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      一種采用ITS序列識別黃檀屬和紫檀屬木種的方法與流程

      文檔序號:11145861閱讀:來源:國知局

      技術(shù)特征:

      1.一種采用ITS序列識別黃檀屬和紫檀屬木種的方法,其特征是包括以下步驟:

      (1)選取黃檀屬和紫檀屬木種,采用核酸抽提試劑盒抽提,獲得黃檀屬和紫檀屬木種的DNA;

      (2)以步驟(1)獲得的DNA為模板,依次加入引物ITS4和ITS5進行PCR擴增,擴增反應(yīng)程序為:94℃變性3min;94℃0.25min,52℃0.5min,72℃0.5min,30個循環(huán);72℃10min,采用PCR回收試劑盒純化,得到PCR產(chǎn)物,將PCR產(chǎn)物進行測序,獲得ITS序列,其大小為323bp;

      (3)將步驟(2)得到的ITS序列,進行拼接和裁剪后比對后發(fā)現(xiàn)變異位點,從變異位點中篩選出能鑒別黃檀屬和紫檀屬的特征位點;

      (4)采用MEGA6.0軟件構(gòu)建系統(tǒng)進化樹,結(jié)果表明,ITS的序列信息能分辨出黃檀屬和紫檀屬的木種。

      2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的采用ITS序列識別黃檀屬和紫檀屬木種的方法,其特征是:步驟(1)中所述的黃檀屬和紫檀屬木種包括賽州黃檀Dalbergia cearensis、交趾黃檀Dalbergia cochinchinensis、刀狀黑黃檀Dalbergia cultrata、闊葉黃檀Dalbergia latifolia、東非黑黃檀Dalbergia melanoxylon、降香黃檀Dalbergia odorifera、奧氏黃檀Dalbergia oliveri、亞馬孫黃檀Dalbergia spruceana、安達曼紫檀Pterocarpus dalbergioides、刺猬紫檀Pterocarpus erinaceus、印度紫檀Pterocarpus indicus、大果紫檀Pterocarpus macrocarpus、檀香紫檀Pterocarpus santalinus和染料紫檀Pterocarpus tinctorius。

      3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的采用ITS序列識別黃檀屬和紫檀屬木種的方法,其特征是:步驟(2)中PCR擴增時的反應(yīng)體系包括:引物ITS4 2μL、引物ITS52μL、濃度為10mM的dNTP 5μL、10×buffer 5μL、ddH2O 35μL,濃度為5U/μL的Ex Taq DNA聚合酶0.25μL。

      4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的采用ITS序列識別黃檀屬和紫檀屬木種的方法,其特征是:步驟(3)中采用MUSCLE進行拼接,采用Bioedit v.7.0.9進行裁剪。

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