1.天然載脂蛋白II/I,其特征在于:氨基酸序列如SEQ ID:2所示。
2.如權(quán)利要求1所述的天然載脂蛋白II/I,其特征在于:編碼氨基酸序列的基因序列如SEQ ID:1所示。
3.天然載脂蛋白II/I或重組載脂蛋白II/I活性片段,其特征在于:包含SEQ ID:1或SEQ ID:2所示的序列,優(yōu)選:Met-載脂蛋白成熟肽氨基酸序列、Met-組氨酸標(biāo)簽-載脂蛋白成熟肽氨基酸序列、Met-載脂蛋白成熟肽-His6標(biāo)簽氨基酸序列、Met-His6標(biāo)簽-凝血酶酶切位點(diǎn)-載脂蛋白I成熟肽氨基酸序列。
4.如權(quán)利要求1或2所述的天然載脂蛋白II/I的制備方法,其特征在于:利用鱗翅目天蠶蛾科昆蟲的血淋巴,以昆蟲血液或血細(xì)胞裂解物和淋巴液的混合物或/和昆蟲壓榨或勻漿的體液作為分離純化的原料液;該原料液經(jīng)過單獨(dú)的離子交換層析或疏水層析或親和層析或凝膠過濾或鹽析或超濾分離純化載脂蛋白II/I活性組分;再通過離子交換層析、疏水層析、親和層析、凝膠過濾、鹽析或超濾分離純化方法中的兩個(gè)或多個(gè)的組合以及其分離純化方法順序的重排組合,分離純化獲得載脂蛋白II/I的純度可以到達(dá)電泳純乃至HPLC純,所述的離子交換層析、疏水層析、親和層析、凝膠過濾、鹽析或超濾方法中(1)操作溫度在0℃-45℃,優(yōu)選0℃-10℃;(2)溶液的酸堿度在pH2-pH10,優(yōu)選pH4-pH9;(3)調(diào)節(jié)溶液酸堿度的試劑為是常規(guī)、通用的酸、堿、酸溶液或堿溶液,酸或酸溶液優(yōu)選HCl、HAc、磷酸、檸檬酸、硫酸、硼酸或它們的溶液,堿或堿溶液優(yōu)選NaOH、KOH、Tris、檸檬酸鈉或鉀鹽、磷酸鈉或鉀鹽、硼砂或它們的溶液;(4)緩沖液是常規(guī)、通用緩沖離子對(duì)緩沖液,優(yōu)選檸檬酸根緩沖離子對(duì)、HCl-Tris緩沖離子對(duì)、檸檬酸根-磷酸根緩沖離子對(duì)、磷酸根緩沖離子對(duì)、醋酸根緩沖離子對(duì)、硼酸根緩沖離子對(duì)、硼酸-Tris緩沖離子對(duì)或上述各緩沖離子的組合;(5)溶液或緩沖液的離子強(qiáng)度在0.001mol/L-0.5mol/L,優(yōu)選0.01mol/L-0.1mol/L。
5.如權(quán)利要求4所述的制備方法,其特征在于,所述的鱗翅目天蠶蛾科昆蟲,選自柞蠶、蓖麻蠶、天蠶、印度柞蠶、琥珀蠶、美國(guó)柞蠶、樗蠶、大山蠶、美洲天蠶、樟蠶、楓蠶,所述的昆蟲為任何地域的天然或人工放養(yǎng)或人工飼養(yǎng)的昆蟲。
6.權(quán)利要求1或2所述的天然載脂蛋白II/I或權(quán)利要求3所述的載脂蛋白II/I活性片段的重組表達(dá)產(chǎn)物的基因表達(dá)方法,其特征在于,它包括(1)利用基因工程技術(shù)表達(dá)載脂蛋白II/I、載脂蛋白II/I活性片段(2)從上述表達(dá)體系中分離純化重組的載脂蛋白II/I活性片段,上述表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)過單獨(dú)的離子交換層析或疏水層析或親和層析或凝膠過濾或鹽析或超濾分離純化重組載脂蛋白II/I活性組分,上述表達(dá)產(chǎn)物通過離子交換層析或疏水層析或親和層析或凝膠過濾或鹽析或超濾分離純化方法中兩個(gè)或幾個(gè)分離純化方法的組合以及分離純化方法順序的重排組合獲得電泳純至HPLC純度的重組載脂蛋白II/I活性片段。
7.如權(quán)利要求6所述的基因表達(dá)方法,其特征在于,所述的基因表達(dá)體系包括(1)原核生物系統(tǒng)的表達(dá)載體,表達(dá)宿主細(xì)胞為大腸桿菌細(xì)胞或枯草桿菌細(xì)胞,(2)昆蟲細(xì)胞系統(tǒng)的表達(dá)載體,表達(dá)宿主細(xì)胞為昆蟲細(xì)胞,上述表達(dá)形式為細(xì)胞內(nèi)表達(dá)或分泌形式表達(dá),上述表達(dá)體系中的表達(dá)產(chǎn)物作為制備重組載脂蛋白II/I活性片段的來源。
8.權(quán)利要求1或2所述的天然載脂蛋白II/I或權(quán)利要求3所述的重組載脂蛋白II/I活性片段的抗體,其特征在于,以載脂蛋白II/I、重組載脂蛋白II/I活性片段作為抗原。
9.權(quán)利要求1或2所述的天然載脂蛋白II/I或權(quán)利要求3所述的重組載脂蛋白II/I活性片段的生物學(xué)功能,所述的功能為:(1)特異性識(shí)別Lys-肽聚糖、DAP-肽聚糖以及脂磷壁酸等多種微生物相關(guān)分子模式以及革蘭陽性菌和部分真菌、革蘭陰性菌等微生物,(2)抑制酚氧化酶原激活系統(tǒng)。
10.權(quán)利要求1或2所述的天然載脂蛋白II/I或權(quán)利要求3所述的重組載脂蛋白II/I活性片段的應(yīng)用,所述的應(yīng)用為(1)在微生物及其相關(guān)分子模式檢測(cè)中的應(yīng)用,(2)載脂蛋白II/I、重組載脂蛋白II/I活性片段的檢測(cè)與追蹤。
11.權(quán)利要求8所述的載脂蛋白II/I、重組載脂蛋白II/I活性片段作為抗原所產(chǎn)生抗體的應(yīng)用,所述的應(yīng)用為:(1)載脂蛋白II/I、重組載脂蛋白II/I活性片段的檢測(cè)與追蹤,(2)所述的抗體在特異性識(shí)別結(jié)合并屏蔽抗原中的應(yīng)用。