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      一種適配體篩選用多腔室微流控PCR芯片及其制造方法與應用與流程

      文檔序號:12696640閱讀:來源:國知局

      技術特征:

      1.一種適配體篩選用多腔室微流控PCR芯片,其特征在于,該多腔室微流控PCR芯片包括微流PCR反應片、溫度循環(huán)加熱板、玻璃基底、芯片夾具,所述PDMS反應片上設有反應液注入孔、Z型混合通道、流入微流通道、PCR反應池、流出微流通道、反應液流出孔,所述反應液注入孔、Z型混合單元、流入微流通道、PCR擴增室、流出微流通道、反應液流出孔依次聯(lián)通。

      2.根據(jù)權利要求1所述的適配體篩選用多腔室微流控PCR芯片,其特征在于,所述微流PCR反應片置于玻璃基底上,所述玻璃基底置于溫度循環(huán)加熱板上。

      3.根據(jù)權利要求1所述的適配體篩選用多腔室微流控PCR芯片,其特征在于,所述芯片夾具通過固定螺絲與溫度循環(huán)加熱板連接。

      4.根據(jù)權利要求1所述的適配體篩選用多腔室微流控PCR芯片,其特征在于,所述PCR反應池的數(shù)量為2~16個。

      5.權利要求1所述適配體篩選用多腔室微流控PCR芯片的制造方法,其特征在于,包括如下步驟:

      (1)利用打印機打印微流控PCR芯片的基體;

      (2)微流控PCR芯片的基體通過紫外曝光后將圖形轉移至涂有感光膠的鎘板上通過濕法刻蝕制備微流控通道模板;

      (3)將PDMS前聚體與固化劑按照質量比為5:1~20:1的比例混合均勻后,將其放入真空干燥器中,除氣泡,再澆到微流控通道模板上,經(jīng)固化后得到2~6mm厚的PDMS微流控通道;

      (4)用4~10mm打孔器在微流控通道模板上打孔,得到PCR反應池,反應池的直徑為4~10mm,再用等離子親水化處理,得到微流PCR反應片;

      (5)將玻璃片緊密貼合在微流控通道模板上,得到微流控PCR芯片。

      6.利用多腔室微流控PCR芯片適篩選配體的方法,其特征在于,包括如下步驟:

      (1)多腔室微流控PCR芯片準備:向多腔室微流控PCR芯片通入5~20mg/mL BSA和0.01~0.5mM隨機序列短鏈ssDNA,在25~40℃條件下封閉1~3h,之后用500μL 1×PBST溶液清洗通道,最后用高純氮氣吹干備用;

      (2)擴增樣品制備:將適配體篩選產(chǎn)物75μL與300μL2×SYBR Premix Ex TaqTM酶,12μL、20μM TAMRA標記的前向引物和12μL、20μM生物素化的后向引物及216μL超純水混合通過注射泵經(jīng)芯片在微流控通道內的Z型混合單元中混合后平均分配至2~16個PCR反應池,最后每個反應腔室中加入10~100μL的礦物油防止溶劑揮發(fā);

      (3)PCR擴增過程:將步驟(2)制備好的芯片放置于溫度循環(huán)平板加熱板上進行PCR擴增;擴增程序設置如下:95℃30s~150s,10~30輪循環(huán):95℃30s,60.5℃30s,72℃30s,使用小型熒光探頭直接置于反應腔室上方5~25mm采集反應腔室中的熒光信號。

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