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      包含一種或多種可組合的突變的芽孢桿菌屬枯草桿菌蛋白酶的制作方法

      文檔序號(hào):11126011閱讀:來源:國(guó)知局

      技術(shù)特征:

      1.芽孢桿菌屬枯草桿菌蛋白酶的分離的枯草桿菌蛋白酶變體,其中所述枯草桿菌蛋白酶變體是具有蛋白水解活性的成熟形式,并包含在選自24、45、101、109、118、213和217的兩個(gè)或多個(gè)位置處的替換,其中所述位置通過對(duì)應(yīng)于如SEQ ID NO:1所述的解淀粉芽孢桿菌(B.amyloliquefaciens)枯草桿菌蛋白酶BPN’的氨基酸序列而進(jìn)行編號(hào)。

      2.權(quán)利要求1所述的分離的枯草桿菌蛋白酶變體,其中所述枯草桿菌蛋白酶變體具有大于或等于0.5的相對(duì)蛋白質(zhì)表達(dá)水平性能指數(shù)(TCA PI)和/或去污活性性能指數(shù)(BMI PI)。

      3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的分離的枯草桿菌蛋白酶變體,其中所述芽孢桿菌屬枯草桿菌蛋白酶是GG36,并且其中所述替換在選自S24Q、S24E、S24L、S24R、R45Q、R45E、R45L、S101Q、S101E、S101L、S101R、Q109E、Q109L、Q109R、G118Q、G118E、G118L、G118R、T213Q、T213L、T213R、T213E、L217Q和L217E的兩個(gè)或多個(gè)位置處,其中所述位置對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO:1的BPN’枯草桿菌蛋白酶的位置。

      4.權(quán)利要求1或2所述的分離的枯草桿菌蛋白酶變體,其中所述芽孢桿菌屬枯草桿菌蛋白酶是FNA,并且其中所述替換在選自S24Q、S24E、S24L、S24R、A45Q、A45E、A45L、A45R、S101Q、S101E、S101L、S101R、N109Q、N109E、N109L.N109R、K213Q,K213E、K213L、K213R、L217Q、L217E的兩個(gè)或多個(gè)位置處,其中所述位置對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO:1的BPN’枯草桿菌蛋白酶的位置。

      5.權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的分離的枯草桿菌蛋白酶變體,其中所述芽孢桿菌屬枯草桿菌蛋白酶是GG36,且其中所述替換在選自S24Q-R45Q-S101Q-G118Q-T213Q,R45Q-S101Q-G118Q-T213Q,S101Q-G118Q-T213Q,G118Q-T213Q,S24E-R45Q-S101Q-G118Q-T213Q,S24E-R45E-S101Q-G118Q-T213Q,S24E-R45E-S101E-G118Q-T213Q,S24E-R45E-S101E-Q109E-G118Q-T213Q,S24E-R45E-S101E-Q109E-G118E-T213Q,S24E-R45E-S101E-Q109E-G118E-T213E,S24L-R45Q-S101Q-G118Q-T213Q,S24L-R45L-S101Q-G118Q-T213Q,S24L-R45L-S101L-G118Q-T213Q,S24L-R45L-S101L-Q109L-G118Q-T213Q,S24L-R45L-S101L-Q109L-G118L-T213Q,S24L-R45L-S101L-Q109L-G118L-T213L,S24R-R45Q-S101Q-G118Q-T213Q,S24R-S101Q-G118Q-T213Q,S24R-S101R-G118Q-T213Q,S24R-S101R-Q109R-G118Q-T213Q,S24R-S101R-Q109R-G118R-T213Q,S24R-S101R-Q109R-G118R-T213R,S24E-S101R-Q109R-G118R-T213R,S24E-R45E-S101R-Q109R-G118R-T213R,S24E-R45E-S101E-Q109R-G118R-T213R,S24E-R45E-S101E-Q109E-G118R-T213R,S24E-R45E-S101E-Q109E-G118E-T213R,S24E-R45E-S101E-Q109E-G118E-T213E,S24Q-R45Q-S101Q-G118Q-T213Q-L217Q,and S24Q-R45Q-S101Q-G118Q-T213Q-L217E的兩個(gè)或多個(gè)位置處,其中所述位置對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO:1的BPN’枯草桿菌蛋白酶的位置。

      6.芽孢桿菌屬枯草桿菌蛋白酶GG36的分離的枯草桿菌蛋白酶變體,其中所述枯草桿菌蛋白酶變體是具有蛋白水解活性的成熟形式,并且包含替換T213Q,其中所述位置對(duì)應(yīng)于如SEQ ID NO:1所示的解淀粉芽孢桿菌枯草桿菌蛋白酶BPN’的氨基酸序列。

      7.權(quán)利要求1、2或4中任一項(xiàng)所述的分離的枯草桿菌蛋白酶變體,其中所述芽孢桿菌屬枯草桿菌蛋白酶是FNA,且其中所述替換在選自S24Q-A45Q-S101Q-N109Q-N118Q-K213Q,A45Q-S101Q-N109Q-N118Q-K213Q,S101Q-N109Q-N118Q-K213Q,N109Q-N118Q-K213Q,N118Q-K213Q,S24E-A45Q-S101Q-N109Q-N118Q-K213Q,S24E-A45E-S101Q-N109Q-N118Q-K213Q,S24E-A45E-S101E-N109Q-N118Q-K213Q,S24E-A45E-S101E-N109E-N118Q-K213Q,S24E-A45E-S101E-N109E-N118E-K213Q,S24E-A45E-S101E-N109E-N118E-K213E,S24L-A45Q-S101Q-N109Q-N118Q-K213Q,S24L-A45L-S101Q-N109Q-N118Q-K213Q,S24L-A45L-S101L-N109Q-N118Q-K213Q,S24L-A45L-S101L-N109L-N118Q-K213Q,S24L-A45L-S101L-N109L-N118L-K213Q,S24L-A45L-S101L-N109L-N118L-K213L,S24R-A45Q-S101Q-N109Q-N118Q-K213Q,S24R-A45R-S101Q-N109Q-N118Q-K213Q,S24R-A45R-S101R-N109Q-N118Q-K213Q,S24R-A45R-S101R-N109R-N118Q-K213Q,S24R-A45R-S101R-N109R-N118R-K213Q,S24R-A45R-S101R-N109R-N118R-K213R,S24E-A45R-S101R-N109R-N118R-K213R,S24E-A45E-S101R-N109R-N118R-K213R,S24E-A45E-S101E-N109R-N118R-K213R,S24E-A45E-S101E-N109E-N118R-K213R,S24E-A45E-S101E-N109E-N118E-K213R,S24E-A45E-S101E-N109E-N118E-K213E,S24Q-A45Q-S101Q-N109Q-N118Q-K213Q-L217Q,and S24Q-A45Q-S101Q-N109Q-N118Q-K213Q-L217E的兩個(gè)或多個(gè)位置處,其中所述位置對(duì)應(yīng)于SEQ ID NO:1的BPN’枯草桿菌蛋白酶的位置。

      8.權(quán)科要求1、2或4中任一項(xiàng)所述的分離的枯草桿菌蛋白酶變體,其中所述蛋白酶變體是具有蛋白水解活性的芽孢桿菌屬枯草桿菌蛋白酶FNA的分離的枯草桿菌蛋白酶變體的成熟形式,并且包含替換K213Q,其中所述位置通過對(duì)應(yīng)于如SEQ ID NO:1所述的解淀粉芽孢桿菌枯草桿菌蛋白酶BPN’的氨基酸序列而進(jìn)行編號(hào)。

      9.芽孢桿菌屬枯草桿菌蛋白酶的分離的枯草桿菌蛋白酶變體,其中所述枯草桿菌蛋白酶變體是具有蛋白水解活性的成熟形式,并包含選自S24Q-A45Q-S101Q-N109Q-N118Q-K213Q,A45Q-S101Q-N109Q-N118Q-K213Q,S101Q-N109Q-N118Q-K213Q,N109Q-N118Q-K213Q,S24E-A45Q-S101Q-N109Q-N118Q-K213Q,S24E-A45E-S101Q-N109Q-N118Q-K213Q,S24E-A45E-S101E-N109Q-N118Q-K213Q,S24E-A45E-S101E-N109E-N118Q-K213Q,S24L-A45Q-S101Q-N109Q-N118Q-K213Q,S24L-A45L-S101Q-N109Q-N118Q-K213Q,S24L-A45L-S101L-N109Q-N118Q-K213Q,S24L-A45L-S101L-N109L-N118Q-K213Q,S24R-A45Q-S101Q-N109Q-N118Q-K213Q,S24R-A45R-S101Q-N109Q-N118Q-K213Q,S24E-A45E-S101E-N109R-N118R-K213R,S24E-A45E-S101E-N109E-N118R-K213R,S24E-A45E-S101E-N109E-N118E-K213R,S24E-A45E-S101E-N109E-N118E-K213E,S24Q-A45Q-S101Q-N109Q-N118Q-K213Q-L217Q,和S24Q-A45Q-S101Q-N109Q-N118Q-K213Q-L217E的兩個(gè)或者多個(gè)位置的替換,其中所述芽孢桿菌屬枯草桿菌蛋白酶是FNA,其中所述位置通過對(duì)應(yīng)于如SEQ ID NO:1所示的解淀粉芽孢桿菌(B.amyloliquefaciens)枯草桿菌蛋白酶BPN’的氨基酸序列而進(jìn)行編號(hào)。

      10.權(quán)利要求9所述的分離的枯草桿菌蛋白酶變體,其中所述枯草桿菌蛋白酶變體具有大于或等于0.5的相對(duì)蛋白質(zhì)表達(dá)水平性能指數(shù)(TCA PI)和/或去污活性性能指數(shù)(BMI PI),并且其中[TCA PI]×[BMI PI]大于0.95。

      11.權(quán)利要求9所述的分離的枯草桿菌蛋白酶變體,其中所述枯草桿菌蛋白酶變體具有大于1.0的相對(duì)蛋白質(zhì)表達(dá)水平性能指數(shù)(TCA PI)和,大于或者等于0.95的去污活性性能指數(shù)(BMI PI)。

      12.分離的核酸,其編碼如權(quán)利要求1-11中任一項(xiàng)所述的枯草桿菌蛋白酶變體。

      13.表達(dá)載體,其包含權(quán)利要求12所述的核酸。

      14.宿主細(xì)胞,其包含如權(quán)利要求13所述的表達(dá)載體。

      15.清潔組合物,其包含至少一種權(quán)利要求1-11中任一項(xiàng)所述的枯草桿菌蛋白酶變體。

      16.權(quán)利要求15所述的清潔組合物,其中所述清潔組合物是洗滌劑。

      17.權(quán)利要求16所述的清潔組合物,其中所述洗滌劑是強(qiáng)效液體洗滌劑或干洗洗滌劑。

      18.權(quán)利要求16所述的清潔組合物,其中所述洗滌劑是餐具洗滌劑。

      19.根據(jù)權(quán)利要求15-18中任一項(xiàng)所述的清潔組合物,其進(jìn)一步包含選自半纖維素酶、纖維素酶、過氧化物酶、蛋白酶、金屬蛋白酶、木聚糖酶、脂肪酶、磷脂酶、酯酶、過水解酶、角質(zhì)酶、果膠酶、果膠酸裂合酶、甘露聚糖酶、角蛋白酶、還原酶、氧化酶、酚氧化酶、脂肪加氧酶、木質(zhì)素酶、支鏈淀粉酶、鞣酸酶、戊聚糖酶、malanase、β-葡聚糖酶、阿拉伯糖苷酶、透明質(zhì)酸酶、軟骨素酶、漆酶和淀粉酶或它們的混合物的一種或多種其他酶或酶衍生物。

      20.權(quán)利要求1-11中任一項(xiàng)所述的枯草桿菌蛋白酶變體,其進(jìn)一步包含至少一種穩(wěn)定劑。

      21.清潔組合物,其包含至少0.0001重量百分比的至少一種權(quán)利要求1-11中任一項(xiàng)所述的枯草桿菌蛋白酶變體,并任選地,至少一種合適的輔助成分。

      22.清潔的方法,所述方法包含步驟:

      a)將包含織物的表面和/或物品與權(quán)利要求6-12中任一項(xiàng)所述的清潔組合物或權(quán)利要求1-11和20中任一項(xiàng)所述的枯草桿菌蛋白酶變體接觸;并

      b)任選地洗滌和/或漂洗所述表面或物品。

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