本發(fā)明涉及使用了棒桿菌型細菌的l-谷氨酸等谷氨酸類l-氨基酸(l-aminoacidofglutamatefamily)的制造方法。l-氨基酸作為調料原料等可用于工業(yè)上。
背景技術：
：l-氨基酸通過例如發(fā)酵法進行工業(yè)生產，所述發(fā)酵法使用了具有l(wèi)-氨基酸生產能力的棒桿菌型細菌等微生物(非專利文獻1)。作為這樣的微生物，例如可以使用從自然界分離的菌株及其突變株。而且，通過重組dna技術可以使微生物的l-氨基酸生產能力提高。例如，作為使棒桿菌型細菌的l-谷氨酸生產能力提高的方法，已知增加磷酸轉酮酶活性(專利文獻1)、利用突變型yggb基因(專利文獻2)的技術。大腸埃希氏菌(escherichiacoli)的kgtp基因是編碼α-酮戊二酸(α-kg)攝入載體的基因(非專利文獻2)。α-kg作為l-谷氨酸生物合成中l(wèi)-谷氨酸的中間體而眾所周知。然而，α-kg攝入載體與谷氨酸類l-氨基酸生產的關系尚不清楚?，F(xiàn)有技術文獻專利文獻專利文獻1：wo2006/016705專利文獻2：wo2006/070944非專利文獻非專利文獻1：明石邦彥等著氨基酸發(fā)酵(アミノ酸発酵)、學會出版中心、195～215頁、1986年非專利文獻2：seolw,shatkinaj.escherichiacolikgtpencodesanalpha-ketoglutaratetransporter.procnatlacadsciusa.1991may1；88(9)：3802-6.技術實現(xiàn)要素：發(fā)明要解決的課題本發(fā)明的課題在于開發(fā)使棒桿菌型細菌的谷氨酸類l-氨基酸生產能力提高的新技術，提供一種高效的谷氨酸類l-氨基酸的制造方法。解決課題的方法本發(fā)明人為了解決上述課題而進行了深入研究，結果發(fā)現(xiàn)，通過對棒桿菌型細菌進行改變，使α-酮戊二酸(α-kg)攝入載體的活性增加，能夠使棒桿菌型細菌的谷氨酸類l-氨基酸生產能力提高，從而完成了本發(fā)明。即，本發(fā)明如下所示。[1]一種l-氨基酸的制造方法，該方法包括：用培養(yǎng)基對具有l(wèi)-氨基酸生產能力的棒桿菌型細菌進行培養(yǎng)，以及從該培養(yǎng)基采集l-氨基酸，其中，對所述細菌進行了改變，使α-酮戊二酸(α-kg)攝入載體的活性相比于非改變株增加，所述l-氨基酸為谷氨酸類l-氨基酸。[2]根據(jù)上述方法，其中，所述α-kg攝入載體是由kgtp基因編碼的蛋白質。[3]根據(jù)上述方法，其中，所述α-kg攝入載體是下述(a)、(b)或(c)中記載的蛋白質：(a)包含序列號8所示的氨基酸序列的蛋白質；(b)包含在序列號8所示的氨基酸序列中含有取代、缺失、插入或添加1～10個氨基酸殘基而成的氨基酸序列的蛋白質，且所述蛋白質具有α-kg攝入活性；(c)包含相對于序列號8所示的氨基酸序列具有90％以上的同源性的氨基酸序列的蛋白質，且所述蛋白質具有α-kg攝入活性。[4]根據(jù)上述方法，其中，通過使編碼α-kg攝入載體的基因的表達增高來增加α-kg攝入載體的活性。[5]根據(jù)上述方法，其中，所述基因的表達通過提高該基因的拷貝數(shù)和/或改變該基因的表達調節(jié)序列而增高。[6]根據(jù)上述方法，其中，進一步對所述細菌進行了改變，使磷酸轉酮酶的活性相比于非改變株增加。[7]根據(jù)上述方法，其中，所述磷酸轉酮酶為d-木酮糖-5-磷酸磷酸轉酮酶和/或果糖6-磷酸磷酸轉酮酶。[8]根據(jù)上述方法，其中，通過使編碼磷酸轉酮酶的基因的表達增高來增加磷酸轉酮酶的活性。[9]根據(jù)上述方法，其中，進一步對所述細菌進行了改變，使得α-酮戊二酸脫氫酶和/或琥珀酸脫氫酶的活性相比于非改變株降低。[10]根據(jù)上述方法，其中，所述細菌為棒桿菌屬細菌。[11]根據(jù)上述方法，其中，所述細菌為谷氨酸棒桿菌。[12]根據(jù)上述方法，其中，所述谷氨酸類l-氨基酸為選自l-谷氨酸、l-谷氨酰胺、l-脯氨酸、l-精氨酸、l-瓜氨酸和l-鳥氨酸中的1種或1種以上的l-氨基酸。[13]根據(jù)上述方法，其中，所述谷氨酸類l-氨基酸為l-谷氨酸。[14]根據(jù)上述方法，其中，所述l-谷氨酸為l-谷氨酸銨或l-谷氨酸鈉。[15]根據(jù)上述方法，其中，進一步對所述細菌進行了改變，使其保持突變型yggb基因。[16]根據(jù)上述方法，其中，所述突變型yggb基因是具有使棒桿菌型細菌的l-谷氨酸生產能力提高的突變的yggb基因。[17]根據(jù)上述方法，其中，所述突變型yggb基因具有下述(1)、(2)或(3)中記載的突變：(1)編碼野生型yggb蛋白質的419～533位氨基酸殘基的區(qū)域中的突變；(2)編碼野生型yggb蛋白質的跨膜結構域的區(qū)域中的突變；(3)上述(1)和(2)的組合。[18]根據(jù)上述方法，其中，所述野生型yggb蛋白質是下述(a)、(b)或(c)中記載的蛋白質：(a)包含序列號12所示的氨基酸序列的蛋白質；(b)包含在序列號12所示的氨基酸序列中含有取代、缺失、插入和/或添加1～10個氨基酸殘基而成的氨基酸序列的蛋白質，且所述蛋白質具有在棒桿菌型細菌中使其表達增高時使棒桿菌型細菌的l-谷氨酸生產能力提高的性質；(c)包含相對于序列號12所示的氨基酸序列具有90％以上的同源性的氨基酸序列的蛋白質，且所述蛋白質具有在棒桿菌型細菌中使其表達增高時使棒桿菌型細菌的l-谷氨酸生產能力提高的性質。根據(jù)本發(fā)明，能夠使棒桿菌型細菌的谷氨酸類l-氨基酸生產能力提高，可以高效地制造谷氨酸類l-氨基酸。具體實施方式以下，詳細地對本發(fā)明進行說明。本發(fā)明的方法是l-氨基酸的制造方法，該方法包括：用培養(yǎng)基對具有l(wèi)-氨基酸生產能力的棒桿菌型細菌進行培養(yǎng)，以及從該培養(yǎng)基采集l-氨基酸，其中，對所述細菌進行了改變，使α-酮戊二酸(α-kg)攝入載體的活性增加，所述l-氨基酸為谷氨酸類l-氨基酸。該方法所用的棒桿菌型細菌也稱為“本發(fā)明的細菌”。＜1＞本發(fā)明的細菌本發(fā)明的細菌是具有l(wèi)-氨基酸生產能力的棒桿菌型細菌，其經(jīng)過了改變，使α-kg攝入載體的活性增加。＜1-1＞具有l(wèi)-氨基酸生產能力的棒桿菌型細菌在本發(fā)明中，“具有l(wèi)-氨基酸生產能力的細菌”是指在用培養(yǎng)基進行培養(yǎng)時，具有生成作為目標的l-氨基酸、且在培養(yǎng)基中或菌體內積蓄至可回收的程度的能力的細菌。具有l(wèi)-氨基酸生產能力的細菌可以是能夠在培養(yǎng)基中積蓄比非改變株更多量的作為目標的l-氨基酸的細菌?！胺歉淖冎辍笔侵肝匆驭?kg攝入載體的活性增加的方式進行改變的對照株。即，作為非改變株，可以列舉：野生株、親本株，例如谷氨酸棒狀桿菌atcc13869株、atcc13032株。另外，具有l(wèi)-氨基酸生產能力的細菌優(yōu)選在培養(yǎng)基中能夠積蓄0.5g/l以上，更優(yōu)選能夠積蓄1.0g/l以上的量的作為目標的l-氨基酸的細菌。本發(fā)明中制造的l-氨基酸為谷氨酸類l-氨基酸?！肮劝彼犷恖-氨基酸”是指l-谷氨酸及以l-谷氨酸作為中間體生物合成的l-氨基酸的總稱。作為以l-谷氨酸作為中間體生物合成的l-氨基酸，可以列舉：l-谷氨酰胺、l-脯氨酸、l-精氨酸、l-瓜氨酸、l-鳥氨酸。本發(fā)明的細菌可以僅具有1種l-氨基酸的生產能力，也可以具有2種或2種以上l-氨基酸的生產能力。在本發(fā)明中，“氨基酸”這樣的用語只要沒有特別說明，就表示l-氨基酸的意思。另外，在本發(fā)明中，“l(fā)-氨基酸”這樣的用語只要沒有特別說明，就表示游離的l-氨基酸、其鹽或它們的混合物的意思。在后面對鹽進行說明。作為棒桿菌型細菌，可以列舉屬于棒桿菌(corynebacterium)屬、短桿菌(brevibacterium)屬及微桿菌(microbacterium)屬等屬的細菌。作為棒桿菌型細菌，具體而言可以列舉下述種類。嗜乙酰乙酸棒桿菌(corynebacteriumacetoacidophilum)醋谷棒桿菌(corynebacteriumacetoglutamicum)解烷烴棒桿菌(corynebacteriumalkanolyticum)石南棒桿菌(corynebacteriumcallunae)鈍齒棒桿菌(corynebacteriumcrenatum)谷氨酸棒桿菌(corynebacteriumglutamicum)百合花棒桿菌(corynebacteriumlilium)棲糖蜜棒桿菌(corynebacteriummelassecola)熱產氨棒桿菌(有效棒桿菌)(corynebacteriumthermoaminogenes(corynebacteriumefficiens))力士棒桿菌(corynebacteriumherculis)叉開短桿菌(谷氨酸棒桿菌)(brevibacteriumdivaricatum(corynebacteriumglutamicum))黃色短桿菌(谷氨酸棒桿菌)(brevibacteriumflavum(corynebacteriumglutamicum))brevibacteriumimmariophilum乳糖發(fā)酵短桿菌(谷氨酸棒桿菌)(brevibacteriumlactofermentum(corynebacteriumglutamicum))玫瑰色短桿菌(brevibacteriumroseum)解糖短桿菌(brevibacteriumsaccharolyticum)硫殖短桿菌(brevibacteriumthiogenitalis)產氨棒桿菌(corynebacteriumstationis)(corynebacteriumammoniagenes(corynebacteriumstationis))白短桿菌(brevibacteriumalbum)多角短桿菌(brevibacteriumcerinum)嗜氨微桿菌(microbacteriumammoniaphilum)作為棒桿菌型細菌，具體而言可以列舉下述菌株。嗜乙酰乙酸棒桿菌atcc13870醋谷棒桿菌atcc15806解烷烴棒桿菌atcc21511石南棒桿菌atcc15991鈍齒棒桿菌as1.542谷氨酸棒桿菌atcc13020,谷氨酸棒桿菌atcc13032,谷氨酸棒桿菌atcc13060，谷氨酸棒桿菌atcc13869，谷氨酸棒桿菌fermbp-734百合花棒桿菌atcc15990棲糖蜜棒桿菌atcc17965有效棒桿菌(熱產氨棒桿菌)aj12340(fermbp-1539)力士棒桿菌atcc13868谷氨酸棒桿菌(叉開短桿菌)atcc14020谷氨酸棒桿菌(黃色短桿菌)atcc13826,谷氨酸棒桿菌(黃色短桿菌)atcc14067,谷氨酸棒桿菌(黃色短桿菌)aj12418(fermbp-2205)brevibacteriumimmariophilumatcc14068谷氨酸棒桿菌(乳糖發(fā)酵短桿菌)atcc13869玫瑰色短桿菌atcc13825解糖短桿菌atcc14066硫殖短桿菌atcc19240產氨棒桿菌(corynebacteriumstationis)atcc6871,產氨棒桿菌(corynebacteriumstationis)atcc6872白短桿菌atcc15111多角短桿菌atcc15112嗜氨微桿菌atcc15354需要說明的是，棒桿菌屬細菌還包括以往分類為短桿菌屬，但現(xiàn)在合并至棒桿菌屬的細菌(int.j.syst.bacteriol.,41,255(1991))。另外，corynebacteriumstationis中還包括以往分類為產氨棒桿菌，但通過16srrna的核苷酸序列分析等再分類為corynebacteriumstationis的細菌(int.j.syst.evol.microbiol.,60,874-879(2010))。這些菌株可以通過例如美國模式培養(yǎng)物保藏所(americantypeculturecollection)(地址12301parklawndrive,rockville,maryland20852p.o.box1549,manassas,va20108,unitedstatesofamerica)購買。即，賦予了與各菌株對應的登記號，可以利用該登記號來購買(參照http：//www.atcc.org/)。與各菌株對應的登記號記載于美國模式培養(yǎng)物保藏所的產品目錄。另外，這些菌株可以通過例如保藏各菌株的保藏單位而獲得。本發(fā)明的細菌可以是原本具有l(wèi)-氨基酸生產能力的細菌，也可以是經(jīng)過改變而具有l(wèi)-氨基酸生產能力的細菌。具有l(wèi)-氨基酸生產能力的細菌可以通過例如對上述那樣的細菌賦予l-氨基酸生產能力而獲得，或者通過增強上述那樣的細菌的l-氨基酸生產能力而獲得。賦予或增強l-氨基酸生產能力以往可以通過棒桿菌型細菌或埃希氏菌屬細菌等氨基酸生產菌的育種所采用的方法來進行(參照氨基酸發(fā)酵、株式會社學會出版中心、1986年5月30日初版發(fā)行、第77～100頁)。作為這樣的方法，可以列舉例如：營養(yǎng)缺陷性突變株的獲得、l-氨基酸類似物耐受性株的獲得、代謝控制突變株的獲得、增加了l-氨基酸的生物合成酶的活性的重組株的創(chuàng)制。在l-氨基酸生產菌的育種中，賦予的營養(yǎng)缺陷性、類似物耐受性、代謝控制突變等性質可以是單獨的，也可以是2種或3種以上。另外，在l-氨基酸生產菌的育種中，活性增加的l-氨基酸生物合成酶可以是單獨的，也可以是2種或3種以上。并且，還可以將營養(yǎng)缺陷性、類似物耐受性、代謝控制突變等性質的賦予與生物合成酶活性的增加進行組合。具有l(wèi)-氨基酸生產能力的營養(yǎng)缺陷性突變株、類似物耐受性株或代謝控制突變株可以通過以下方式獲得：將親本株或野生株供于通常的突變處理，從得到的突變株中選擇顯示出營養(yǎng)缺陷性、類似物耐受性或代謝控制突變、且具有l(wèi)-氨基酸生產能力的菌株。作為通常的突變處理，可以列舉：x射線、紫外線的照射、利用n-甲基-n’-硝基-n-亞硝基胍(mnng)、甲磺酸乙酯(ems)、甲磺酸甲酯(mms)等突變劑的處理。另外，賦予或增強l-氨基酸生產能力也可以通過增強與目標l-氨基酸的生物合成相關的酶的活性來進行。酶活性的增強可以通過對細菌進行改變例如使增高編碼該酶的基因的表達來進行。增高基因表達的方法記載于wo00/18935號小冊子、歐洲專利申請公開1010755號說明書等。增加酶活性的詳細方法在后面敘述。另外，賦予或增強l-氨基酸生產能力還可以通過使下述酶的活性降低來進行，所述酶是催化從目標l-氨基酸的生物合成路徑分支出生成目標l-氨基酸以外的化合物的反應的酶。需要說明的是，這里，所謂的“催化從目標l-氨基酸的生物合成路徑分支出生成目標l-氨基酸以外的化合物的反應的酶”還含有與目標氨基酸的分解相關的酶。在后面對使酶活性降低的方法進行敘述。以下，具體例示出l-氨基酸生產菌及賦予或增強l-氨基酸生產能力的方法。需要說明的是，以下例示出的l-氨基酸生產菌所具有的性質和用于賦予或增強l-氨基酸生產能力的改變均可以單獨使用，也可以適當組合使用。＜l-谷氨酸生產菌＞作為用于賦予或增強l-谷氨酸生產能力的方法，可以舉出例如下述方法：對細菌進行改變，使得選自l-谷氨酸生物合成酶的1種或1種以上酶的活性增加。作為這樣的酶，沒有特別限制，可以列舉：谷氨酸脫氫酶(gdha)、谷氨酰胺合成酶(glna)、谷氨酸合成酶(gltbd)、異檸檬酸脫氫酶(icda)、烏頭酸水合酶(acna,acnb)、檸檬合成酶(glta)、甲基檸檬酸合成酶(prpc)、丙酮酸羧化酶(pyc)、丙酮酸脫氫酶(aceef,lpda)、丙酮酸激酶(pyka,pykf)、磷酸烯醇丙酮酸合成酶(ppsa)、烯醇酶(eno)、磷酸甘油變位酶(pgma,pgmi)、磷酸甘油酸激酶(pgk)、甘油醛-3-磷酸脫氫酶(gapa)、磷酸丙糖異構酶(tpia)、果糖二磷酸醛縮酶(fbp)、磷酸葡萄糖異構酶(pgi)、6-磷酸葡糖酸脫水酶(edd)、2-酮-3-脫氧-6-磷酸葡糖酸醛縮酶(eda)、轉氫酶。需要說明的是，括號內是編碼該酶的基因的例子(以下的記載中也是同樣的)。在這些酶當中，優(yōu)選對選自例如谷氨酸脫氫酶、檸檬酸合成酶、磷酸烯醇丙酮酸羧化酶及甲基檸檬酸合成酶中的1種或1種以上的酶的活性進行增加。作為以增高谷氨酸合成酶基因(gltbd)的表達的方式進行了改變的棒桿菌型細菌，可以舉出wo99/07853中公開的細菌。另外，作為用于賦予或增強l-谷氨酸生產能力的方法，可以舉出以下方法：例如，對細菌行進改變，使得選自下述酶中的1種或1種以上的酶的活性降低，所述酶是催化從l-氨基酸的生物合成路徑分支出生成l-氨基酸以外的化合物的反應的酶。作為這樣的酶，沒有特別限制，可以列舉：異檸檬酸裂合酶(acea)、α-酮戊二酸脫氫酶(suca,odha)、乙酰乳酸合成酶(ilvi)、甲酸乙酰轉移酶(pfl)、乳酸脫氫酶(ldh)、醇脫氫酶(adh)、谷氨酸脫羧酶(gadab)、琥珀酸脫氫酶(sdhabcd)。在這些酶當中，例如，優(yōu)選使α-酮戊二酸脫氫酶活性降低或缺失。α-酮戊二酸脫氫酶活性降低或缺失的棒桿菌型細菌及其獲得方法記載于wo2008/075483。作為α-酮戊二酸脫氫酶活性降低或缺失的棒桿菌型細菌，具體而言，可以列舉例如下述菌株。谷氨酸棒桿菌(乳糖發(fā)酵短桿菌)l30-2株(日本特開2006-340603號說明書)谷氨酸棒桿菌(乳糖發(fā)酵短桿菌)δs株(國際公開95/34672號小冊子)谷氨酸棒桿菌(乳糖發(fā)酵短桿菌)aj12821(fermbp-4172；參照法國專利公報9401748號說明書)谷氨酸棒桿菌(黃色短桿菌)aj12822(fermbp-4173；法國專利公報9401748號說明書)谷氨酸棒桿菌aj12823(fermbp-4174；法國專利公報9401748號說明書)谷氨酸棒桿菌l30-2株(日本特開2006-340603號)另外，作為l-谷氨酸生產菌或用于誘導l-谷氨酸生產菌的親本株，可以列舉α-酮戊二酸脫氫酶(suca)活性和琥珀酸脫氫酶(sdh)活性兩者降低或缺失的菌株(日本特開2010-041920號)。作為這樣的菌株，具體而言可以列舉例如谷氨酸棒桿菌atcc14067的odhasdha雙重缺失株(谷氨酸棒桿菌8l3gδsdh株)(日本特開2010-041920號)。另外，作為用于賦予或增強l-谷氨酸生產能力的方法，可以列舉例如增強作為l-谷氨酸分泌基因的yhfk基因(wo2005/085419)及ybjl基因(wo2008/133161)的表達。另外，對于棒桿菌型細菌，作為賦予或增強l-谷氨酸生產能力的方法，可以列舉：賦予對有機酸類似物、呼吸抑制劑等的耐受性的方法、賦予對細胞壁合成抑制劑的敏感性的方法。作為這樣的方法，具體而言可以列舉例如：賦予單氟乙酸耐受性的方法(日本特開昭50-113209)、賦予腺嘌呤耐受性或胸腺嘧啶耐受性的方法(日本特開昭57-065198)、使脲酶弱化的方法(日本特開昭52-038088)、賦予丙二酸耐受性的方法(日本特開昭52-038088)、賦予對苯并呲喃酮類或萘醌類的耐受性的方法(日本特開昭56-1889)、賦予hoqno耐受性的方法(日本特開昭56-140895)、賦予α-酮基丙二酸耐受性的方法(日本特開昭57-2689)、賦予胍耐受性的方法(日本特開昭56-35981)、賦予對青霉素的敏感性的方法(日本特開平4-88994)等。作為這樣的耐受性菌或敏感性菌的具體例子，可以列舉下述這樣的菌株。谷氨酸棒桿菌(黃色短桿菌)aj3949(fermbp-2632；參照日本特開昭50-113209)谷氨酸棒桿菌aj11628(fermp-5736；參照日本特開昭57-065198)谷氨酸棒桿菌(黃色短桿菌)aj11355(fermp-5007；參照日本特開昭56-1889號公報)谷氨酸棒桿菌aj11368(fermp-5020；參照日本特開昭56-1889號公報)谷氨酸棒桿菌(黃色短桿菌)aj11217(fermp-4318；參照日本特開昭57-2689號公報)谷氨酸棒桿菌aj11218(fermp-4319；參照日本特開昭57-2689號公報)谷氨酸棒桿菌(黃色短桿菌)aj11564(fermp-5472；參照日本特開昭56-140895公報)谷氨酸棒桿菌(黃色短桿菌)aj11439(fermp-5136；參照日本特開昭56-35981號公報)谷氨酸棒桿菌h7684(fermbp-3004；參照日本特開平04-88994號公報)谷氨酸棒桿菌(乳糖發(fā)酵短桿菌)aj11426(fermp-5123；參照日本特開平56-048890號公報)谷氨酸棒桿菌aj11440(fermp-5137；參照日本特開平56-048890號公報)谷氨酸棒桿菌(乳糖發(fā)酵短桿菌)aj11796(fermp-6402；參照日本特開平58-158192號公報)另外，對于棒桿菌型細菌，作為賦予或增強l-谷氨酸生產能力的方法，可以列舉：增高yggb基因的表達的方法、將在編碼區(qū)域內導入了突變的突變型yggb基因導入的方法(wo2006/070944)。即，本發(fā)明的細菌可以進行了改變而使yggb基因的表達增高，也可以進行了改變而保持(具有)突變型yggb基因。yggb基因是編碼力敏感通道(mechanosensitivechannel)的基因。作為yggb基因，可以舉出棒桿菌型細菌的yggb基因。作為棒桿菌型細菌的yggb基因，具體而言，可以列舉例如谷氨酸棒桿菌atcc13869、谷氨酸棒桿菌atcc13032、谷氨酸棒桿菌atcc14967、棲糖蜜棒桿菌atcc17965的yggb基因(wo2006/070944)。谷氨酸棒桿菌atcc13032的yggb基因被稱為ncgl1221，相當于ncbi數(shù)據(jù)庫中以genbankaccessionno.nc_003450登記的基因組序列中1,336,091～1,337,692序列的互補序列。由谷氨酸棒桿菌atcc13032的yggb基因編碼的yggb蛋白質登記為genbankaccessionno.np_600492。另外，谷氨酸棒桿菌2256(atcc13869)的yggb基因的核苷酸序列和該基因所編碼的yggb蛋白質的氨基酸序列分別表示于序列號11和12。在本發(fā)明中，將具有后面敘述的“特定的突變”的yggb基因稱為突變型yggb基因，將由該突變型yggb基因編碼的蛋白質稱為突變型yggb蛋白質。另外，在本發(fā)明中，將沒有后面敘述的“特定的突變”的yggb基因稱為野生型yggb基因，將由該野生型yggb基因編碼的蛋白質稱為野生型yggb蛋白質。需要說明的是，對于yggb蛋白質而言，也將由yggb基因中的“特定的突變”所引起的氨基酸序列變化稱為“特定的突變”。這里所謂的“野生型”是為了區(qū)別于“突變型”的方便的記載，只要不具有“特定的突變”即可，并不限定于由自然界獲得。作為野生型yggb蛋白質，可以舉出上述例示出的yggb蛋白質，例如，具有序列號12所示的氨基酸序列的蛋白質。另外，作為野生型yggb蛋白質，可以舉出上述例示出的yggb蛋白質的保守變異體(保持了原本功能的變異體)，其不具有“特定的突變”。yggb蛋白質的“原本功能”例如可以是作為力敏感通道(mechanosensitivechannel)的功能，也可以是棒桿菌型細菌中使其表達增高時使棒桿菌型細菌的l-谷氨酸生產能力增高的性質。對于“特定的突變”而言，只要是使上述這樣的野生型yggb蛋白質的氨基酸序列而使棒桿菌型細菌的l-谷氨酸生產能力提高的突變即可，沒有特別限制。作為“特定的突變”，可以列舉：c末端側突變、跨膜結構域的突變(wo2006/070944)。另外，“特定的突變”也可以是這些突變的組合。(1)c末端側突變c末端側突變是野生型yggb基因中編碼野生型yggb蛋白質419～533位氨基酸殘基的區(qū)域中的突變。c末端側突變可以在該區(qū)域中的1個或1個以上位點導入。由c末端側突變引起的氨基酸序列變化的種類沒有特別限制。c末端側突變可以是引起如下情況的突變，例如，氨基酸殘基的取代(錯義突變)、氨基酸殘基的插入、氨基酸殘基的缺失、終止密碼子的出現(xiàn)(無義突變)、移碼突變、或者這些的組合。作為c末端側突變，例如，優(yōu)選插入序列(以下也稱為“is”)、轉座子等核苷酸序列的插入。(1-1)核苷酸序列的插入作為c末端側突變，可以舉出例如，在編碼野生型yggb蛋白質419位纈氨酸殘基的位點插入核苷酸序列的突變(2a-1型突變)。2a-1型突變例如可以是野生型yggb蛋白質419～533位氨基酸殘基的一部分或全部發(fā)生缺失或取代引起的。作為具有2a-1型突變的突變型yggb基因，具體而言可以舉出例如，在序列號11的1255位“g”的下一位插入is，且編碼比原來的野生型yggb蛋白質(序列號12)更短的全長423個氨基殘基的突變型yggb蛋白質的yggb基因。將該突變型yggb基因(v419::is)的核苷酸序列和該基因所編碼的突變型yggb蛋白質(v419::is)的氨基酸序列分別表示于序列號13和14。在序列號13中，1～1269位為突變型yggb蛋白質(v419::is)的cds。(1-2)脯氨酸殘基的取代作為c末端側突變，可以舉出例如，將存在于野生型yggb蛋白質419～533位的脯氨酸殘基取代為其它氨基酸的突變。作為這樣的脯氨酸殘基，可以例舉：野生型yggb蛋白質的424位、437位、453位、457位、462位、469位、484位、489位、497位、515位、529位及533位的脯氨酸殘基。其中，優(yōu)選將424位和/或437位的脯氨酸殘基取代為其它氨基酸。“其它氨基酸”只要是脯氨酸以外的天然氨基酸即可，沒有特別限制。作為“其它氨基酸”，可以列舉：lys、glu、thr、val、leu、ile、ser、asp、asn、gln、arg、cys、met、phe、trp、tyr、gly、ala、his。例如，424位的脯氨酸殘基可以優(yōu)選取代為疏水性氨基酸(ala、gly、val、leu或ile)，可以更優(yōu)選取代為支鏈氨基酸(leu、val或ile)。另外，例如，437位的脯氨酸殘基可以優(yōu)選取代為在支鏈具有羥基的氨基酸(thr、ser或tyr)，更優(yōu)選取代為ser。(2)跨膜結構域的突變推測yggb蛋白質具有5個跨膜結構域?？缒そY構域分別相當于野生型yggb蛋白質的1～23位(第1跨膜結構域)、25～47位(第2跨膜結構域)、62～84位(第3跨膜結構域)、86～108位(第4跨膜結構域)、110～132位(第5跨膜結構域)的氨基酸殘基?？缒そY構域的突變是野生型yggb基因中編碼這些跨膜結構域的區(qū)域的突變?？缒そY構域的突變可以在該區(qū)域中的1個或1個以上位點導入。跨膜結構域的突變優(yōu)選為引起1個或多個氨基酸的取代、缺失、添加、插入或倒位的突變，且不包括移碼突變和無義突變?！?個或多個”是指優(yōu)選為1～20個，更優(yōu)選為1～10個，進一步優(yōu)選為1～5個，特別優(yōu)選為1～3個的意思。作為跨膜結構域的突變，可以列舉：在野生型yggb蛋白質的14位亮氨酸殘基與15位色氨酸殘基之間插入1或多個氨基酸殘基(例如cys-ser-leu)的突變、將100位的丙氨酸殘基取代為其它氨基酸殘基(例如，在支鏈具有羥基的氨基酸(thr、ser或tyr)，優(yōu)選為thr)的突變、將111位的丙氨酸殘基取代為其它氨基酸殘基(例如，在支鏈具有羥基的氨基酸(thr、ser或tyr)，優(yōu)選為thr)的突變等。在本發(fā)明中，“野生型yggb蛋白質的x位的氨基酸殘基”只要沒有特別說明，就是指相當于序列號12中的x位氨基酸殘基的氨基酸殘基。氨基酸序列中的“x位”是指從該氨基酸序列的n末端起計數(shù)，第x號位置的意思，n末端的氨基酸殘基為1位的氨基酸殘基。需要說明的是，氨基酸殘基的位置表示相對位置，根據(jù)氨基酸的缺失、插入、添加等，其絕對位置有時發(fā)生前后變化。例如，“野生型yggb蛋白質的419位的氨基酸殘基”是指相當于序列號12中的419位氨基酸殘基的氨基酸殘基的意思，在比419位更靠近n末端側的1個氨基酸殘基缺失的情況下，從n末端起第418號氨基酸殘基為“野生型yggb蛋白質的419位的氨基酸殘基”。另外，在比419位更靠近n末端側插入了1個氨基酸殘基的情況下，從n末端起第420號氨基酸殘基為“野生型yggb蛋白質的419位的氨基酸殘基”。具體而言，例如，在谷氨酸棒桿菌atcc14967株的yggb蛋白質中，419～529位的氨基酸殘基相當于野生型yggb蛋白質的419～533位的氨基酸殘基。在任意的yggb蛋白質的氨基酸序列中，哪一個氨基酸殘基是“相當于序列號12中的x位氨基酸殘基的氨基酸殘基”可以通過對該yggb蛋白質的氨基酸序列與序列號12的氨基酸序列進行比對來確定。比對可以利用例如公知的基因分析軟件來進行。作為具體的軟件，可以列舉：hitachisolutions公司制dnasis、genetyx公司制genetyx等(elizabethc.tyleretal.,computersandbiomedicalresearch,24(1),72-96,1991；bartongjetal.,journalofmolecularbiology,198(2),327-37.1987)。突變型yggb基因可以通過對野生型yggb基因進行修飾使其具有上述“特定的突變”而獲得。dna的改變可以通過公知的方法來進行。具體而言，例如，作為在dna的目標位點導入目標突變的位點特異性突變法，可以列舉：使用pcr的方法(higuchi,r.,61,inpcrtechnology,erlich,h.a.eds.,stocktonpress(1989)；carter,p.,meth.inenzymol.,154,382(1987))、使用噬菌體的方法(kramer,w.andfrits,h.j.,meth.inenzymol.,154,350(1987)；kunkel,t.a.etal.,meth.inenzymol.,154,367(1987))。另外，突變型yggb基因也可以通過化學合成而獲得。對細菌進行改變使其具有突變型yggb基因可以通過將突變型yggb基因導入細菌來實現(xiàn)。另外，對細菌進行改變使其具有突變型yggb基因也可以通過利用自然突變、突變原處理向細菌所具有的yggb基因中導入突變來實現(xiàn)。＜l-谷氨酰胺生產菌＞作為用于賦予或增強l-谷氨酰胺生產能力的方法，可以舉出例如，對細菌進行改變以使選自l-谷氨酰胺生物合成酶中的1種或1種以上酶的活性增高的方法。作為這樣的酶，沒有特別限制，可以列舉：谷氨酸脫氫酶(gdha)、谷氨酰胺合成酶(glna)。需要說明的是，谷氨酰胺合成酶的活性可以通過谷氨酰胺腺苷酰轉移酶基因(glne)的破壞、pii控制蛋白質基因(glnb)的破壞而增高(ep1229121)。另外，作為用于賦予或增強l-谷氨酰胺生產能力的方法，可以列舉例如，對細菌進行改變以使選自下述酶中的1種或1種以上的酶活性降低的方法，所述酶是催化從l-谷氨酰胺的生物合成路徑分支出生成l-谷氨酰胺以外的化合物的反應的酶。作為這樣的酶，沒有特別限制，可以舉出谷氨酰胺酶。作為l-谷氨酰胺生產菌或用于誘導l-谷氨酰胺生產菌的親本株，具體而言，可以列舉例如：增強了谷氨酸脫氫酶(gdha)和/或谷氨酰胺合成酶(glna)的活性的棒桿菌型細菌(ep1229121,ep1424398)、谷氨酰胺酶活性降低了的棒桿菌型細菌(日本特開2004-187684)。另外，對于棒桿菌型細菌，作為賦予或增強l-谷氨酰胺生產能力的方法，可以列舉：賦予6-重氮-5-氧代-l-正亮氨酸耐受性的方法(日本特開平3-232497)、賦予嘌呤類似物耐受性和蛋氨酸亞砜耐受性的方法(日本特開昭61-202694)、賦予α-酮基馬來酸耐受性的方法(日本特開昭56-151495)。作為具有l(wèi)-谷氨酰胺生產能力的棒桿菌型細菌，具體而言，可以列舉例如以下菌株。谷氨酸棒桿菌(黃色短桿菌)aj11573(fermp-5492；日本特開昭56-161495)谷氨酸棒桿菌(黃色短桿菌)aj11576(fermbp-10381；日本特開昭56-161495)谷氨酸棒桿菌(黃色短桿菌)aj12212(fermp-8123；日本特開昭61-202694)＜l-脯氨酸生產菌＞作為用于賦予或增強l-脯氨酸生產能力的方法，可以舉出例如，對細菌進行改變以使選自l-脯氨酸生物合成酶中的1種或1種以上酶的活性增加的方法。作為這樣的酶，可以列舉：谷氨酸-5-激酶(prob)、γ-谷氨酰磷酸還原酶、5-吡咯啉羧酸還原酶(puta)。酶活性的增加可以使用例如prob基因(德國專利第3127361號)，所述prob基因編碼對由l-脯氨酸引起的反饋抑制脫敏的谷氨酸-5-激酶。另外，作為用于賦予或增強l-脯氨酸生產能力的方法，可以舉出例如，對細菌進行改變以使與l-脯氨酸分解相關的酶的活性降低的方法。作為這樣的酶，可以列舉：脯氨酸脫氫酶、鳥氨酸轉氨酶。＜l-精氨酸生產菌＞作為用于賦予或增強l-精氨酸生產能力的方法，可以舉出例如，對細菌進行改變以使選自l-精氨酸生物合成酶中的1種或1種以上酶的活性的增加的方法。作為這樣的酶，沒有特別限制，可以列舉：n-乙酰谷氨酸合成酶(arga)、n-乙酰谷氨酰磷酸還原酶(argc)、鳥氨酸乙酰轉移酶(argj)、n-乙酰谷氨酸激酶(argb)、乙酰鳥氨酸轉氨酶(argd)、乙酰鳥氨酸脫乙酰基酶(arge)、鳥氨酸氨甲酰基轉移酶(argf)、精氨基琥珀酸合成酶(argg)、精氨基琥珀酸裂合酶(argh)、氨甲酰磷酸合成酶(carab)。作為n-乙酰谷氨酸合成酶(arga)基因，優(yōu)選使用例如下述編碼突變型n-乙酰谷氨酸合成酶的基因，所述突變型n-乙酰谷氨酸合成酶中相當于野生型的15位～19位的氨基酸殘基被取代，且對由l-精氨酸引起的反饋抑制脫敏(歐洲申請公開1170361號說明書)。另外，作為l-精氨酸生產菌或用于誘導l-精氨酸生產菌的親本株，可以列舉：缺失了作為精氨酸阻抑物的argr的菌株(美國專利申請公開2002-0045223號)、使細胞內的谷氨酰胺合成酶活性增高了的菌株(美國專利申請公開2005-0014236號公報)等棒桿菌型細菌。另外，作為l-精氨酸生產菌或用于誘導l-精氨酸生產菌的親本株，可以舉出具有對氨基酸類似物等的耐受性的棒桿菌型細菌的突變株。作為這樣的菌株，可以列舉例如：除了具有2-噻唑丙氨酸耐受性，還具有l(wèi)-組氨酸、l-脯氨酸、l-蘇氨酸、l-異亮氨酸、l-蛋氨酸或l-色氨酸缺陷性的菌株(日本特開昭54-44096號公報)；具有對酮基丙二酸、氟代丙二酸或單氟乙酸的耐受性的菌株(日本特開昭57-18989號公報)；具有對精氨醇的耐受性的菌株(日本特公昭62-24075號公報)；具有對x-胍(x為脂肪鏈或其衍生物)的耐受性的菌株(日本特開平2-186995號公報)；具有對精氨酸氧肟酸鹽和6-氮尿嘧啶的耐受性的菌株(日本特開昭57-150381號公報)。作為具有l(wèi)-精氨酸生產能力的棒桿菌型細菌的具體例子，可以列舉下述菌株。谷氨酸棒桿菌(黃色短桿菌)aj11169(fermbp-6892)谷氨酸棒桿菌(乳糖發(fā)酵短桿菌)aj12092(fermbp-6906)谷氨酸棒桿菌(黃色短桿菌)aj11336(fermbp-6893)谷氨酸棒桿菌(黃色短桿菌)aj11345(fermbp-6894)谷氨酸棒桿菌(乳糖發(fā)酵短桿菌)aj12430(fermbp-2228)＜l-瓜氨酸生產菌和l-鳥氨酸生產菌＞l-瓜氨酸和l-鳥氨酸與l-精氨酸具有共同的生物合成路徑。因此，通過使n-乙酰谷氨酸合成酶(arga)、n-乙酰谷氨酰磷酸還原酶(argc)、鳥氨酸乙酰轉移酶(argj)、n-乙酰谷氨酸激酶(argb)、乙酰鳥氨酸轉氨酶(argd)和/或乙酰鳥氨酸脫乙?；?arge)的酶活性增加，能夠賦予或增強l-瓜氨酸和/或l-鳥氨酸的生產能力(國際公開2006-35831號小冊子)。需要說明的是，為了賦予或增強這些以l-谷氨酸為中間體進行生物合成的l-氨基酸(例如，l-谷氨酰胺、l-脯氨酸、l-精氨酸、l-瓜氨酸、l-鳥氨酸)的生產能力，賦予或增強l-谷氨酸的生產能力的方法也是有效的。即，具有這些以l-谷氨酸為中間體進行生物合成的l-氨基酸的生產能力的細菌可以適當具有上述那樣的l-谷氨酸生產菌所具有的性質。例如，可以對具有這些以l-谷氨酸為中間體進行生物合成的l-氨基酸的生產能力的細菌進行改變，使其α-酮戊二酸脫氫酶和/或琥珀酸脫氫酶的活性降低。另外，作為用于賦予或增強l-谷氨酸等谷氨酸類l-氨基酸生產能力的方法，可以舉出例如對細菌進行改變以使磷酸轉酮酶的活性增加的方法(wo2006/016705)。即，可以對本發(fā)明的細菌進行改變，以使磷酸轉酮酶的活性增加。作為磷酸轉酮酶，可以列舉：d-木酮糖-5-磷酸磷酸轉酮酶、果糖-6-磷酸磷酸轉酮酶?？梢詫-木酮糖-5-磷酸磷酸轉酮酶活性和果糖-6-磷酸磷酸轉酮酶活性中任一者進行增強，也可以對兩種進行增強。作為d-木酮糖-5-磷酸磷酸轉酮酶活性，是指消耗磷酸將木酮糖-5-磷酸轉變?yōu)楦视腿?3-磷酸和乙酰磷酸并釋放一分子h2o的活性。該活性可以根據(jù)goldberg,m.等的文獻(methodsenzymol.,9,515-520(1966))或l.meile的文獻(j.bacteriol.(2001)183；2929-2936)中記載的方法來測定。作為d-木酮糖-5-磷酸磷酸轉酮酶，可以列舉下述d-木酮糖-5-磷酸磷酸轉酮酶：屬于醋桿菌屬、雙歧桿菌屬、乳桿菌屬、硫桿菌屬、鏈球菌屬、甲基球菌屬、丁酸弧菌屬或絲狀桿菌屬的細菌的d-木酮糖-5-磷酸磷酸轉酮酶；屬于念珠菌屬、紅酵母屬、紅冬孢酵母屬、畢赤酵母屬、亞羅酵母(yarrowia)屬、漢森酵母屬、克魯維酵母屬、酵母屬、毛孢子菌屬或溫酵母(wingea)屬的酵母的d-木酮糖-5-磷酸磷酸轉酮酶。wo2006/016705中公開了d-木酮糖-5-磷酸磷酸轉酮酶及編碼其的基因的具體例子。另外，作為果糖-6-磷酸磷酸轉酮酶活性，是指消耗磷酸將果糖6-磷酸轉變?yōu)槌嗵\糖-4-磷酸和乙酰磷酸并排出一分子h2o的活性。該活性可以根據(jù)racker,e的文獻(methodsenzymol.,5,276-280(1962))或l.meile的文獻(j.bacteriol.(2001)183；2929-2936)中記載的方法來測定。作為果糖-6-磷酸磷酸轉酮酶，可以列舉下述果糖-6-磷酸磷酸轉酮酶：屬于醋桿菌屬、雙歧桿菌屬、綠菌屬、布魯氏菌屬、甲基球菌屬或加德納氏菌屬的細菌的果糖-6-磷酸磷酸轉酮酶；屬于紅酵母屬、念珠菌屬、酵母屬等的酵母的果糖-6-磷酸磷酸轉酮酶。wo2006/016705中公開了果糖-6-磷酸磷酸轉酮酶及編碼其的基因的具體例子?？梢杂蓡我坏拿?d-木酮糖-5-磷酸/果糖-6-磷酸磷酸轉酮酶)保持兩種磷酸轉酮酶活性。將長雙歧桿菌(bifidobacteriumlongum)jcm1217的磷酸轉酮酶基因(xfp基因)的核苷酸序列及編碼該基因的磷酸轉酮酶(xfp蛋白質)的氨基酸序列分別示于序列號9和10。另外，作為賦予或增強l-氨基酸生產能力的方法，可以舉出例如，對細菌進行改變以使一種或多種與糖代謝相關的蛋白質、與能量代謝相關的蛋白質的活性增加的方法。作為與糖代謝相關的蛋白質，可以列舉與糖的攝取相關的蛋白質、糖酵解系統(tǒng)酶。作為編碼與糖代謝相關的蛋白質的基因，可以列舉：葡萄糖6-磷酸異構酶基因(pgi；國際公開第01/02542號小冊子)、丙酮酸羧化酶基因(pyc；國際公開99/18228號小冊子、歐洲申請公開1092776號說明書)、葡糖磷酸變位酶基因(pgm；國際公開03/04598號小冊子)、果糖二磷酸醛縮酶基因(pfkb,fbp；國際公開03/04664號小冊子)、轉醛酶(talb；國際公開03/008611號小冊子)、延胡索酸酶基因(fum；國際公開01/02545號小冊子)、non-pts、蔗糖攝取基因(csc；歐洲申請公開1149911號小冊子)、蔗糖同化性基因(scrab操縱子；美國專利7,179,623號說明書)。作為編碼與能量代謝相關的蛋白質的基因，可以列舉：轉氫酶基因(pntab；美國專利5,830,716號說明書)、細胞色素bo型氧化酶(cytochromoebo-typeoxidase)基因(cyob；歐洲專利申請公開1070376號說明書)。l-氨基酸生產菌的育種所使用的基因和蛋白質可以分別具有例如上述例示出的基因和蛋白質等公知的基因和蛋白質的核苷酸序列和氨基酸序列。另外，l-氨基酸生產菌的育種所使用的基因和蛋白質還可以分別是上述例示出的基因和蛋白質等公知的基因和蛋白質的保守變異體。具體而言，例如，對于l-氨基酸生產菌的育種所使用的基因而言，只要保持了原本功能即可，可以是編碼如下蛋白質的基因，所述蛋白質具有在公知的蛋白質的氨基酸序列中于1個或多個位置取代、缺失、插入和/或添加了1或多個氨基酸的氨基酸序列。對于基因和蛋白質的保守變異體，可以適用后面敘述的與α-kg攝入載體基因和α-kg攝入載體的保守變異體相關的記載。＜1-2＞α-kg攝入載體的活性增加以增加α-kg攝入載體的活性的方式對本發(fā)明的細菌進行了改變。具體的，對本發(fā)明的細菌進行了改變使得α-kg攝入載體的活性(α-kg攝入載體活性)相比于非改變株增加。本發(fā)明的細菌可以通過以增加α-kg攝入載體的活性的方式對具有l(wèi)-氨基酸生產能力的棒桿菌型細菌進行改變而獲得。另外，本發(fā)明的細菌可以通過以增加α-kg攝入載體的活性的方式對棒桿菌型細菌進行改變，然后，賦予或增強l-氨基酸生產能力而獲得。需要說明的是，本發(fā)明的細菌可以是以增加α-kg攝入載體的活性的方式進行改變而獲得l-氨基酸生產能力的細菌。對于本發(fā)明的細菌而言，不僅以增加α-kg攝入載體的活性的方式進行了改變，而且還可以適當具有例如上述那樣的l-氨基酸生產菌所具有的性質。例如，可以以增加磷酸轉酮酶的活性的方式對本發(fā)明的細菌進行改變。用于構建本發(fā)明的細菌的改變可以以任意順序來進行。通過以增加α-kg攝入載體的活性的方式改變棒桿菌型細菌，能夠使棒桿菌型細菌的l-氨基酸生產能力得到提高，也就是說，通過使用所述棒桿菌型細菌，l-氨基酸的生產提高。特別是通過以增加α-kg攝入載體的活性的方式改變棒桿菌型細菌，可以在產生α-kg副產物的條件下使棒桿菌型細菌的l-氨基酸生產能力得到提高。以下對α-kg攝入載體及編碼其的基因進行說明。“α-kg攝入載體”是指具有α-kg攝入活性的蛋白質?！唉?kg攝入活性”是指從細胞外將α-kg攝入至細胞內的活性。另外，將編碼α-kg攝入載體的基因稱為“α-kg攝入載體基因”。作為α-kg攝入載體，可以舉出由kgtp基因編碼的kgtp蛋白質。作為kgtp基因，可以列舉：大腸桿菌、菠蘿泛菌、腸沙門氏菌、弗氏賀志氏菌、痢疾賀志氏菌、類鼻疽伯克霍爾德氏菌、高效固氮慢生根瘤菌(bradyrhizobiumdiazoefficiens)、空腸彎曲桿菌、茄科羅爾斯通氏菌(ralstoniasolanacearum)的kgtp基因。這些源自各種生物的kgtp基因的核苷酸序列和由它們編碼的kgtp蛋白質的氨基酸序列可以通過例如ncbi等公開數(shù)據(jù)庫獲得。大腸埃希氏菌k-12mg1655株的kgtp基因相當于ncbi數(shù)據(jù)庫中以genbankaccessionnc_000913(versionnc_000913.3gi：556503834)登記的基因組序列中2724448～2725746位序列的互補序列。另外，大腸埃希氏菌k-12mg1655株的kgtp蛋白質登記為genbankaccessionnp_417082(versionnp_417082.1gi：16130512)。將mg1655株的kgtp基因的核苷酸序列及該基因所編碼的kgtp蛋白質的氨基酸序列分別示于序列號7和8。即，α-kg攝入載體基因例如可以是具有上述例示出的kgtp基因核苷酸序列(例如，序列號7所示的核苷酸序列)的基因。另外，α-kg攝入載體例如可以是具有上述例示出的kgtp蛋白質氨基酸序列(例如，序列號8所示的氨基酸序列)的蛋白質。需要說明的是，“具有(氨基酸或堿基)序列”這樣的表述包括“包含該(氨基酸或堿基)序列”的情況和“由該(氨基酸或堿基)序列構成”的情況。α-kg攝入載體基因只要保持了原本功能即可，可以是上述例示出的α-kg攝入載體基因的變異體，例如上述例示出的kgtp基因的變異體。同樣地，α-kg攝入載體只要保持了原本功能即可，可以是上述例示出的α-kg攝入載體的變異體，例如上述例示出的kgtp蛋白質的變異體。需要說明的是，有時將這樣保持了原本功能的變異體稱為“保守變異體”?！発gtp基因”這樣的用語用于不僅表示上述例示出的kgtp基因，還包括它們的保守變異體。同樣地，“kgtp蛋白質”這樣的用語不僅表示上述例示出的kgtp蛋白質，還包括它們的保守變異體。作為保守變異體，可以列舉例如：上述例示出的α-kg攝入載體基因、α-kg攝入載體的同源性修飾體或人工修飾體?！氨３至嗽竟δ堋笔侵富蚧虻鞍踪|的變異體具有與原來的基因或蛋白質的功能(活性、性質)相對應的功能(活性、性質)。對于基因而言，“保持了原本功能”是指基因的變異體編碼保持了原本功能的蛋白質。對于α-kg攝入載體基因而言，“保持了原本功能”是指基因的變異體編碼具有α-kg攝入活性的蛋白質。另外，對于α-kg攝入載體而言，“保持了原本功能”是指蛋白質的變異體具有α-kg攝入活性。蛋白質的α-kg攝入活性可以通過如下方式測定：將表達該蛋白質的菌體與α-kg一起培養(yǎng)，對該蛋白質依賴性的α-kg向菌體內的攝入進行測定(seolw,shatkinaj.escherichiacolikgtpencodesanalpha-ketoglutaratetransporter.procnatlacadsciusa.1991may1；88(9)：3802-6.)。以下，對保守變異體進行例示。α-kg攝入載體基因的同源物或α-kg攝入載體的同源物例如可以通過使用以上述例示出的α-kg攝入載體基因的核苷酸序列或上述例示出的α-kg攝入載體的氨基酸序列作為查詢序列的blast檢索、fasta檢索從公開數(shù)據(jù)庫中容易地獲得。另外，α-kg攝入載體基因的同源物例如可以通過pcr來獲得，所述pcr以各種生物的染色體為模板，以基于這些公知的α-kg攝入載體基因的核苷酸序列制成的寡核苷酸作為引物。α-kg攝入載體基因，可以是編碼下述蛋白質的基因，所述蛋白質具有在上述氨基酸序列(例如，序列號8所示的氨基酸序列)中1個或多個位置取代、缺失、插入和/或添加了1個或多個氨基酸而成的氨基酸序列，只要保持了原本功能即可。例如，對于所編碼的蛋白質而言，其n末端和/或c末端可以延長或縮短。需要說明的是，上述“1個或多個”可以由于氨基酸殘基在蛋白質的立體結構中的位置、種類而不同，具體而言，例如為1～50個、1～40個、1～30個，優(yōu)選為1～20個，更優(yōu)選為1～10個，進一步優(yōu)選為1～5個，特別優(yōu)選為1～3個。上述取代、缺失、插入和/或添加1個或多個氨基酸的每一個蛋白質的功能保持正常的保守突變。保守突變的代表性突變是保守取代。保守取代是指：在取代部位為芳香族氨基酸的情況下，在phe、trp、tyr之間相互取代的突變；在取代部位為疏水性氨基酸的情況下，在leu、ile、val之間相互取代的突變；在極性氨基酸的情況下，在gln、asn之間相互取代的突變；在堿性氨基酸的情況下，在lys、arg、his之間相互取代的突變；在酸性氨基酸的情況下，在asp、glu之間相互取代的突變；在具有羥基的氨基酸的情況下，在ser、thr之間相互取代的突變。作為可以視為保守取代的取代，具體而言可以列舉：由ala取代為ser或thr；由arg取代為gln、his或lys；由asn取代為glu、gln、lys、his或asp；由asp取代為asn、glu或gln；由cys取代為ser或ala；由gln取代為asn、glu、lys、his、asp或arg；由glu取代為gly、asn、gln、lys或asp；由gly取代為pro；由his取代為asn、lys、gln、arg或tyr；由ile取代為leu、met、val或phe；由leu取代為ile、met、val或phe；由lys取代為asn、glu、gln、his或arg；由met取代為ile、leu、val或phe；由phe取代為trp、tyr、met、ile或leu；由ser取代為thr或ala；由thr取代為ser或ala；由trp取代為phe或tyr；由tyr取代為his、phe或trp；以及由val取代為met、ile或leu。另外，上述這樣的氨基酸的取代、缺失、插入、添加或倒位等也包括：基于源自基因的生物個體差、物種差別的情況等而天然產生的突變(突變或變異)所發(fā)生的氨基酸的取代、缺失、插入、添加或倒位等。另外，α-kg攝入載體基因，可以是編碼具有下述氨基酸序列的蛋白質的基因，所述氨基酸序列對于任意上述氨基酸序列的總體氨基酸序列具有例如50％以上、65％以上、80％以上的同源性，優(yōu)選為90％以上的同源性，更優(yōu)選為95％以上的同源性，進一步優(yōu)選為97％以上的同源性，特別優(yōu)選為99％以上的同源性，只要保持了原本功能即可。需要說明的是，在本說明書中，“同源性”(homology)是指“同一性”(identity)的意思。另外，α-kg攝入載體基因，可以是如下的基因，例如dna：其與由上述核苷酸序列(例如，序列號7所示的核苷酸序列)制成的探針，例如，相對于上述核苷酸序列的總體或一部分的互補序列在嚴謹條件下進行雜交，只要保持了原本功能即可?！皣乐敆l件”是指所謂的形成特異性雜交物而不形成非特異性雜交物的條件?？梢耘e出一個例子：高同源性的dna彼此雜交，例如具有50％以上、65％以上、80％以上的同源性的dna彼此雜交，優(yōu)選為90％以上，更優(yōu)選為95％以上，進一步優(yōu)選為97％以上，特別優(yōu)選為99％以上，而比上述同源性低的dna彼此不進行雜交的條件；或者在作為通常dna雜交(southernhybridization)的清洗條件的相當于60℃、1×ssc、0.1％sds的鹽濃度下清洗1次，優(yōu)選清洗2～3次的條件，優(yōu)選相當于為60℃、0.1×ssc、0.1％sds的鹽濃度，更優(yōu)選相當于68℃、0.1×ssc、0.1％sds的鹽濃度。如上所述，上述雜交所用的探針可以是基因的互補序列的一部分。這樣的探針可以通過以基于公知的基因序列制成的寡核苷酸作為引物，且以含有上述基因的dna片段作為模板的pcr來制作。例如，可以使用300bp左右長度的dna片段作為探針?？梢允褂?00bp左右長度的dna片段作為探針的情況下，作為雜交的清洗條件，可以舉出50℃、2×ssc、0.1％sds。另外，由于根據(jù)宿主不同密碼子的簡并性不同，因此α-kg攝入載體基因可以是將任意密碼子取代為與其等價的密碼子而形成的基因。也就是說，所述α-kg攝入載體基因可以是以上示例的任意α-kg攝入載體基因的由于遺傳密碼子的簡并性的變體。例如，可以對α-kg攝入載體基因進行修飾，以使其具有與待使用的宿主的密碼子使用頻率對應的最適合的密碼子。2個序列之間的序列同一性的百分率例如可以使用數(shù)學算法來確定。作為這樣的數(shù)學算法的不受限定的例子，可以列舉：myers和miller(1988)cabios4：1117的算法、smithetal(1981)adv.appl.math.2：482的局部同源性算法、needleman和wunsch(1970)j.mol.biol.48：443453的同源性比對算法、pearson和lipman(1988)proc.natl.acad.sci.85：24442448的檢索類似性的方法、karlin和altschul(1993)proc.natl.acad.sci.usa90：58735877中記載的改良后的karlin和altschul(1990)proc.natl.acad.sci.usa872264的算法。利用基于這些數(shù)學算法的程序可以進行用于確定序列同一性的序列比較(比對)。程序利用適當?shù)碾娔X運行。作為這樣的程序，沒有特別限定，可以列舉：pc/gene程序的clustal(可以由intelligenetics,mountainview,calif.獲得)、align程序(version2.0)、以及wisconsingeneticssoftwarepackage,version8(可以由geneticscomputergroup(gcg),575sciencedrive,madison,wis.,usa獲得)的gap、bestfit、blast、fasta及tfasta。使用這些程序的比對例如可以使用初始參數(shù)來進行。對應clustal程序，higglnsetal.(1988)gene73：237244(1988)、higglnsetal.(1989)cabios5：151153、corpetetal.(1988)nucleicacidsres.16：1088190、huangetal.(1992)cabios8：15565、以及pearsonetal.(1994)meth.mol.biol.24：307331中有詳細記載。為了獲得與編碼對象蛋白質的核苷酸序列具有同源性的核苷酸序列，具體而言，例如可以在blastn程序、得分＝100、字段長度＝12的條件下進行blast核苷酸檢索。為了獲得與對象蛋白質具有同源性的氨基酸序列，具體而言，例如可以在blastx程序、得分＝50、字段長度＝3的條件下進行blast蛋白質檢索。對于blast核苷酸檢索、blast蛋白質檢索，可以參考http://www.ncbi.nlm.nih.gov。另外，為了得到以比較為目的而加入了間隙的比對，可以利用gappedblast(blast2.0)。另外，可以將psi-blast(blast2.0)用于檢測序列之間的背離關系的反復檢索。對于gappedblast和psi-blast，可以參考altschuletal.(1997)nucleicacidsres.25:3389。在使用blast、gappedblast或psi-blast時，例如，可以使用各程序(例如，對于核苷酸序列的blastn、對于氨基酸序列的blastx)的初始參數(shù)。比對也可以手動進行。2個序列之間的序列同一性通過將2個序列最大程度排列為一致時2個序列之間一致的殘基比率來計算。需要說明的是，上述與基因、蛋白質的保守變異體相關的記載也可以適用l-氨基酸生物合成系統(tǒng)酶等任意蛋白質及編碼這些蛋白質的基因。＜1-3＞使蛋白質的活性增加的方法以下對使α-kg攝入載體等蛋白質的活性增加的方法進行說明?！暗鞍踪|的活性增加”是指蛋白質的活性相比于非改變株增加。具體的，“蛋白質的活性增加”可以表示該蛋白質在每個細胞中的活性相對于非改變株有所增加的意思。這里所謂的“非改變株”是指未以增加靶蛋白質的活性的方式進行改變的對照株。作為非改變株，可以列舉野生株、親本株。非改變株的具體例子包括細菌物種的相應模式菌株。非改變株的例子還包括上述與細菌的說明相關例示的菌株。也就是說，在實施方案中，蛋白質的活性可以相比于模式菌株(即棒桿菌型細菌所屬物種的模式菌株)增加。在另一個實施方案中，蛋白質的活性可以相比于c.glutamicumatcc13869增加。在另一個實施方案中，蛋白質的活性可以相比于c.glutamicumatcc13032增加。需要說明的是，將“蛋白質的活性增加”稱為“蛋白質的活性增強”。更具體的，“蛋白質的活性增加”具體而言可以指與非改變株相比增加了該蛋白質在每個細胞中的分子數(shù)和/或增加了該蛋白質每個分子的功能。即，“蛋白質的活性增加”的情況中的“活性”不僅限于蛋白質的催化劑活性，也表示編碼蛋白質的基因的轉錄量(mrna量)或翻譯量(蛋白質的量)的意思。另外，“蛋白質的活性增加”不僅包括在原本具有靶蛋白質活性的菌株中使該蛋白質的活性增加，還包括對原本不具有靶蛋白質活性的菌株賦予該蛋白質的活性。另外，作為結果，只要蛋白質的活性增加即可，可以在使宿主原本具有的靶蛋白質的活性降低或消失之后賦予合適的靶蛋白質的活性。對于蛋白質的活性的增加程度而言，只要蛋白質的活性比非改變株有所增加即可，沒有特別限制。蛋白質的活性例如可以提高至，例如非改變株的1.5倍以上、2倍以上或3倍以上。另外，在非改變株不具有靶蛋白質的活性的情況下，只要通過導入編碼該蛋白質的基因來生成該蛋白質即可，例如，可以生產該蛋白質至能夠測定其活性的程度。蛋白質的活性增加這樣的改變例如可以通過例如使編碼該蛋白質的基因的表達增高而實現(xiàn)?！盎虻谋磉_增高”是指與野生株、親本株等非改變株相比，基因的表達增加。具體的，“基因的表達增高”可以表示與非改變株相比，該基因在每個細胞中的表達量增加。更具體的，“基因的表達增高”是指基因的轉錄量(mrna量)增加和/或基因的翻譯量(蛋白質的量)增加。需要說明的是，將“基因的表達增高”也稱為“基因的表達增強”?；虻谋磉_例如可以增高至非改變株的1.5倍以上、2倍以上或3倍以上。另外，“基因的表達增高”不僅包括在原本表達了靶基因的菌株中使該基因的表達量增高，還包括在原本不表達靶基因的菌株中使該基因表達。即，“基因的表達增高”包括例如向不具有靶基因的菌株導入該基因并使該基因表達?；虮磉_的增高例如可以通過使基因的拷貝數(shù)增加來實現(xiàn)?；虻目截悢?shù)的增加可以通過向宿主的染色體導入該基因而實現(xiàn)。向染色體導入基因例如可以利用同源重組來進行(milleri,j.h.experimentsinmoleculargenetics,1972,coldspringharborlaboratory)。作為利用同源重組的基因導入法，可以列舉例如：red驅動整合(red-drivenintegration)法(datsenko,k.a,andwanner,b.l.proc.natl.acad.sci.usa.97：6640-6645(2000))等使用直鏈狀dna的方法、使用包含溫度敏感復制起點的質粒的方法、使用能夠接合轉移的質粒的方法、使用不具有在宿主內發(fā)揮功能的復制起點的自殺載體(suicidevector)的方法、使用了噬菌體的轉導法?；蚩梢詢H導入1個拷貝，也可以導入2個或2個以上的拷貝。例如，通過以在染色體上存在多個拷貝的序列作為靶標進行同源重組，可以向染色體導入基因的多個拷貝。作為在染色體上存在多個拷貝的序列，可以列舉：重復dna序列(repetitivedna)、存在于轉座子兩端的反向重復序列(invertedrepeat)。另外，也可以以目標物質的生產所不需要的基因等染色體上適當?shù)男蛄凶鳛榘袠诉M行同源重組。另外，基因也可以使用轉座子、mini-mu隨機地導入染色體上(日本特開平2-109985號公報、us5,882,888、ep805867b1)。在染色體上導入靶基因可以通過使用了具有與該基因的全部或一部分互補的序列的探針的dna雜交(southernhybridization)來確認，或者通過使用了基于該基因序列制成的引物的pcr等來確認。另外，基因的拷貝數(shù)的增加可以通過向宿主導入包含該基因的載體來實現(xiàn)。例如，將包含靶基因的dna片段與在宿主內發(fā)揮功能的載體連接，構建該基因的表達載體，并用該表達載體對宿主進行轉化，由此可以使該基因的拷貝數(shù)增加。包含靶基因的dna片段例如可以通過以具有靶基因的微生物的基因組dna為模板的pcr而獲得。作為載體，可以使用在宿主的細胞內能夠自主復制的載體。載體優(yōu)選為多拷貝載體。另外，為了選擇轉化體，載體優(yōu)選具有抗生素耐受性基因等標記物。另外，載體還可以具備用于表達而插入的基因的啟動子、終止子。載體可以是例如：源自細菌質粒的載體、源自酵母質粒的載體、源自噬菌體的載體、粘粒(cosmid)或噬粒(phagemid)等。作為在棒桿菌型細菌中能夠自主復制的載體，具體而言可以列舉例如：phm1519(agric,biol.chem.,48,2901-2903(1984))；pam330(agric.biol.chem.,48,2901-2903(1984))；對它們進行了改良而具有耐藥性基因的質粒；日本特開平3-210184號公報中記載的質粒pcry30；日本特開平2-72876號公報及美國專利5,185,262號說明書公報中記載的質粒pcry21、pcry2ke、pcry2kx、pcry31、pcry3ke及pcry3kx；日本特開平1-191686號公報中記載的質粒pcry2和pcry3；日本特開昭58-192900號公報中記載的paj655、paj611及paj1844；日本特開昭57-134500號公報中記載的pcg1；日本特開昭58-35197號公報中記載的pcg2；日本特開昭57-183799號公報中記載的pcg4和pcg11；日本特開平10-215883號公報中記載的pvk7；wo2007/046389中記載的pvk9；wo2013/069634中記載的pvs4；日本特開平9-070291號公報中記載的pvc7。在導入基因的情況下，基因只要以能夠表達的狀態(tài)保持于宿主中即可。具體而言，基因只要以受到在宿主中發(fā)揮功能的啟動子的控制而表達的方式由宿主保持即可。術語“在宿主中發(fā)揮功能”表示在所述宿主中表現(xiàn)出啟動子活性的啟動子。啟動子可以是源自宿主的啟動子，也可以是源自其它物種的啟動子。啟動子可以是待導入的基因的固有啟動子，也可以是其它基因的啟動子。作為啟動子，例如，可以利用后面敘述的那樣更強的啟動子?；虻南掠慰梢栽O置轉錄終止用的終止子。終止子只要在宿主發(fā)揮功能即可，沒有特別限制。終止子可以是源自宿主的終止子，也可以是源自其它物種的終止子。終止子可以是待導入的基因的固有終止子，也可以是其它基因的終止子。關于在各種微生物中可以利用的載體、啟動子、終止子，例如在“微生物學基礎講座8(微生物學基礎講座)基因工學、共立出版、1987年”中有詳細記載，可以利用這些載體、啟動子、終止子。另外，在導入2個或2個以上基因的情況下，各基因只要以能夠表達的狀態(tài)保持于宿主中即可。例如，各基因可以全部保持于單一的表達載體上，也可以全部保持于染色體上。另外，各基因可以分別保持于多個表達載體上，還可以分別保持于單一或多個表達載體上和染色體上。另外，可以由2個或2個以上基因構成操縱子而導入。作為“導入2個或2個以上基因的情況”，可以列舉例如：導入分別編碼2個或2個以上蛋白質(例如酶)的基因的情況、導入分別編碼構成單一蛋白質復合體(例如酶復合體)的2個或2個以上亞基的基因的情況、以及上述情況的組合。導入的基因只要是編碼在宿主內發(fā)揮功能的蛋白質的基因即可，沒有特別限制。導入的基因可以是源自宿主的基因，也可以是源自不同物種的基因。導入的基因例如可以使用基于該基因的核苷酸序列設計而成的引物，以具有該基因的生物的基因組dna、搭載該基因的質粒等作為模板，通過pcr來獲得。另外，導入的基因例如可以基于該基因的核苷酸序列進行全合成(gene,60(1),115-127(1987))。獲得的基因可以直接利用，或者經(jīng)過適當改變而利用。也就是說，可以通過修飾基因獲得基因的變體。可以通過已知的技術修飾基因。例如，可以通過位點特異性突變方法在dna的目標位點引入目標突變。也就是說，可以通過位點特異性突變方法修飾基因的編碼區(qū)使得編碼的蛋白質的特定位點包括氨基酸殘基的取代、缺失、插入或增加。位點特異性突變方法的例子包括利用pcr的方法(higuchi,r.,61,inpcrtechnology,erlich,h.a.eds.,stocktonpress(1989)；carter,p.,meth.inenzymol.,154,382(1987))，和利用噬菌體的方法(kramer,w.andfrits,h.j.,meth.inenzymol.,154,350(1987)；kunkel,t.a.etal.,meth.inenzymol.,154,367(1987))?；蛘撸梢哉麄€合成基因的變體。需要說明的是，在蛋白質以由多個亞基形成的復合體的形式發(fā)揮功能的情況下，作為結果，只要蛋白質的活性增加即可，可以對這些多個亞基全部進行修飾，也可以僅對一部分進行修飾。即，例如在通過使基因的表達增高而使蛋白質的活性增加的情況下，可以使編碼這些亞基的多個基因的全部表達增高，也可以僅使一部分的表達增高。通常，優(yōu)選使編碼這些亞基的多個基因的全部表達增高。另外，對于構成復合體的各亞基而言，只要復合體具有目標蛋白質的功能即可，可以源自1種生物，也可以源自2種或2種以上的不同生物。即，例如可以向宿主導入編碼多個亞基且源自同一生物的基因，可以向宿主導入分別源自不同生物的基因。另外，基因的表達的增高可以通過使基因的轉錄效率提高而實現(xiàn)。另外，基因的表達的增高可以通過使基因的翻譯效率提高而實現(xiàn)。基因的轉錄效率、翻譯效率的提高例如可以通過表達調節(jié)序列的改變而實現(xiàn)。“表達調節(jié)序列”是指影響基因表達的部位的總稱。作為表達調節(jié)序列，可以列舉例如：啟動子、夏因-達爾加諾(shine-dalgarno)(sd)序列(也稱為核糖體結合部位(rbs))、以及rbs與起始密碼子之間的間隔區(qū)域。表達調節(jié)序列可以使用啟動子檢索載體、genetyx等基因分析軟件來確定。這些表達調節(jié)序列的修飾例如可以通過使用了溫度敏感性載體的方法、red驅動整合法(wo2005/010175)來進行?；虻霓D錄效率的提高例如可以通過將染色體上的基因的啟動子取代為更強的啟動子來實現(xiàn)。“更強的啟動子”是指與原本存在的野生型啟動子相比，基因的轉錄得到提高的啟動子。作為能夠在棒桿菌型細菌中利用的更強的啟動子，可以列舉：人工設計變更而成的p54-6啟動子(appl.microbiol.biotechnol.,53,674-679(2000))、可以在棒桿菌型細菌內用乙酸、乙醇、丙酮酸等誘導的pta、acea、aceb、adh、amye啟動子、在棒桿菌型細菌內表達量大的強啟動子cspb、sod、tuf(ef-tu)啟動子(journalofbiotechnology104(2003)311-323,applenvironmicrobiol.2005dec；71(12)：8587-96.)、lac啟動子、tac啟動子、trc啟動子。另外，作為更強的啟動子，可以通過使用各種報告基因來獲得原有啟動子的高活性型基因。例如，通過將啟動子區(qū)域內的-35、-10區(qū)域接近共有序列，可以提高啟動子的活性(國際公開第00/18935號)。作為高活性型啟動子，可以舉出各種tac樣啟動子(katashkinajietal.russianfederationpatentapplication2006134574)。啟動子的強度的評價方法和強啟動子的例子記載于goldstein等的論文(prokaryoticpromotersinbiotechnology.biotechnol.annu.rev.,1,105-128(1995))等?；虻姆g效率的提高例如可以通過將染色體上的基因的夏因-達爾加諾(sd)序列(也成為核糖體結合部位(rbs))取代為更強的sd序列來實現(xiàn)。“更強的sd序列”是指與原本存在的野生型sd序列相比，mrna的翻譯得到提高的sd序列。作為更強的sd序列，可以舉出例如源自噬菌體t7的基因10的rbs(olinsp.o.etal,gene,1988,73,227-235)。另外，已知rbs與起始密碼子之間的間隔區(qū)域、特別是起始密碼子緊鄰上游的序列(5’-utr)中的多個核苷酸的取代或插入或缺失對mrna的穩(wěn)定性和翻譯效率有非常大的影響，可以通過改變它們來使基因的翻譯效率提高?；虻姆g效率的提高例如可以通過密碼子的改變來實現(xiàn)。例如，通過將存在于基因中的稀有密碼子取代為可以以更高頻率使用的同義密碼子，能夠使基因的翻譯效率提高。即，例如可以根據(jù)待使用的宿主的密碼子使用頻率對導入的基因進行修飾，以使其具有最適合的密碼子。密碼子的取代例如可以通過在dna的目標部位導入目標突變的部位特異性突變法來進行。另外，還可以對進行了密碼子取代的基因片段進行全合成。在“密碼子使用數(shù)據(jù)庫”(http：//www.kazusa.or.jp/codon；nakamura,y.etal,nucl.acidsres.,28,292(2000))中公開了各種生物中的密碼子的使用頻率。另外，基因的表達的提高可以通過對使基因表達提高的調節(jié)子進行擴增，或者使降低基因表達的調節(jié)子缺失或弱化來實現(xiàn)。上述這樣使基因的表達增高的方法可以單獨使用，也可以任意組合使用。另外，增加蛋白質的活性這樣的改變例如可以通過增加蛋白質的比活性來實現(xiàn)。比活性的增加也包括對反饋抑制的脫敏。也就是說，當?shù)鞍踪|受到代謝物的反饋抑制時，可以通過使得宿主保持編碼對反饋抑制脫敏的突變蛋白質的基因，增加蛋白質的比活性?！皩Ψ答佉种频拿撁簟卑ǚ答佉种频慕档秃拖Ｔ黾恿吮然钚缘牡鞍踪|例如可以探索各種生物而獲得。另外，通過在原有的蛋白質中導入突變可以獲得高活性型的蛋白質。導入的突變例如可以是蛋白質的1個或多個位置的1個或多個氨基酸殘基取代、缺失、插入或添加。突變的導入例如可以通過上述那樣的位點特異性突變法來進行。另外，突變的導入例如可以通過突變處理來進行。作為突變處理，可以列舉：x射線照射、紫外線照射、以及利用n-甲基-n’-硝基-n-亞硝基胍(mnng)、甲磺酸乙酯(ems)及甲磺酸甲酯(mms)等突變劑的處理。另外，體外(invitro)直接用羥胺對dna進行處理也可以誘發(fā)隨機突變。比活性的增加可以單獨使用，也可以與上述那樣的增加基因表達的方法任意組合使用。轉化的方法沒有特別限定，可以使用以往已知的方法。棒桿菌型細菌的轉化可以通過例如原生質體法(gene,39,281-286(1985))、電穿孔法(bio/technology,7,1067-1070(1989))、電脈沖法(日本特開平2-207791號公報)來進行。蛋白質的活性增加可以通過對該蛋白質的活性進行測定來確認。蛋白質的活性增加可以通過確認編碼該蛋白質的基因表達增高來確認?；虮磉_增高可以通過確認該基因的轉錄量增高、確認由該基因表達的蛋白質的量增高來確認?；虻霓D錄量增高的確認可以通過將由該基因轉錄的mrna的量與野生株或親本株等非改變株比較來進行。作為評價mrna的量的方法，可以列舉：rna雜交(northernhybridization)、rt-pcr等(sambrook,j.,etal.,molecularcloningalaboratorymanual/thirdedition,coldspringharborlaboratorypress,coldspringharbor(usa),2001)。mrna的量例如可以增高至非改變株的1.5倍以上、2倍以上或3倍以上。蛋白質的量增加的確認可以使用抗體通過蛋白質印跡法(westernblot)來進行(molecularcloning(coldspringharborlaboratorypress,coldspringharbor(usa),2001))。蛋白質的量例如可以增高至非改變株的1.5倍以上、2倍以上或3倍以上。上述使蛋白質的活性增加的方法除了用于α-kg攝入載體的活性增加以外，還可以用于任意蛋白質例如l-氨基酸生物合成酶的活性增強、任意基因例如上述編碼任意蛋白質的基因的表達增強。＜1-4＞使蛋白質的活性降低的方法以下，對使蛋白質的活性降低的方法進行說明?！暗鞍踪|的活性降低”是指該蛋白質的活性相比于非改變株降低。具體的，“蛋白質的活性降低”可以表示在每個細胞中的活性比非改變株降低。這里所謂的“非改變株”是指未以降低目標蛋白質的活性的方式進行改變的對照株。作為非改變株，可以列舉野生株、親本株。非改變株的具體例子包括細菌物種的相應模式菌株。非改變株的例子還包括上述與細菌的說明相關例示的菌株。也就是說，在實施方案中，蛋白質的活性可以相比于模式菌株(即棒桿菌型細菌所屬物種的模式菌株)降低。在另一個實施方案中，蛋白質的活性可以相比于c.glutamicumatcc13869降低。在另一個實施方案中，蛋白質的活性可以相比于c.glutamicumatcc13032降低?！暗鞍踪|的活性降低”也包括活性完全消失的情況?！暗鞍踪|的活性降低”具體而言可以指與非改變株相比，該蛋白質在每個細胞中的分子數(shù)降低和/或該蛋白質的每個分子的功能降低。即，“蛋白質的活性降低”的情況中的“活性”不僅限于蛋白質的催化劑活性，也表示編碼蛋白質的基因的轉錄量(mrna量)或翻譯量(蛋白質的量)的意思。需要說明的是，“蛋白質在每個細胞中的分子數(shù)降低”包括該蛋白質完全不存在的情況。另外，“蛋白質的每個分子的功能降低”包括該蛋白質的每個分子的功能完全消失的情況。對于蛋白質的活性降低的程度而言，只要蛋白質的活性比非改變株低即可，沒有特別限制。蛋白質的活性例如可以降低至非改變株的50％以下、20％以下、10％以下、5％以下或0％。降低蛋白質的活性這樣的改變例如可以通使編碼該蛋白質的基因的表達降低來實現(xiàn)?！盎虻谋磉_降低”是指該基因的表達相比于野生株、親本株等非改變株降低。具體的，“基因的表達降低”可以表示在每個細胞中的表達量比野生株、親本株等非改變株低。更具體的，“基因的表達降低”可以表示基因的轉錄量(mrna量)降低和/或基因的翻譯量(蛋白質的量)降低?！盎虻谋磉_降低”包括該基因完全不表達的情況。需要說明的是，將“基因的表達降低”稱為“基因的表達弱化”?；虻谋磉_例如可以降低至非改變株的50％以下、20％以下、10％以下、5％以下或0％?；虻谋磉_降低例如可以是由轉錄效率降低引起的，也可以是由翻譯效率降低引起的，還可以是它們的組合引起的。基因的表達降低例如可以通過對基因的啟動子、夏因-達爾加諾(sd)序列(也稱為核糖體結合部位(rbs))、rbs與起始密碼子之間的間隔區(qū)域等表達調節(jié)序列進行修飾來實現(xiàn)。在修飾表達調節(jié)序列的情況下，表達調節(jié)序列優(yōu)選改變1個以上堿基，更優(yōu)選改變2個以上堿基，特別優(yōu)選改變3個以上堿基。例如，可以通過例如使用較弱的啟動子替代染色體上的基因的啟動子，降低基因的轉錄效率。術語“較弱的啟動子”表示與基因固有存在的野生型啟動子相比，提供減弱的基因轉錄的啟動子。較弱的啟動子的例子包括，例如，可誘導啟動子。也就是說，可誘導啟動子可以作為非誘導條件下的較弱啟動子發(fā)揮功能，例如在缺少對應誘導子的條件下。另外，可以使表達調節(jié)序列的一部分或全部缺失。另外，基因的表達降低例如可以通過對與控制表達相關的因子進行操作來實現(xiàn)。作為與控制表達相關的因子，可以列舉：與控制轉錄、翻譯相關的低分子(誘導物質、抑制物質等)、蛋白質(轉錄因子等)、核酸(sirna等)等。另外，基因的表達降低例如可以通過在基因的編碼區(qū)域導入降低基因表達的突變來實現(xiàn)。例如，通過將基因的編碼區(qū)域的密碼子取代為宿主中以更低頻率使用的同義密碼子，可以使基因的表達降低。另外，例如，通過后面敘述的那樣的基因破壞，可以使基因表達本身降低。另外，降低蛋白質的活性這樣的改變例如可以通過破壞編碼該蛋白質的基因來實現(xiàn)。“破壞基因”是指對該基因進行修飾以使其不產生正常發(fā)揮功能的蛋白質。“不產生正常發(fā)揮功能的蛋白質”包括由該基因完全不產生蛋白質的情況、由該基因產生每個分子的功能(活性、性質)降低或消失的蛋白質?；虻钠茐睦缈梢酝ㄟ^使染色體上基因的編碼區(qū)域的一部分或全部缺失而實現(xiàn)。并且，包括染色體上的基因的前后序列在內，可以使基因全部缺失。只要能夠實現(xiàn)蛋白質的活性降低，缺失的區(qū)域可以是n末端區(qū)域、內部區(qū)域、c末端區(qū)域等任意區(qū)域。通常，缺失的區(qū)域較長能夠可靠地使基因失活。另外，優(yōu)選缺失的區(qū)域的前后序列的閱讀框不一致。另外，基因的破壞例如可以通過在染色體上的基因的編碼區(qū)域導入氨基酸取代(錯義突變)、導入終止密碼子(無義突變)、或者導入添加或缺失1～2個堿基的移碼突變等來實現(xiàn)(journalofbiologicalchemistry272：8611-8617(1997),proceedingsofthenationalacademyofsciences,usa955511-5515(1998),journalofbiologicalchemistry26116,20833-20839(1991))。另外，基因的破壞例如也可以通過在染色體上的基因的編碼區(qū)域插入其他序列來實現(xiàn)。插入部位可以是基因的任意區(qū)域，但待插入的序列較長者能夠可靠地使基因失活。另外，插入部位的前后序列優(yōu)選與閱讀框不一致。作為其它序列，只要是使編碼的蛋白質的活性降低或消失的序列即可，沒有特別限制，可以舉出例如：抗生素耐受性基因等標記物基因，用于目標物質的生產的基因。對染色體上的基因進行上述那樣的改變可以通過以下方式實現(xiàn)：例如，制作進行了修飾的缺陷型基因，以使其不產生正常發(fā)揮功能的蛋白質，用包含該缺陷型基因的重組dna對宿主進行轉化，使缺陷型基因和染色體上的野生型基因發(fā)生同源重組，由此將染色體上的野生型基因取代為缺陷型基因。此時，對于重組dna而言，如果根據(jù)宿主的營養(yǎng)缺陷性等性質而預先含有標記物基因，則易于操作。作為缺陷型基因，可以列舉：缺失了基因的全部區(qū)域或一部分區(qū)域的基因、導入了錯義突變的基因、導入了無義突變的基因、導入了移碼突變的基因、導入了轉座子或標記物基因等的插入序列的基因。即使生成了由缺陷型基因編碼的蛋白質，也具有與野生型蛋白質不同的立體結構，功能降低或消失。這樣的通過利用同源重組的基因取代來進行的基因破壞的方法已經(jīng)建立，有如下方法：被稱為“red驅動整合(red-drivenintegration)”的方法(datsenko,k.a,andwanner,b.l.proc.natl.acad.sci.usa.97：6640-6645(2000))、red驅動整合法與源自λ噬菌體的切除系統(tǒng)(cho,e.h.,gumport,r.i.,gardner,j.f.j.bacteriol.184：5200-5203(2002))組合而成的方法(參照wo2005/010175號)等使用直鏈狀dna的方法；使用包含溫度敏感性復制起點的質粒的方法、使用能夠轉移復制的質粒的方法、使用不具有在宿主內發(fā)揮功能的復制起點的自殺載體的方法等(美國專利第6303383號、日本特開平05-007491號)。另外，降低蛋白質的活性這樣的改變例如可以通過突變處理來進行。作為突變處理，可以列舉：x射線照射、紫外線照射、以及利用n-甲基-n’-硝基-n-亞硝基胍(mnng)、甲磺酸乙酯(ems)及甲磺酸甲酯(mms)等突變劑的處理。需要說明的是，在蛋白質以由多個亞基形成的復合體的形式發(fā)揮功能的情況下，作為結果，只要蛋白質的活性降低即可，可以對這些多個亞基全部進行修飾，也可以僅對一部分進行修飾。即，例如可以對編碼這些亞基的多個基因全部進行破壞等，也可以僅對一部分進行破壞等。另外，在蛋白質中存在多個同工酶的情況下，作為結果，只要蛋白質的活性降低即可，可以使多個同工酶全部活性降低，也可以僅使一部分的活性降低。即，例如可以對編碼這些同工酶的多個基因全部進行破壞等，也可以僅對一部分進行破壞等。蛋白質的活性降低可以通過對該蛋白質的活性進行測定來確認。蛋白質的活性降低可以通過確認編碼該蛋白質的基因的表達降低來確認?；虻谋磉_降低可以通過確認該基因的轉錄量降低、確認由該基因表達的蛋白質的量降低來確認。基因的轉錄量降低的確認可以通過將由該基因轉錄的mrna的量與非改變株比較來進行。作為評價mrna的量的方法，可以例舉：：rna雜交、rt-pcr等(molecularcloning(coldspringharborlaboratorypress,coldspringharbor(usa),2001))。與非改變株相比，mrna的量例如可以降低至50％以下、20％以下、10％以下、5％以下或0％。蛋白質的量降低的確認可以使用抗體通過蛋白質印跡法(westernblot)來進行(molecularcloning(coldspringharborlaboratorypress,coldspringharbor(usa),2001))。與非改變株相比，蛋白質的量例如可以降低至50％以下、20％以下、10％以下、5％以下或0％。基因破壞可以根據(jù)破壞所使用的方法通過確定該基因的一部分或全部核苷酸序列、限制酶圖譜或全長等來確認。上述使蛋白質的活性降低的方法可以用于任意蛋白質例如催化從目標l-氨基酸的生物合成路徑分支出生成目標l-氨基酸以外的化合物的反應的酶的活性降低、任意基因例如編碼任意蛋白質的基因的表達降低。＜2＞本發(fā)明的l-氨基酸的制造方法本發(fā)明的方法是l-氨基酸的制造方法，該方法包括：用培養(yǎng)基對本發(fā)明的細菌進行培養(yǎng)及從該培養(yǎng)基采集l-氨基酸。在本發(fā)明中，制造的l-氨基酸為谷氨酸類l-氨基酸。在本發(fā)明中，可以制造1種l-氨基酸，也可以制造2種或2種以上l-氨基酸。使用的培養(yǎng)基只要能夠繁殖本發(fā)明的細菌并生產目標l-氨基酸即可，沒有特別限制。作為培養(yǎng)基，例如可以使用能用于棒桿菌型細菌等細菌的培養(yǎng)的通常的培養(yǎng)基。作為培養(yǎng)基，例如可以使用根據(jù)需要含有選自碳源、氮源、磷酸源、硫源、其它各種有機成分、無機成分中的成分的培養(yǎng)基。培養(yǎng)基成分的種類、濃度可以根據(jù)使用的棒桿菌型細菌的種類等各條件而適當設定。作為碳源，具體而言可以列舉例如：葡萄糖、果糖、蔗糖、乳糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖、糖蜜(molasses)、淀粉水解物、生物質的水解物等糖類、乙酸、富馬酸、檸檬酸、琥珀酸等有機酸類、甘油、粗甘油、乙醇等醇類、脂肪酸類。需要說明的是，作為碳源，可以優(yōu)選使用源自植物的原料。作為植物，可以列舉例如：玉米、稻、小麥、大豆、甘蔗、甜菜、棉。作為源自植物的原料，可以列舉例如：根、莖、桿、枝、葉、花、種子等器官、包含這些器官的植物體、這些植物器官的分解產物。源自植物的原料的利用方式?jīng)]有特別限制，例如，可以以未加工品、榨汁、粉碎物、純化物等任意形式加以利用。另外，木糖等5碳糖、葡萄糖等6碳糖或它們的混合物例如可以由植物生物質獲得而加以利用。具體而言，這些糖類可以通過將植物生物質供于水蒸汽處理、濃酸水解、稀酸水解、利用纖維素酶等酶的水解、堿處理等處理來獲得。需要說明的是，半纖維素通常比纖維素更容易水解，因此，可以將植物生物質中的半纖維素預先水解使5碳糖游離，接著水解纖維素而生成6碳糖。另外，木糖例如可以通過在本發(fā)明的細菌中具有從葡萄糖等6碳糖轉變?yōu)槟咎堑穆窂?，?碳糖轉變而供給。作為碳源，可以使用1種碳源，也可以組合使用2種或2種以上的碳源。作為氮源，具體而言可以列舉例如：硫酸銨、氯化銨、磷酸銨等銨鹽、胨、酵母提取物、肉提取物、大豆蛋白質分解物等有機氮源、氨、尿素。可以使用調節(jié)ph用的氨氣、氨水作為氮源。作為氮源，可以使用1種氮源，也可以組合使用2種或2種以上的氮源。作為磷酸源，具體而言可以列舉例如：磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀等磷酸鹽、焦磷酸等磷酸聚合物。作為磷酸源，可以使用1種磷酸源，也可以組合使用2種或2種以上的磷酸源。作為硫源，具體而言可以列舉例如：硫酸鹽、硫代硫酸鹽、亞硫酸鹽等無機硫化合物、半胱氨酸、胱氨酸、谷胱甘肽等含硫氨基酸。作為硫源，可以使用1種硫源，也可以組合使用2種或2種以上的硫源。作為其它各種有機成分、無機成分，具體而言可以列舉例如：氯化鈉、氯化鉀等無機鹽類；鐵、錳、鎂、鈣等微量金屬類；維生素b1、維生素b2、維生素b6、煙酸、煙酰胺、維生素b12等維生素類；氨基酸類；核酸類；含有上述成分的胨、酪蛋白氨基酸、酵母提取物、大豆蛋白質分解物等有機成分。作為其它各種有機成分、無機成分，可以使用1種成分，也可以組合使用2種或2種以上的成分。另外，在使用繁殖需要營養(yǎng)素例如氨基酸的營養(yǎng)缺陷性突變株的情況下，優(yōu)選在培養(yǎng)基中補充需要的營養(yǎng)素。另外，優(yōu)選限制培養(yǎng)基中的生物素量、在培養(yǎng)基中添加表面活性劑或青霉素。培養(yǎng)條件只要能夠繁殖本發(fā)明的細菌并生產目標l-氨基酸即可，沒有特別限制。培養(yǎng)例如可以在用于棒桿菌型細菌等細菌的培養(yǎng)的通常條件下進行。培養(yǎng)條件可以根據(jù)使用的棒桿菌型細菌的種類等各條件而適當設定。培養(yǎng)可以使用液體培養(yǎng)基來進行。在培養(yǎng)時，例如，可以將用瓊脂培養(yǎng)基等固體培養(yǎng)基培養(yǎng)本發(fā)明的細菌而得到的菌直接接種于液體培養(yǎng)基，也可以將用液體培養(yǎng)基種子培養(yǎng)(seedculture)本發(fā)明的細菌而得到的菌接種于正式培養(yǎng)用的液體培養(yǎng)基。即，培養(yǎng)可以分為種子培養(yǎng)和正式培養(yǎng)來進行。在這種情況下，種子培養(yǎng)和正式培養(yǎng)的培養(yǎng)條件可以相同，也可以不同。培養(yǎng)開始時培養(yǎng)基中含有的本發(fā)明的細菌的量沒有特別限制。正式培養(yǎng)例如可以在正式培養(yǎng)的培養(yǎng)基中移植1～50％(v/v)的種子培養(yǎng)液來進行。培養(yǎng)可以通過分批培養(yǎng)(batchculture)、流加培養(yǎng)(fed-batchculture)、連續(xù)培養(yǎng)(continuousculture)或它們的組合來實施。需要說明的是，也將培養(yǎng)開始時的培養(yǎng)基稱為“初始培養(yǎng)基”。另外，將在流加培養(yǎng)或連續(xù)培養(yǎng)中供給于培養(yǎng)體系(發(fā)酵槽)的培養(yǎng)基稱為“流加培養(yǎng)基”。另外，將在流加培養(yǎng)或連續(xù)培養(yǎng)中向培養(yǎng)體系供給流加培養(yǎng)基稱為“流加”。需要說明的是，在培養(yǎng)分為種子培養(yǎng)和正式培養(yǎng)的情況下，例如可以一起以分批培養(yǎng)的方式進行種子培養(yǎng)和正式培養(yǎng)。另外，例如可以以分批培養(yǎng)進行種子培養(yǎng)，以流加培養(yǎng)或連續(xù)培養(yǎng)進行正式培養(yǎng)。培養(yǎng)例如可以在好氧條件下進行。好氧條件是指液體培養(yǎng)基中的溶解氧濃度為基于氧膜電極的檢出界限的0.33ppm以上，或可以優(yōu)選指液體培養(yǎng)基中的溶解氧濃度為1.5ppm以上。氧濃度例如可以控制為飽和氧濃度的5～50％，優(yōu)選控制為10％左右。好氧條件下的培養(yǎng)具體而言可以通過通氣培養(yǎng)、振蕩培養(yǎng)、攪拌培養(yǎng)或它們的組合來進行。培養(yǎng)基的ph可以為例如ph3～10，優(yōu)選為ph4.0～9.5。在培養(yǎng)中，可以根據(jù)需要調節(jié)培養(yǎng)基的ph。培養(yǎng)基的ph可以使用氨氣、氨水、碳酸鈉、碳酸氫鈉、碳酸鉀、碳酸氫鉀、碳酸鎂、氫氧化鈉、氫氧化鈣、氫氧化鎂等各種堿性或酸性物質來調節(jié)。培養(yǎng)溫度例如可以為20～40℃，優(yōu)選為25℃～37℃。培養(yǎng)期間例如為10小時～120小時。培養(yǎng)例如可以持續(xù)至培養(yǎng)基中的碳源消耗為止，或持續(xù)至本發(fā)明的細菌的活性消失為止。通過在這樣的條件下培養(yǎng)本發(fā)明的細菌，可將l-氨基酸積蓄于培養(yǎng)基中。另外，在制造l-谷氨酸的情況下，可以使用調整為析出l-谷氨酸的條件的液體培養(yǎng)基，一邊使l-谷氨酸在培養(yǎng)基中析出，一邊進行培養(yǎng)。作為析出l-谷氨酸的條件，可以列舉例如：ph5.0～4.0的條件，優(yōu)選為ph4.5～4.0的條件，進一步優(yōu)選為ph4.3～4.0的條件，特別優(yōu)選為ph4.0的條件(歐洲專利申請公開第1078989號說明書)。l-氨基酸的生成可以通過化合物的檢測或鑒定所使用的公知方法來確認。作為這樣的方法，可以列舉例如：hplc、lc/ms、gc/ms、nmr。這些方法可以單獨使用，或者適當組合使用。從發(fā)酵液中回收l-氨基酸可以通過化合物的分離純化所使用的公知方法來進行。作為這樣的方法，可以列舉例如：離子交換樹脂法(nagai,h.etal.,separationscienceandtechnology,39(16),3691-3710)、沉淀法、膜分離法(日本特開平9-164323號、日本特開平9-173792號)、結晶法(wo2008/078448、wo2008/078646)。這些方法可以單獨使用，或者適當組合使用。需要說明的是，在l-氨基酸積蓄于菌體內的情況下，例如，可以用超音波等對菌體進行破碎，利用離子交換樹脂法等從通過離心分離除去菌體而得到的上清液中回收l-氨基酸。回收的l-氨基酸可以是單體、其鹽或它們的混合物。作為鹽，可以列舉例如：硫酸鹽、鹽酸鹽、碳酸鹽、銨鹽、鈉鹽、鉀鹽。在制造l-谷氨酸時，回收的l-谷氨酸具體而言可以是例如單體的l-谷氨酸、l-谷氨酸鈉(monosodiuml-glutamate；msg)、l-谷氨酸銨(monoammoniuml-glutamate)、或它們的混合物。例如，通過加入酸使發(fā)酵液中的l-谷氨酸銨結晶，并向結晶添加等摩爾的氫氧化鈉，可以得到l-谷氨酸鈉(msg)。需要說明的是，可以在晶析前后加入活性炭來脫色(參照谷氨酸鈉的工業(yè)結晶日本海水學會志56卷5號川喜田哲哉)。l-谷氨酸鈉結晶例如可以作為鮮味調料使用。l-谷氨酸鈉結晶也可以與同樣具有鮮味的鳥苷酸鈉(5’-gmp二鈉鹽)、肌苷酸鈉(5’-imp二鈉鹽)等核酸混合而作為調料使用。另外，在l-氨基酸析出于培養(yǎng)基中的情況下，可以通過離心分離或過濾等來回收。另外，析出于培養(yǎng)基中的l-氨基酸也可以在將溶解于培養(yǎng)基中的l-氨基酸結晶后一起進行分離。需要說明的是，回收的l-氨基酸除了l-氨基酸以外還含有細菌菌體、培養(yǎng)基成分、水分及細菌的代謝副產物等成分?？梢詫-氨基酸純化至希望的程度。回收的l-氨基酸的純度例可以為50％(w/w)以上，優(yōu)選為85％(w/w)以上，特別優(yōu)選為95％(w/w)以上(jp1214636b,usp5,431,933,usp4,956,471,usp4,777,051,usp4,946,654,usp5,840,358,usp6,238,714,us2005/0025878)。實施例以下，通過實施例進一步具體地對本發(fā)明進行說明，但本發(fā)明并不限于這些例子。實施例：使用了kgtp基因表達增強株的谷氨酸生產培養(yǎng)在本實施例中，使用導入了源自大腸桿菌的kgtp基因的谷氨酸棒狀桿菌(c.glutamicum)的谷氨酸生產株來進行谷氨酸生產，對kgtp基因表達增強對谷氨酸生產造成的影響進行了評價。kgtp基因是編碼α-酮戊二酸(α-kg)攝入載體的基因。(1)材料本實施例中使用的材料如下所述。表1使用的引物引物序列號核苷酸序列(5’→3’)11ccaagcttgcatgcctgcagaggaggattataatggctgaaagtactgtaac22cggtacccggggatccctaaagacgcatccccttcc33gaattcgagctcggtacccg44actggccgtcgttttacaac55aaaacgacggccagtacatcacaacagttcgctttg66accgagctcgaattcccgttttgaaaaagtatgttg715ctattctagaagcacaggaccgtttgccattgatattccccta816ctagtctagacggggtgctacgcgattaaaacatcacaacag＜使用的質粒＞pvk9pvk9-kgtppvk9-bl_xfppvk9-kgtp-bl_xfp＜使用的菌株＞谷氨酸棒狀桿菌2256δsucaδldhayggb*谷氨酸棒狀桿菌2256δsucaδldhayggb*/pvk9谷氨酸棒狀桿菌2256δsucaδldhayggb*/pvk9-kgtp谷氨酸棒狀桿菌2256δsucaδldhayggb*/pvk9-bl_xfp谷氨酸棒狀桿菌2256δsucaδldhayggb*/pvk9-kgtp-bl_xfp(2)質粒和菌株的構建＜pvk9-kgtp的構建＞以大腸桿菌k-12mg1655(atcc47076)的基因組dna為模板進行使用引物1和2的pcr，將包含源自大腸桿菌的kgtp基因(genbank：u00096.3kgtp-orf(1299bp))的dna片段進行了擴增。使用in-fusion(takarainc.)將得到的dna片段與用bamhi和psti切斷的pvk9(us2006-0141588)連接，由此構建了kgtp基因表達質粒pvk9-kgtp。將大腸桿菌k-12mg1655的kgtp基因的核苷酸序列及編碼該基因的kgtp蛋白質的氨基酸序列分別示于序列號7和8。＜pvk9-bl_xfp的構建＞以長雙歧桿菌(bifidobacteriumlongum)jcm1217(atcc15707)的基因組dna為模板進行使用引物7和8的pcr，將包含源自長雙歧桿菌jcm1217的xfp基因(orf編號bl0959)的dna片段進行了擴增。用xbai將得到的dna片段切斷，使用t4dna連接酶連接于pvk9的xbai位點，由此構建了xfp基因表達質粒pvk9-bl_xfp。xfp基因是編碼磷酸轉酮酶的基因。將長雙歧桿菌jcm1217的xfp基因的核苷酸序列及編碼該基因的xfp蛋白質的氨基酸序列分別示于序列號9和10。＜pvk9-kgtp-bl_xfp的構建＞以上述構建的質粒pvk9-kgtp為模板進行使用引物3和4的pcr，將包含載體和kgtp基因的dna片段進行了擴增。另外，以上述構建的質粒pvk9-bl_xfp為模板進行使用引物5和6的pcr，將包含xfp基因的dna片段進行了擴增。使用in-fusion(takarainc.)將得到的2個dna片段進行連接，由此構建了kgtp基因和xfp基因共表達質粒pvk9-kgtp-bl_xfp。將各質粒導入c.glutamicum2256δsucaδldhayggb*株(wo2014/185430)，由此構建了kgtp和/或xfp表達增強株。2256δsucaδldhayggb*株是由c.glutamicum2256株(atcc13869)誘導得到的谷氨酸生產株，缺失ldha基因和suca基因，在yggb基因中有is突變(v419::is)。將該突變型yggb基因(v419::is)的核苷酸序列及編碼該基因的突變型yggb蛋白質(v419::is)的氨基酸序列分別示于序列號13和14。(3)谷氨酸生產培養(yǎng)使用各菌株進行了谷氨酸生產培養(yǎng)。將使用的培養(yǎng)基的組成示于表2。表2使用的培養(yǎng)基制作用koh調節(jié)為ph8.0的上述組成的培養(yǎng)基，利用高壓滅菌器(115℃、15分鐘)進行滅菌。在滅菌后向培養(yǎng)基添加碳酸鈣，使其為50g/l，進行培養(yǎng)。*mameno是大豆蛋白水解物。(3-1)培養(yǎng)1：kgtp單獨強化造成的影響的評價培養(yǎng)(預培養(yǎng)和正式培養(yǎng))如下所述來進行：將上述培養(yǎng)基(含有50g/l碳酸鈣)5ml裝入粗試驗管，用31.5℃的箱式振蕩器(boxshaker)進行振蕩。最初使用培養(yǎng)基1培養(yǎng)上述菌株24小時作為預培養(yǎng)。接著，將得到的預培養(yǎng)液0.5ml接種至培養(yǎng)基2進行正式培養(yǎng)。在接種起23小時后進行取樣。使用biotechanalyzeras-310(sakurasi)對殘留葡萄糖和谷氨酸進行了定量。將結果示于表3。對于對照株(2256δsucaδldhayggb*/pvk9)而言，確認了產生α-kg副產物。另一方面，對于kgtp強化株(2256δsucaδldhayggb*/pvk9-kgtp)而言，與對照株相比，可以確認到產生α-kg副產物量的減少和消耗單位糖的谷氨酸積蓄(谷氨酸收率)的提高。因此，可以認為kgtp是對于谷氨酸生產有效的因子。表3kgtp單獨強化造成的影響的評價(3-2)培養(yǎng)2：xfp強化株中kgtp強化造成的影響的評價培養(yǎng)(預培養(yǎng)和正式培養(yǎng))如下所述來進行：將上述培養(yǎng)基(含有50g/l碳酸鈣)5ml裝入粗試驗管，用31.5℃的箱式振蕩器(boxshaker)進行振蕩。最初使用培養(yǎng)基1培養(yǎng)上述菌株24小時作為預培養(yǎng)。接著，將得到的預培養(yǎng)液0.5ml接種至培養(yǎng)基1進行正式培養(yǎng)。在接種起16小時后進行取樣。使用biotechanalyzeras-310(sakurasi)對殘留葡萄糖和谷氨酸進行了定量。將結果示于表4。對于xfp強化株(2256δsucaδldhayggb*/pvk9-bl_xfp)而言，與對照株(2256δsucaδldhayggb*/pvk9)相比，確認了產生α-kg副產物量的增加。另一方面，對于kgtp和xfp雙基因強化株(2256δsucaδldhayggb*/pvk9-kgtp-bl_xfp)而言，與xfp強化株相比，可以確認產生α-kg副產物量的減少和消耗單位糖的谷氨酸積蓄(谷氨酸收率)的提高。因此，可以認為即使在xfp強化時，kgtp也是對于谷氨酸生產有效的因子。表4xfp強化株中kgtp強化造成的影響的評價〔序列表的說明〕序列號1～6：引物序列號7：大腸桿菌k-12mg1655的kgtp基因的核苷酸序列序列號8：大腸桿菌k-12mg1655的kgtp蛋白質的氨基酸序列序列號9：長雙歧桿菌jcm1217的xfp基因的核苷酸序列序列號10：長雙歧桿菌jcm1217的xfp蛋白質的氨基酸序列序列號11：谷氨酸棒桿菌2256(atcc13869)的yggb基因的核苷酸序列序列號12：谷氨酸棒桿菌2256(atcc13869)的yggb蛋白質的氨基酸序列序列號13：源自谷氨酸棒桿菌2256(atcc13869)的突變型yggb基因(v419::is)的核苷酸序列序列號14：源自谷氨酸棒桿菌2256(atcc13869)的突變型yggb蛋白質(v419::is)的氨基酸序列序列號15、16：引物序列表<110>味之素株式會社(ajinomotoco.,inc.)<120>谷氨酸類l-氨基酸的制造方法<130>d784-16284<150>jp2015-215052<151>2015-10-30<160>16<170>patentinversion3.5<210>1<211>52<212>dna<213>人工序列<220><223>引物<400>1ccaagcttgcatgcctgcagaggaggattataatggctgaaagtactgtaac52<210>2<211>36<212>dna<213>人工序列<220><223>引物<400>2cggtacccggggatccctaaagacgcatccccttcc36<210>3<211>20<212>dna<213>人工序列<220><223>引物<400>3gaattcgagctcggtacccg20<210>4<211>20<212>dna<213>人工序列<220><223>引物<400>4actggccgtcgttttacaac20<210>5<211>36<212>dna<213>人工序列<220><223>引物<400>5aaaacgacggccagtacatcacaacagttcgctttg36<210>6<211>36<212>dna<213>人工序列<220><223>引物<400>6accgagctcgaattcccgttttgaaaaagtatgttg36<210>7<211>1299<212>dna<213>大腸埃希氏菌<400>7atggctgaaagtactgtaacggcagacagcaaactgacaagtagtgatactcgtcgccgc60atttgggcgattgtgggggcctcttcaggtaatctggtcgagtggttcgatttctatgtc120tactcgttctgttcactctactttgcccacatcttcttcccttccgggaacacgacgact180caactactacaaacagcaggtgtttttgctgcgggattcctgatgcgcccaataggcggt240tggctatttggccgcatagccgataaacatggtcgcaaaaaatcgatgctgttatcggtg300tgtatgatgtgtttcggatcgctggttatcgcctgcctcccaggttatgaaactataggt360acgtgggctccggcattattgcttctcgctcgtttatttcagggattatctgttggcgga420gaatatggcaccagcgccacctatatgagtgaagttgccgttgaagggcgcaaaggtttt480tacgcatcatttcagtatgtgacgttgatcggcggacaactgctagccctactggttgtc540gtggttttacaacacaccatggaagacgctgcactcagagagtggggatggcgtattcct600ttcgcgttaggagctgtgttagctgttgtggcgttgtggttacgtcgtcagttagatgaa660acttcgcaacaagaaacgcgcgctttaaaagaagctggatctctgaaaggattatggcgc720aatcgccgtgcattcatcatggttctcggttttaccgctgcgggctccctttgtttctat780accttcactacttatatgcagaagtatctggtaaatactgcgggaatgcatgccaacgtg840gcgagtggcattatgactgccgcattgtttgtattcatgcttattcaaccactcattggc900gcgctgtcggataagattggtcgccgtacctcaatgttatgtttcggttcgctggcagcc960atttttaccgttcctattctctcagcattgcaaaacgtttcctcgccttatgccgctttt1020ggtctggtgatgtgtgccctgctgatagtgagtttttatacatcaatcagtggaatactg1080aaggctgagatgttcccggcacaggttcgcgcattaggcgttggtctgtcatatgcggtc1140gctaatgctatatttggtggttcggcggagtacgtagcgttgtcgctgaaatcaatagga1200atggaaacagccttcttctggtatgtgaccttgatggccgtggtggcgtttctggtttct1260ttgatgctacatcgcaaagggaaggggatgcgtctttag1299<210>8<211>432<212>prt<213>大腸埃希氏菌<400>8metalagluserthrvalthralaaspserlysleuthrserserasp151015thrargargargiletrpalailevalglyalaserserglyasnleu202530valglutrppheaspphetyrvaltyrserphecysserleutyrphe354045alahisilephepheproserglyasnthrthrthrglnleuleugln505560thralaglyvalphealaalaglypheleumetargproileglygly65707580trpleupheglyargilealaasplyshisglyarglyslyssermet859095leuleuservalcysmetmetcyspheglyserleuvalilealacys100105110leuproglytyrgluthrileglythrtrpala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