技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及重組Enbrel?Fab片段在昆蟲細(xì)胞表達(dá)系統(tǒng)中的制備方法，包括：（a）將N端分別帶有信號(hào)肽的Fab片段的輕鏈與重鏈的氨基酸序列的基因克隆于帶有雙啟動(dòng)子的桿狀病毒表達(dá)載體內(nèi)構(gòu)建重組表達(dá)載體；（b）將所得的重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)座至感受態(tài)細(xì)胞中，篩選重組菌斑，提取重組質(zhì)粒，并將其轉(zhuǎn)染至昆蟲細(xì)胞中，得到重組桿狀病毒后進(jìn)一步擴(kuò)增病毒，并使用病毒感染放大培養(yǎng)的昆蟲細(xì)胞以表達(dá)Fab蛋白，離心收集含F(xiàn)ab蛋白的上清產(chǎn)物；（c）將所得昆蟲細(xì)胞表達(dá)上清首先使用膜包進(jìn)行超濾濃縮和置換緩沖溶液，然后色譜柱純化，即可得到全人源單克隆抗體恩利的Fab片段。

技術(shù)研發(fā)人員：王濤;汪俊;陳春麟;周南梅
受保護(hù)的技術(shù)使用者：上海美迪西生物醫(yī)藥股份有限公司
文檔號(hào)碼：201611045267
技術(shù)研發(fā)日：2016.11.24
技術(shù)公布日：2017.05.31