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      一種DNA?Marker及其制備工藝的制作方法

      文檔序號:12108772閱讀:來源:國知局

      技術(shù)特征:

      1.一種DL2000 DNA Marker,包括: 100bp,250bp,500bp,750bp,1000bp,1500bp,2000bp等7個不同大小DNA片段,在瓊脂糖凝膠電泳及染色后,各DNA條帶清晰明亮,可指示DNA片段分子量大小。

      2.據(jù)權(quán)利要求書1所述的DNA Marker的制備材料,其特征在于: PCR反應(yīng)的模板、擴增所用引物、以載體SEQ No.1為PCR反應(yīng)的模板。

      3.擴增所用上游引物:all-F: 5’-ACAATTCCCCTATAGTGAGTCGTATT-3’

      擴增所用下游引物7條:

      2k-R: 5’-CGAAGACCATTCATGTTGTTGCT-3’

      1.5k-R: 5’-TCACTGCCCGCTTTCCAGT-3’

      1k-R:5’-GCGCCGAGACAGAACTTAATGG-3’

      750b-R:5’-CACCGCCGCTTTACAGG-3’

      500b-R:5’-CTGGCCTGGTTCACCACGCG-3’

      250b-R:5’-AATGGTGCATGCAAGGAGATG-3’

      100b-R:5’-CCTGTGGCGCCGGTGATGC-3’。

      4.據(jù)權(quán)利要求書1所述的DNA Marker的制備工藝:其特征在于PCR反應(yīng)體系及擴增條件、擴增產(chǎn)物的配比。

      5.其制備工藝如下:

      PCR反應(yīng)體系及擴增條件:采用50μl的PCR反應(yīng)體系,包括:ddH2O 39μl、10×PCR Buffer 5μl、10mM的dNTPs 1μl、10μM的引物-F 1μl、10μM的引物-R 1μl、DNA模板1μl、2U/μl的Taq DNA聚合酶1μl。

      6.擴增條件為:94℃預(yù)變性5min、94℃變性30s、退火溫度49-54℃30s、72℃延伸1-3min、共30-35個循環(huán)、72℃再延伸10min,用瓊脂糖凝膠電泳檢測擴增效果,用超微量核酸蛋白濃度測定儀測定核酸含量。

      7. 擴增產(chǎn)物的配比優(yōu)化:將低分子量的DNA片段(100bp,250bp)用DNA快速純化試劑盒進行純化后進行含量測定;1000bp的DNA片段按終濃度約為20μg/μl,其余各DNA片段按終濃度約為10μg/μl進行配制,按2.5% 的比例加入Loading Buffer 和7.5%的甘油,混勻后用瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA Marker效果,根據(jù)瓊脂糖凝膠圖像微調(diào)各片段的濃度,得到效果滿意、條帶清晰、1000bp高亮的DL2000 DNA Marker。

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