国产精品1024永久观看,大尺度欧美暖暖视频在线观看,亚洲宅男精品一区在线观看,欧美日韩一区二区三区视频,2021中文字幕在线观看

  • <option id="fbvk0"></option>
    1. <rt id="fbvk0"><tr id="fbvk0"></tr></rt>
      <center id="fbvk0"><optgroup id="fbvk0"></optgroup></center>
      <center id="fbvk0"></center>

      <li id="fbvk0"><abbr id="fbvk0"><dl id="fbvk0"></dl></abbr></li>

      一種多基因疊加共轉(zhuǎn)化提高油菜綜合抗逆性的方法與流程

      文檔序號(hào):12644827閱讀:來(lái)源:國(guó)知局

      技術(shù)特征:

      1.一種多基因疊加共轉(zhuǎn)化提高油菜綜合抗逆性的方法,其特征在于,包括如下步驟:

      (1)多基因植物表達(dá)載體的構(gòu)建,

      構(gòu)建pABA-oriT載體,該載體的T-DNA中的克隆基因表達(dá)盒包含依次串聯(lián)的5種抗逆功能基因和3種選擇標(biāo)記基因;

      所述5種抗逆功能基因包括:2個(gè)ABA合成相關(guān)基因NCED3、LOS5,1個(gè)ABA信號(hào)途徑相關(guān)基因ABAR,2個(gè)抗凍調(diào)節(jié)基因ICE1、CBF3;

      所述3種選擇標(biāo)記基因包括潮霉素抗性基因HYG、GUS和草銨膦抗性基因BAR;

      5種抗逆功能基因和3種選擇標(biāo)記基因在pABA-oriT載體T-DNA區(qū)的具體排列順序?yàn)椋篖B-HYG–GUS-BAR-ICE1-LOS5-CBF3-ABAR-NCED3-RB;

      (2)對(duì)步驟(1)中所構(gòu)建的重組表達(dá)載體的鑒定,確保5種功能基因共存于同一表達(dá)載體中;

      (3)對(duì)步驟(2)中鑒定正確的重組表達(dá)載體轉(zhuǎn)化農(nóng)桿菌,制備轉(zhuǎn)化液;

      (4)采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)的浸花法轉(zhuǎn)化油菜,轉(zhuǎn)化后,繼續(xù)培育至成熟,按單株收獲種子;

      (5)轉(zhuǎn)化體的篩選和鑒定,將步驟(4)中所收獲油菜種子播種,依次進(jìn)行Basta抗性、潮霉素抗性篩選,并對(duì)雙抗性植株進(jìn)行PCR鑒定;

      (6)轉(zhuǎn)化體自交獲得純合體,對(duì)步驟(5)中篩選、鑒定正確的轉(zhuǎn)化體繼續(xù)培養(yǎng),于花期時(shí)套袋,使其自交,收獲單株種子;

      對(duì)收獲的種子繼續(xù)種植,同步驟(5)操作,繼續(xù)進(jìn)行Basta抗性、潮霉素抗性、PCR鑒定,并對(duì)鑒定正確的轉(zhuǎn)化體繼續(xù)自交,并最終獲得轉(zhuǎn)化純合體,即為具有綜合抗逆特性的轉(zhuǎn)基因油菜。

      2.如權(quán)利要求1所述多基因疊加共轉(zhuǎn)化提高油菜綜合抗逆性的方法,其特征在于,步驟(2)中,重組表達(dá)載體鑒定時(shí),采用PCR鑒定法,PCR鑒定時(shí),引物序列設(shè)計(jì)如下:

      NCED –F:5' AACTTAGTGAGACCCTCCTCTGTT 3',

      NCED-R:5' TAGTGTTGGATTCTTTGGCTTTGG 3';

      ABAR-F:5' AACTTAGTGAGACCCTCCTCTGTT 3',

      ABAR-R:5’ ACTTTAATCGCCAATTCCTCGACG 3’;

      CBF–F: 5' AACTTAGTGAGACCCTCCTCTGTT 3',

      CBF-R: 5’ TTGAAATGTTCCGAGCCAAATCCT 3’;

      LOS5-F:5’ ATAGATACGCTGACACGCCAAGCC 3’,

      LOS5-R:5’ CTATAAGGTCACTGGTGGCCGAAC 3’;

      ICE1-F:5’ ATAGATACGCTGACACGCCAAGCC 3’,

      ICE1-R:5’ CTCTTCCCTTTCTCCACCACCACC 3’。

      3.如權(quán)利要求1所述多基因疊加共轉(zhuǎn)化提高油菜綜合抗逆性的方法,其特征在于,步驟(4)中,轉(zhuǎn)化油菜時(shí),花序在轉(zhuǎn)化液中每次浸泡90~120秒;轉(zhuǎn)化操作時(shí),隔天轉(zhuǎn)化1次,連續(xù)轉(zhuǎn)化3次。

      4.如權(quán)利要求1所述多基因疊加共轉(zhuǎn)化提高油菜綜合抗逆性的方法,其特征在于,步驟(6)中,對(duì)轉(zhuǎn)化體的鑒定需經(jīng)不少于4代的連續(xù)自交鑒定。

      當(dāng)前第2頁(yè)1 2 3 
      網(wǎng)友詢(xún)問(wèn)留言 已有0條留言
      • 還沒(méi)有人留言評(píng)論。精彩留言會(huì)獲得點(diǎn)贊!
      1