技術(shù)特征：

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明提供了一種基因合成方法，所述方法包括：(1)將待合成基因序列分成55?100bp長(zhǎng)度的第一連續(xù)片段，將所述第一連續(xù)片段設(shè)計(jì)成正向引物；將與所述第一連續(xù)片段錯(cuò)開15?20bp長(zhǎng)度處的基因序列作為第二連續(xù)片段，在所述第二連續(xù)片段的反向互補(bǔ)序列上設(shè)計(jì)連續(xù)的反向引物；(2)將所述正向引物和反向引物混合，得到引物混合物；(3)將所述引物混合物煮沸，退火，加入T4DNA連接酶，將引物連成兩端帶長(zhǎng)粘性末端的雙鏈DNA基因；(4)將合成的雙鏈DNA基因連接到pUC57?GFP?Amp載體上，所述pUC57?GFP?Amp載體的序列如序列表1所示，轉(zhuǎn)化大腸桿菌細(xì)胞，反向篩選不發(fā)熒光的菌落，測(cè)序驗(yàn)證。本發(fā)明不依賴PCR擴(kuò)增，規(guī)避了PCR擴(kuò)增中繁瑣的實(shí)驗(yàn)步驟和PCR技術(shù)錯(cuò)誤率高等缺陷。

技術(shù)研發(fā)人員：沈鶴霄;華權(quán)高;楊明波
受保護(hù)的技術(shù)使用者：武漢金開瑞生物工程有限公司
技術(shù)研發(fā)日：2017.04.17
技術(shù)公布日：2017.09.22