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      一種細胞外囊泡長鏈RNA文庫構(gòu)建方法

      文檔序號:40282089發(fā)布日期:2024-12-11 13:22閱讀:來源:國知局

      技術(shù)特征:

      1.一種細胞外囊泡長鏈rna文庫的制備方法,其包括:

      2.如權(quán)利要求1所述的細胞外囊泡長鏈rna文庫的制備方法,其特征在于,所述細胞外囊泡rna為從細胞外囊泡中提取的rna;較佳地,所述細胞外囊泡來源于細胞、組織及體液;更佳地,所述細胞外囊泡來源于細胞上清液、血清、血漿、尿液、腦脊髓液、唾液、鼻分泌液、肺泡沖洗液、乳汁、滑液、精液、宮腔液、膽汁、淋巴液、糞便、脂肪組織、腦組織、羊水、胚胎培養(yǎng)液。

      3.如權(quán)利要求1所述的細胞外囊泡長鏈rna文庫的制備方法,其特征在于,所述步驟i)還包括:去除細胞外囊泡rna中的dna;

      4.如權(quán)利要求1所述的細胞外囊泡長鏈rna文庫的制備方法,其特征在于,所述步驟i)中,所述rna片段化包括:通過化學法和/或酶消化法進行rna打斷處理;較佳地,rna片段化后,rna片段大小為80~300nt;更佳地,rna在含鎂離子的反轉(zhuǎn)錄緩沖液中片段化。

      5.如權(quán)利要求1所述的細胞外囊泡長鏈rna文庫的制備方法,其特征在于,所述步驟ii)包括:使用隨機引物反轉(zhuǎn)錄并添加3’接頭序列,以及模板轉(zhuǎn)換并添加5’接頭序列;

      6.如權(quán)利要求1所述的細胞外囊泡長鏈rna文庫的制備方法,其特征在于,所述步驟iv)中,所述sgrna包括選自如seq?id?no:30~108所示核苷酸序列的sgrna。

      7.如權(quán)利要求1所述的細胞外囊泡長鏈rna文庫的制備方法,其特征在于,所述步驟iii)和所述步驟v)中所述的純化方法為利用磁珠進行純化;較佳地,利用磁珠純化后獲得的cdna片段大小為200-500bp。

      8.如權(quán)利要求1所述的細胞外囊泡長鏈rna文庫的制備方法,其特征在于,所述步驟iii)和所述步驟v)中所述的擴增為pcr擴增;較佳地,所述步驟iii)中pcr擴增為低循環(huán)數(shù)(優(yōu)選5~7個循環(huán))的pcr擴增,所述步驟v)中pcr擴增為高循環(huán)數(shù)(優(yōu)選7~10個循環(huán))的pcr擴增。

      9.如權(quán)利要求1所述的細胞外囊泡長鏈rna文庫的制備方法,其特征在于,步驟iii)中,進行第一次擴增時,以seq?id?no:5和6、或seq?id?no:7和8所示的引物進行擴增,和/或,步驟v)中,進行第二次擴增時,以seq?id?no:7和8、或seq?id?no:27和28所示的引物進行擴增。

      10.如權(quán)利要求1所述的細胞外囊泡長鏈rna文庫的制備方法,其特征在于,所述制備方法還包括:對獲得的細胞外囊泡長鏈rna文庫進行質(zhì)檢,和/或測序;

      11.一種細胞外囊泡長鏈rna文庫,其通過如權(quán)利要求1~10任一項所述的細胞外囊泡長鏈rna文庫的制備方法制備獲得。

      12.權(quán)利要求1~10任一項所述的細胞外囊泡長鏈rna文庫的制備方法的應用,包括用于:

      13.一種從細胞外囊泡rna的cdna產(chǎn)物中去除核糖體rna的方法,其包括:利用靶向核糖體rna的sgrna、通過crispr/cas方法去除核糖體rna;較佳地,所述sgrna包括選自如seq?idno:30~108所示核苷酸序列的sgrna。


      技術(shù)總結(jié)
      本發(fā)明提供了一種細胞外囊泡長鏈RNA文庫的制備方法,該方法以細胞外囊泡RNA為模板,使用隨機引物反轉(zhuǎn)錄,通過“預擴增?純化?再擴增”的方法,結(jié)合基于CRISPR/Cas方法的sgRNA處理,獲得細胞外囊泡長鏈RNA文庫。本發(fā)明也提供了制備獲得的細胞外囊泡長鏈RNA文庫及其應用。

      技術(shù)研發(fā)人員:張宏道,吳立剛
      受保護的技術(shù)使用者:中國科學院分子細胞科學卓越創(chuàng)新中心
      技術(shù)研發(fā)日:
      技術(shù)公布日:2024/12/10
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