1.一種乙型腦炎活疫苗的抗原,其特征在于,其制備方法包括如下步驟:
1)在Vero細(xì)胞中接種已適應(yīng)Vero細(xì)胞的乙型腦炎病毒減毒株0.02~0.2MOI(PFU/細(xì)胞數(shù)),進(jìn)行吸附;
2)添加pH7.6~7.8的病毒培養(yǎng)維持液進(jìn)行培養(yǎng);
所述病毒培養(yǎng)維持液為含有15~20mL/L的小牛血清、6~15g/L精氨酸鹽酸鹽、5~10g/L PEG2000和2.3~12g/L4-羥乙基哌嗪乙磺酸,純水配置的DMEM溶液;
3)待Vero細(xì)胞出現(xiàn)60~80%病變,凍融收獲病毒液,澄清過濾去掉細(xì)胞碎片,收集上清病毒液,即得。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗原,其特征在于,所述病毒培養(yǎng)維持液為含有20mL/L的小牛血清、10g/L精氨酸鹽酸鹽、5g/L PEG2000和5g/L 4-羥乙基哌嗪乙磺酸,純水配置的DMEM溶液。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的抗原,其特征在于,步驟1)中,在37℃、12~20轉(zhuǎn)/小時(shí)的條件下,吸附1h。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的抗原,其特征在于,步驟2)中,在35℃、12~20轉(zhuǎn)/小時(shí)的條件下,培養(yǎng)3~4天。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的抗原,其特征在于,步驟1)中,用于接種減毒株的Vero細(xì)胞的制備方法為:采用含體積百分比8%小牛血清的DMEM細(xì)胞培養(yǎng)液轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)Vero細(xì)胞,待Vero細(xì)胞形成單層,棄掉細(xì)胞培養(yǎng)液,以pH7.4的PBS清洗3次,棄掉洗液,即得。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的抗原,其特征在于,步驟1)中,所述已適應(yīng)Vero細(xì)胞的乙型腦炎病毒減毒株為經(jīng)Vero細(xì)胞傳代培養(yǎng)后,毒價(jià)大于7LgPFU/mL,且傳代次數(shù)較少的減毒株。
7.權(quán)利要求1~6任一項(xiàng)所述的抗原在制備乙型腦炎疫苗中的應(yīng)用。
8.一種豬用乙型腦炎活疫苗,其特征在于,含有權(quán)利要求1~6任一項(xiàng)所述的抗原。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的疫苗,其特征在于,其由所述抗原與凍干保護(hù)劑混合后經(jīng)真空冷凍干燥制備。每頭份病毒含量不低于105.0PFU。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的疫苗,其特征在于,所述真空冷凍干燥的程序?yàn)椋侯A(yù)凍階段-40℃,疫苗達(dá)到最低溫度后維持時(shí)間2小時(shí);升華干燥階段疫苗最終溫度-20℃,達(dá)到疫苗最終溫度時(shí)運(yùn)行時(shí)間17小時(shí),凍干箱真空控制壓力為0.18mbar;解析干燥階段疫苗的最終溫度28℃,凍干箱真空壓力為0.005mbar,運(yùn)行時(shí)間8小時(shí)。