本發(fā)明涉及雌二醇超細(xì)微粒的制備，具體涉及一種應(yīng)用超臨界抗溶劑技術(shù)制備雌二醇超細(xì)微粒的方法。
背景技術(shù)：
：超臨界抗溶劑(SupercriticalAnti-solvent，SAS)在制備超細(xì)微粒方面潛力巨大，其操作條件溫和，對(duì)生物制品、抗生素藥物和藥物載體的微細(xì)化尤為適用。與噴霧干燥、氣流粉碎、研磨、冷凍干燥等傳統(tǒng)制粒方法相比，其主要優(yōu)點(diǎn)在于制備得到的微粒有機(jī)溶劑殘余少、反應(yīng)條件溫和，可防止熱敏性藥物受熱分解、合成顆粒的粒徑及分布、形貌可控等。超臨界CO2抗溶劑過程是將溶質(zhì)溶解到合適的溶劑中(通常為有機(jī)溶劑)，形成一定濃度的溶液，然后使溶液與超臨界CO2接觸，由于溶質(zhì)在超臨界CO2中的溶解度遠(yuǎn)小于在溶劑中的溶解度，接觸后兩者快速相互擴(kuò)散，溶劑體積膨脹、密度下降，溶劑對(duì)溶質(zhì)的溶解能力降低，瞬間形成較高的過飽和度而使溶質(zhì)結(jié)晶析出，形成純度高、粒徑分布均勻的超細(xì)微粒。按照操作方式的不同，超臨界抗溶劑技術(shù)可分為氣體抗溶劑法(GasAnti-solvent，簡(jiǎn)稱GAS)、氣溶膠溶劑萃取法(AerosolSolventExtractionSystem，簡(jiǎn)稱ASES)或稱壓縮流體抗溶劑沉淀法(PrecipitationwithaCompressedFluidAnti-solvent，簡(jiǎn)稱PCA)、超臨界流體增強(qiáng)溶液分散法(SolutionEnhancedDispersionbySupercriticalFluids，簡(jiǎn)稱SEDS)等。其中，PCA法的主要優(yōu)點(diǎn)在于液體通過噴嘴形成霧滴分散到超臨界流體中，加劇了超臨界流體與溶液之間的擴(kuò)散傳質(zhì)，溶質(zhì)以更小的顆粒形式沉淀析出，從而制得的藥物微粒粒徑更小。雌二醇是一種由卵巢分泌的類固醇激素，是絕經(jīng)前女性卵巢中分泌的主要雌激素之一，也是內(nèi)源性最強(qiáng)的雌性激素。主要用于雌激素替代療法(ERT)，預(yù)防和治療絕經(jīng)期綜合征、阿爾茲海默癥，且對(duì)功能性子宮出血、晚期乳腺癌、前列腺癌、痤瘡和避孕等都有較好的療效。雌二醇在水中溶解度很低，導(dǎo)致口服生物利用度很低，僅為10％左右。如果能降低雌二醇的粒徑，則有望提高其在水中的溶解度，進(jìn)而提高其生物利用度。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是提供一種應(yīng)用超臨界抗溶劑技術(shù)制備雌二醇超細(xì)微粒的方法，以制備出粒徑細(xì)小的雌二醇，提高其在水中的溶解度，進(jìn)而提高其生物利用度。上述目的是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：一種應(yīng)用超臨界抗溶劑法制備雌二醇超細(xì)微粒的方法，包括如下步驟：步驟S1，將雌二醇溶解于有機(jī)溶劑中，得到雌二醇溶液；步驟S2，將CO2通入結(jié)晶釜中，調(diào)節(jié)結(jié)晶釜內(nèi)的溫度和壓力；步驟S3，繼續(xù)以一定流速通入CO2，維持結(jié)晶釜內(nèi)的溫度和壓力不變，同時(shí)將步驟S1制備的雌二醇溶液通入結(jié)晶釜中；步驟S4，雌二醇溶液通入完畢后，持續(xù)通入CO2，維持結(jié)晶釜內(nèi)的溫度和壓力不變，一段時(shí)間后卸壓；當(dāng)結(jié)晶釜內(nèi)壓力降至大氣壓后，打開結(jié)晶釜收集雌二醇超細(xì)微粒；其中，步驟S1和步驟S2不存在先后順序。優(yōu)選的，所述有機(jī)溶劑為丙酮和乙醇的混合溶劑，二者按照體積比1:1混合。優(yōu)選的，雌二醇溶液的質(zhì)量濃度為6-10mg/mL。優(yōu)選的，步驟S2調(diào)節(jié)結(jié)晶釜內(nèi)的溫度至35-50℃，壓力至8-18MPa。優(yōu)選的，步驟S3維持CO2的通入流速為2-4L/min。優(yōu)選的，步驟S3中雌二醇溶液通入結(jié)晶釜的體積流量為0.6-1.4mL/min。優(yōu)選的，步驟S4中所述一段時(shí)間為0.5-2h。優(yōu)選的，雌二醇溶液的質(zhì)量濃度為8mg/mL；CO2通入結(jié)晶釜的流速為3L/min；結(jié)晶釜內(nèi)溫度為40℃，壓力為14MPa；雌二醇溶液的體積流量為1.0mL/min；40分鐘后卸壓。優(yōu)選的，雌二醇溶液的質(zhì)量濃度為6mg/mL；CO2通入結(jié)晶釜的流速為3L/min；結(jié)晶釜內(nèi)溫度為55℃，壓力為8MPa；雌二醇溶液的體積流量為1.0mL/min；40分鐘后卸壓。優(yōu)選的，所述有機(jī)溶劑為乙醇和丙酮的混合溶劑，二者按照體積比1:2混合；雌二醇溶液的質(zhì)量濃度為6mg/mL；CO2通入結(jié)晶釜的流速為3L/min；結(jié)晶釜內(nèi)溫度為55℃，壓力為8MPa；雌二醇溶液的體積流量為1.0mL/min；40分鐘后卸壓。本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明提供的方法可以制備出粒徑細(xì)小的雌二醇，提高其在水中的溶解度，進(jìn)而提高其生物利用度；本發(fā)明方法的各項(xiàng)參數(shù)優(yōu)化方法合理，制備出的雌二醇顆粒粒徑細(xì)小，且回收率高。本發(fā)明方法與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)和顯著的進(jìn)步。附圖說明圖1：超臨界抗溶劑設(shè)備結(jié)構(gòu)裝置圖；圖2：結(jié)晶釜壓力對(duì)雌二醇顆粒粒徑和回收率的影響關(guān)系曲線圖；圖3：雌二醇溶液的質(zhì)量濃度對(duì)雌二醇顆粒粒徑和回收率的影響關(guān)系曲線圖；圖4：雌二醇溶液的體積流量對(duì)雌二醇顆粒粒徑和回收率的影響關(guān)系曲線圖；圖5：雌二醇原料藥和雌二醇超細(xì)微粒的溶出度對(duì)比曲線圖；圖中：1、CO2鋼瓶；2、恒溫循環(huán)器；3、高壓泵；4、儲(chǔ)液罐；5、高效液相泵；6、結(jié)晶釜；7、金屬過濾器；8、溶劑回收器；9、轉(zhuǎn)子流量計(jì)。具體實(shí)施方式下面結(jié)合實(shí)施例具體介紹本發(fā)明的技術(shù)方案。實(shí)施例1：?jiǎn)我蛩胤ù_定各關(guān)鍵參數(shù)的優(yōu)選取值范圍儀器與材料實(shí)驗(yàn)材料見表1，實(shí)驗(yàn)儀器見表2。表1實(shí)驗(yàn)材料材料名稱規(guī)格生產(chǎn)廠家雌二醇≥99％武漢貝爾卡生物醫(yī)藥有限公司CO2≥99％南京同氣氣體公司乙醇分析純南京化學(xué)試劑有限公司丙酮分析純南京化學(xué)試劑有限公司二氯甲烷分析純南京化學(xué)試劑有限公司甲醇分析純南京化學(xué)試劑有限公司二甲基亞砜分析純南京化學(xué)試劑有限公司表2實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備名稱型號(hào)生產(chǎn)廠家超臨界微粒制備系統(tǒng)Helix美國(guó)AppliedSeparations公司智能溶出實(shí)驗(yàn)儀ZRS-8L天津天大天發(fā)科技有限公司激光粒度分析儀MS2000英國(guó)Malvern公司紫外可見分光光度計(jì)UV-1800日本島津公司電子天平JY1002上海精密科學(xué)儀器有限公司低溫恒溫槽L-1500南京新辰生物科技有限公司高壓輸液泵L-1500美國(guó)AppliedSeparations公司數(shù)控超聲波清洗器KH-250DB昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司氣浴恒溫震蕩儀ZD-85常州國(guó)華電器有限公司超臨界抗溶劑設(shè)備及操作流程超臨界抗溶劑設(shè)備見圖1。操作流程如下：(1)保證儀器所有閥門均關(guān)閉的狀態(tài)下，開啟FlowmeterInlet閥門；(2)裝好過濾器，擰好結(jié)晶釜上各閥門，接上各類檢測(cè)器的插口，再打開各個(gè)加熱開關(guān)；(3)通一點(diǎn)樣品溶液清洗Solventpump；(4)打開TopInlet閥，向釜中沖入CO2，一段時(shí)間后系統(tǒng)保持穩(wěn)定，確保釜中溫度達(dá)到預(yù)設(shè)溫度后，再打開加壓泵給CO2加壓至預(yù)設(shè)壓力，接著旋開VesselButtonOutlet，調(diào)節(jié)流量，保持一段時(shí)間讓系統(tǒng)穩(wěn)定，同時(shí)可以清洗整個(gè)系統(tǒng)；大約30min完成；這時(shí)可認(rèn)為釜內(nèi)的狀態(tài)為穩(wěn)定的超臨界態(tài)；(5)開啟SolventPump向釜中打入樣品溶液；(6)關(guān)閉SolventPump，維持CO2的流量不變一段時(shí)間，使釜內(nèi)顆粒干燥；(7)關(guān)閉CO2鋼瓶閥門和加壓泵，使釜內(nèi)壓力下降，大約與鋼瓶壓力差不多時(shí)，關(guān)閉TopInlet，繼續(xù)排氣，完成后關(guān)閉系統(tǒng)；(8)收集得到的樣品；(9)徹底清潔整個(gè)系統(tǒng)。單因素實(shí)驗(yàn)：溶劑種類的影響結(jié)晶溫度45℃，壓力12MPa，體積流量1mL/min，質(zhì)量濃度8mg/mL條件下，設(shè)置不同的溶劑(甲醇、乙醇、丙酮、二氯甲烷不同比例的混合溶液)進(jìn)行比較研究。其中由于甲醇和二氯甲烷對(duì)雌二醇的溶解度較小，故考慮加入少量的DMSO作為助溶劑。結(jié)果如表3所示。從結(jié)果顯示，當(dāng)使用甲醇作為溶劑時(shí)，其粒徑較小，但加入少量DMSO后，排干溶劑過程變得十分困難，易造成產(chǎn)品的團(tuán)聚和潮濕現(xiàn)象；使用乙醇比例較大的混溶劑時(shí)，其粒徑、回收率和形貌都較好，但乙醇比例不宜過大，否則會(huì)造成雌二醇的溶解困難，以及排干溶劑過程的困難。故經(jīng)過綜合考慮，選擇乙醇和丙酮體積比為1:1的混溶液作為溶劑。表3溶劑種類對(duì)雌二醇微粒粒徑、回收率和形貌的影響單因素實(shí)驗(yàn)：結(jié)晶壓力的影響結(jié)晶溫度45℃，體積流量1mL/min，質(zhì)量濃度8mg/mL條件下，設(shè)置不同的結(jié)晶壓力(8、10、12、14、16、18MPa)進(jìn)行比較研究。隨著體系壓力的增大，粒徑先減小后增大，回收率先增大后減小。結(jié)果如圖2所示。此現(xiàn)象可能是因?yàn)樵谂R界狀態(tài)附近，壓力的微小變化就會(huì)引起CO2性質(zhì)的巨大改變，壓力越大密度越大，SC-CO2與有機(jī)溶劑間的質(zhì)量傳遞就越迅速，溶質(zhì)瞬間過飽和而析出，由于過程迅速，所以成核微?。煌瑫r(shí)由于溶質(zhì)析出迅速，所以回收率較高。但當(dāng)壓力持續(xù)升高到一定數(shù)值時(shí)，擴(kuò)散系數(shù)對(duì)壓力的變化不再敏感，傳質(zhì)效果減弱，造成粒徑增大，回收率減小。因此，確定結(jié)晶壓力的優(yōu)選范圍為10-14MPa。單因素實(shí)驗(yàn)：結(jié)晶溫度的影響結(jié)晶壓力12MPa，體積流量1mL/min，質(zhì)量濃度8mg/mL條件下，設(shè)置不同結(jié)晶溫度(35、40、45、50、55℃)進(jìn)行比較研究。結(jié)果顯示，當(dāng)溫度為35、40、45、50℃時(shí)，平均粒徑分別為17.25、14.03、9.07、15.92μm；回收率為44.2％、43.5％、72.3％、68.5％。而當(dāng)溫度為55℃時(shí)，經(jīng)過反復(fù)試驗(yàn)，得到的產(chǎn)物均呈潮濕、粘稠狀態(tài)，無法制得干燥的固體微粒。隨溫度升高，微粒粒徑減小，回收率增大，可能是由于隨著溫度升高，溶液的粘度減小，溶劑與超臨界CO2之間的傳質(zhì)增強(qiáng)而導(dǎo)致。而在50℃以上時(shí)，可能由于溫度較高，對(duì)產(chǎn)物的聚集狀態(tài)造成影響，故得到的產(chǎn)物呈團(tuán)聚狀態(tài)。因此，確定結(jié)晶溫度的優(yōu)選范圍為40-50℃。單因素實(shí)驗(yàn)：雌二醇溶液質(zhì)量濃度的影響結(jié)晶壓力12MPa，結(jié)晶溫度45℃，體積流量1mL/min條件下，設(shè)置不同雌二醇進(jìn)樣質(zhì)量濃度(6、7、8、9、10、11mg/mL)進(jìn)行比較研究。當(dāng)雌二醇質(zhì)量濃度增大時(shí)，其產(chǎn)品粒徑增大，回收率減小。當(dāng)雌二醇的質(zhì)量濃度過大(>12mg/ml)時(shí)，其在混合溶液中的溶解會(huì)變得困難。結(jié)果如圖3所示。原因可能是隨著濃度增加，溶液黏度增加，溶液霧化效果不好，使得SC-CO2與有機(jī)溶液接觸面積變小，傳質(zhì)效果減弱，導(dǎo)致粒徑變大，回收率減小。但質(zhì)量濃度過低時(shí)，進(jìn)樣時(shí)間較長(zhǎng)，得到產(chǎn)物的效率較低。因此，確定雌二醇溶液質(zhì)量濃度的優(yōu)選范圍為7-9mg/ml。單因素實(shí)驗(yàn)：雌二醇溶液體積流量的影響結(jié)晶壓力12MPa，結(jié)晶溫度45℃，質(zhì)量濃度8mg/mL條件下，設(shè)置不同的體積流量(0.6、0.8、1.0、1.2、1.4mL/min)進(jìn)行比較研究。隨著體積流量的增大，產(chǎn)品粒徑先減小后增大，回收率先增大后減小。結(jié)果如圖4所示。當(dāng)雌二醇體積流量太低時(shí)，結(jié)晶溶液通過噴嘴進(jìn)入結(jié)晶釜達(dá)不到較好的霧化效果，會(huì)使初始液滴變大，同時(shí)噴嘴在噴射過程中會(huì)有堵塞的現(xiàn)象，且進(jìn)樣時(shí)間較長(zhǎng)，生產(chǎn)工藝的效率低；而當(dāng)體積流量過大，使得SC-CO2與有機(jī)溶液接觸時(shí)間減小，接觸面積減小，傳質(zhì)效果減弱，導(dǎo)致過飽和度降低，最終得到的粒徑較大，回收率較低。因此，確定雌二醇溶液流速的優(yōu)選范圍為0.8-1.2mL/min。實(shí)施例2：正交實(shí)驗(yàn)在各關(guān)鍵參數(shù)的優(yōu)選范圍內(nèi)優(yōu)化最優(yōu)參數(shù)正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)和結(jié)果以粒徑為主要評(píng)價(jià)指標(biāo)，選擇對(duì)雌二醇微粒粒徑影響較明顯的4個(gè)因素，溶液體積流量(A)、結(jié)晶壓力(B)、結(jié)晶溫度(C)和雌二醇質(zhì)量濃度(D)進(jìn)行考察，使用L9(34)正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，其因素水平已通過實(shí)施例1的單因素實(shí)驗(yàn)確定，見表4。其他工藝條件為CO2排氣體積流量3L/min，丙酮和乙醇的體積比1:1。試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果見表5。表4正交實(shí)驗(yàn)因素及水平表表5正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果試驗(yàn)號(hào)ABCD粒徑(μm)10.81040714.6620.81245810.4230.81450912.5741.01045910.2351.0125078.9461.0144087.3671.2105088.5981.21240913.8791.21445713.80K112.55011.16011.96312.467K28.84311.07711.4838.790K312.08711.24310.03312.223R3.7070.1661.9303.677正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析由方差分析和直觀分析可知，各因素對(duì)雌二醇微粒平均粒徑的影響從大到小為A>D>C>B，即體積流量>質(zhì)量濃度>結(jié)晶溫度>結(jié)晶壓力；優(yōu)選工藝組合為A2B3C1D2，即溶液體積流量1.0mL/min，結(jié)晶壓力14MPa，結(jié)晶溫度40℃，雌二醇質(zhì)量濃度8mg/mL。由此可以得出最優(yōu)參數(shù)如下：雌二醇溶液(溶劑為丙酮和乙醇體積比為1:1)的質(zhì)量濃度為8mg/mL；雌二醇溶液的體積流量為1.0mL/min；CO2通入結(jié)晶釜的流速為3L/min；結(jié)晶溫度為40℃，結(jié)晶壓力為14MPa。最優(yōu)參數(shù)條件獲得的雌二醇超細(xì)微粒的溶解度測(cè)定在3個(gè)100mL具塞錐形瓶中，分別加入一定量蒸餾水、2％鹽酸溶液、pH＝7.4的磷酸緩沖溶液，再分別加入過量的雌二醇原料藥、優(yōu)選微粒，置于空氣震蕩搖床中，保持37℃振搖72h，取樣，保溫過濾，測(cè)定溶解的雌二醇量，計(jì)算其在各介質(zhì)中的平衡溶解度。結(jié)果見表6。由表6可知，處理前雌二醇在水中的平衡溶解度極低，僅有1.440μg/mL，而最優(yōu)工藝的超細(xì)微粒平衡溶解度可達(dá)到4.378μg/mL，提高了三倍左右。在0.2％鹽酸溶液以及pH＝7.4的PBS緩沖液中其溶解度也得到了數(shù)倍的提高。表6雌二醇溶解度(μg/mL)最優(yōu)參數(shù)條件獲得的雌二醇超細(xì)微粒的體外溶出度測(cè)定參照《中國(guó)藥典》2015版二部附錄XC第二法，于溫度(37±0.5)、轉(zhuǎn)速100r/min下測(cè)定雌二醇的體外溶出曲線。精密稱取適量樣品，置于轉(zhuǎn)籃中進(jìn)行試驗(yàn)，分別在5、10、20、30、40、50、60、90、120、150、180、210、240min各取樣5.0mL，同時(shí)補(bǔ)加5.0mL同等溫度的溶出介質(zhì)。樣品經(jīng)0.22μm濾膜過濾后，以磷酸緩沖鹽溶液(pH7.4)為空白對(duì)照，于276nm處測(cè)定其吸光度，按標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算累積釋放百分率。測(cè)定結(jié)果如圖5所示。相對(duì)于原料藥，超細(xì)微粒的溶出性能有了明顯提高，具體表現(xiàn)為，經(jīng)過4h的溶出度檢測(cè)，超細(xì)微粒的溶出度可達(dá)到近90％，而原料藥溶出度不足50％。結(jié)果討論該實(shí)施例以丙酮和乙醇為混合溶劑，體積比1:1，采用超臨界CO2抗溶劑法制備雌二醇微粒，在CO2排氣體積流量3L/min的條件下，采用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)優(yōu)化制備黃芩素微粒的工藝，得到的優(yōu)選條件為溶液體積流量1.0mL/min，結(jié)晶壓力14MPa，結(jié)晶溫度40℃，雌二醇質(zhì)量濃度8mg/mL。優(yōu)選工藝得到的雌二醇微粒體積平均粒徑為7.36μm，而原料藥的粒徑為50～60μm，藥物粒徑明顯減??；處理前雌二醇在水中的平衡溶解度極低，僅有1.44μg/mL，而優(yōu)選工藝的超細(xì)微粒平衡溶解度可達(dá)到4.378μg/mL，提高了三倍左右；相對(duì)于原料藥，超細(xì)微粒的溶出性能有了明顯提高，具體表現(xiàn)為，經(jīng)過4h的溶出度檢測(cè)，超細(xì)微粒的溶出度可達(dá)到近90％，而原料藥溶出度不足50％。實(shí)施例3一種超臨界抗溶劑法制備雌二醇超細(xì)微粒的方法，包括如下步驟：步驟S1，將雌二醇溶解于有機(jī)溶劑中，得到雌二醇溶液，質(zhì)量濃度為6mg/mL；步驟S2，將CO2以3L/min的流速通入結(jié)晶釜中，調(diào)節(jié)結(jié)晶釜內(nèi)溫度為55℃，壓力為8MPa；步驟S3，繼續(xù)以3L/min的流速通入CO2，維持結(jié)晶釜內(nèi)的溫度和壓力不變，同時(shí)將步驟S1制備的雌二醇溶液以1.0mL/min的體積流量通入結(jié)晶釜中；步驟S4，雌二醇溶液通入完畢后，持續(xù)通入CO2，維持結(jié)晶釜內(nèi)的溫度和壓力不變，40分鐘后卸壓；當(dāng)結(jié)晶釜內(nèi)壓力降至大氣壓后，打開結(jié)晶釜收集雌二醇超細(xì)微粒；其中，步驟S1和步驟S2不存在先后順序；所述有機(jī)溶劑為丙酮和乙醇的混合溶劑，二者按照體積比1:1混合。上述步驟制備的雌二醇超細(xì)微粒的平均粒徑為3.46μm。該實(shí)施例的制備方法為意外所得：結(jié)晶釜內(nèi)溫度為55℃，根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)可知，該溫度下得到的產(chǎn)物呈潮濕、粘稠狀態(tài)，無法制得干燥的固體微粒，正常情況下，本領(lǐng)域技術(shù)人員不會(huì)將溫度設(shè)為55℃。但是，通過降低結(jié)晶壓力和雌二醇溶液質(zhì)量濃度后，不僅可以制得干燥的雌二醇微粒，而且制得的雌二醇微粒粒徑更小，也不同于單因素實(shí)驗(yàn)的變化趨勢(shì)。實(shí)施例4一種超臨界抗溶劑法制備雌二醇超細(xì)微粒的方法，包括如下步驟：步驟S1，將雌二醇溶解于有機(jī)溶劑中，得到雌二醇溶液，質(zhì)量濃度為6mg/mL；步驟S2，將CO2以3L/min的流速通入結(jié)晶釜中，調(diào)節(jié)結(jié)晶釜內(nèi)溫度為55℃，壓力為8MPa；步驟S3，繼續(xù)以3L/min的流速通入CO2，維持結(jié)晶釜內(nèi)的溫度和壓力不變，同時(shí)將步驟S1制備的雌二醇溶液以1.0mL/min的體積流量通入結(jié)晶釜中；步驟S4，雌二醇溶液通入完畢后，持續(xù)通入CO2，維持結(jié)晶釜內(nèi)的溫度和壓力不變，40分鐘后卸壓；當(dāng)結(jié)晶釜內(nèi)壓力降至大氣壓后，打開結(jié)晶釜收集雌二醇超細(xì)微粒；其中，步驟S1和步驟S2不存在先后順序；所述有機(jī)溶劑為乙醇和丙酮的混合溶劑，二者按照體積比1:2混合。上述步驟制備的雌二醇超細(xì)微粒的平均粒徑為1.53μm。該實(shí)施例為實(shí)施例3的進(jìn)一步優(yōu)化，將實(shí)施例3的溶劑換成了乙醇和丙酮體積比1:2的混合溶劑。根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)可知，丙酮比例增大后，雌二醇微粒粒徑會(huì)增大，但是在該實(shí)施例中，結(jié)果恰恰相反，制得的雌二醇微粒粒徑更小。上述實(shí)施例的作用僅在于說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和保護(hù)范圍。當(dāng)前第1頁1 2 3