,D-木糖脫氫酶,木糖酸脫水酶和醇脫氫酶,敲除宿主菌木糖利用和D-BT 合成中間代謝物分解途徑中木糖異構(gòu)酶的基因,得基因工程菌;

      步驟2,木質(zhì)纖維素的水解及預(yù)處理

      將稀硫酸與玉米芯混合后的懸浮水解液經(jīng)高溫滅菌后,加入Ca(OH)2溶液調(diào)節(jié)pH至7.2,過(guò)濾后向?yàn)V液中加入活性炭,再過(guò)濾得玉米芯水解液;

      步驟3,發(fā)酵培養(yǎng)基的制備

      每升玉米芯水解液中加入10g/L Nacl, 5g/L酵母粉和10g/L蛋白胨,滅菌備用;

      步驟4,將基因工程菌接種至發(fā)酵培養(yǎng)基中,加入IPTG誘導(dǎo)發(fā)酵得產(chǎn)物D-1,2,4-丁三醇。

      5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種生物轉(zhuǎn)化纖維素水解液生產(chǎn)D-1,2,4-丁三醇的方法,其特征在于,所述步驟2中稀硫酸的體積分?jǐn)?shù)為2%,玉米芯與稀硫酸的質(zhì)量體積比為1:5,活性炭與濾液的質(zhì)量體積比為2%。

      6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種生物轉(zhuǎn)化纖維素水解液生產(chǎn)D-1,2,4-丁三醇的方法,其特征在于:步驟4中發(fā)酵72h。

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