本文提供了具有一個或多個遺傳編輯的細胞表面蛋白基因的遺傳工程化的造血細胞(諸如造血干細胞)，其可與免疫療法(即細胞毒性劑，諸如嵌合抗原受體t細胞)組合使用，及其治療用途。

背景技術(shù)：

1、基因轉(zhuǎn)移技術(shù)的創(chuàng)新使得重新編程免疫細胞以靶向癌細胞上表達的分子成為可能。極其有希望的結(jié)果促使fda批準了用于治療b淋巴母細胞白血病的首個過繼性細胞免疫療法，稱為cd19?car-t細胞。盡管這些成功有望徹底改變腫瘤學(xué)領(lǐng)域，但它們的應(yīng)用受到了阻礙，因為大多數(shù)適合的候選者通常與健康的骨髓細胞共享，從而導(dǎo)致免疫抑制和嚴重的造血毒性。抗髓系/干細胞car-t誘導(dǎo)的毒性限制了它們在hsct之前有限時間窗口內(nèi)對挽救療法的適用性，這可能不足以根除疾病。因此，有效靶向感興趣的細胞(例如癌細胞)而不靶向或傷害正常細胞群仍是一個尚未滿足的需求。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本公開一般涉及具有一個或多個遺傳編輯的細胞表面蛋白基因的遺傳工程化的造血細胞諸如造血干細胞，以及能夠靶向相同細胞表面蛋白的嵌合抗原受體。

2、在一個實施方案中，提供了一種遺傳工程化的造血干細胞(hspc)，其包含遺傳工程化的flt3基因，其中遺傳工程化的flt3基因被工程化使得其經(jīng)編碼的蛋白質(zhì)與治療抗flt3抗體的結(jié)合降低。在一個實施方案中，遺傳工程化的flt3基因包含flt3基因的外顯子9中的至少一個突變。在一個實施方案中，遺傳工程化的flt3基因的外顯子9中的至少一個突變導(dǎo)致在位置n399處帶有突變的多肽。在一個實施方案中，在位置n399處的突變是n399d或n399g。在一個實施方案中，治療抗flt3抗體是抗flt3克隆4g8抗體。在一個實施方案中，治療抗flt3抗體是具有與4g8抗體相同的六個cdr或與4g8抗體競爭的抗體。在一個實施方案中，遺傳工程化的hspc是使用包含引導(dǎo)核酸和核酸酶的crispr系統(tǒng)進行遺傳工程化的。在一個實施方案中，核酸酶是化膿性鏈球菌(streptococcus?pyogenes)cas9(spcas9)、金黃色葡萄球菌(staphylococcus?aureus)(sacas9)、毛螺菌科細菌(lachnospiraceaebacterium)cas12a(lbcas12a)，或氨基酸球菌屬某種(acidaminococcus?sp.)bv3l6(ascas12a)。在一個實施方案中，crispr系統(tǒng)包含spcas9。在一個實施方案中，引導(dǎo)核酸選自由seq?id?no：13、seq?id?no：14、seq?id?no：15和seq?id?no：16組成的組。在一個實施方案中，crispr系統(tǒng)還包含模板dna。在一個實施方案中，模板dna選自由seq?id?no：40、seqid?no：41、seq?id?no：42和seq?id?no：43組成的組。在一個實施方案中，核酸酶是與堿基編輯器酶連接的催化受損的spcas9。在一個實施方案中，堿基編輯器酶是核苷酸脫氨酶。在一個實施方案中，核苷酸脫氨酶是胞嘧啶脫氨酶或腺苷脫氨酶。在另一個實施方案中，催化受損的spcas9是ng-spcas9或spry-spcas9。在一個實施方案中，催化受損的spcas9包含在位置d10a處的突變。在一個實施方案中，催化受損的spcas9還包含在位置k918n處的突變。在一個實施方案中，引導(dǎo)rna選自由seq?id?no：17、seq?id?no：18、seq?id?no：19、seq?id?no：20和seq?id?no：23組成的組。在一個實施方案中，遺傳工程化的flt3基因編碼包含氨基酸序列seq?id?no：51或seq?id?no：52的多肽。還提供了遺傳工程化的造血干細胞(hspc)群，其包含如上所述的遺傳工程化的hspc。在一些實施方案中，提供了一種治療造血系統(tǒng)惡性腫瘤的方法，所述方法包括向人受試者施用：(a)如上所述的遺傳工程化的造血干細胞群，和(b)治療有效量的包含有抗flt3抗體結(jié)合結(jié)構(gòu)域或包含抗flt3結(jié)合結(jié)構(gòu)域的抗體或抗體片段的至少一種劑。在一個實施方案中，至少一種劑包含有包含抗flt3抗體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的嵌合抗原受體-t(car-t)細胞。在一個實施方案中，造血系統(tǒng)惡性腫瘤是b淋巴母細胞白血病(bll)、急性髓系白血病(aml)或t細胞急性淋巴母細胞白血病(t-all)。在一個實施方案中，所述方法還包括從來自人受試者的生物樣品中獲得hspc以及對來自人受試者的生物樣品中的hspc進行遺傳工程化，從而形成遺傳工程化的hspc群。在一個實施方案中，生物樣品是骨髓細胞、血液、臍帶血細胞、或動員的外周血衍生的cd34+造血干細胞和祖細胞。

3、在一個實施方案中，還提供了一種遺傳工程化的造血干細胞(hspc)，其包含遺傳工程化的cd123基因，其中遺傳工程化的cd123基因被工程化使得其經(jīng)編碼的蛋白質(zhì)與治療抗cd123抗體的結(jié)合降低。在一個實施方案中，治療抗cd123抗體是克隆7g3抗體或其人源化對應(yīng)物csl362。在一個實施方案中，遺傳工程化的cd123基因包含cd123基因的外顯子2中的至少一個突變。在一個實施方案中，遺傳工程化的cd123基因的外顯子2中的至少一個突變導(dǎo)致在位置s59處帶有突變的多肽。在一個實施方案中，在s59處的突變是s59p或s59f。在一個實施方案中，治療抗cd123抗體是抗cd123克隆6h6抗體或抗cd123克隆s18016f抗體。在一個實施方案中，遺傳工程化的cd123基因包含cd123基因的外顯子3中的至少一個突變。在一個實施方案中，遺傳工程化的cd123基因的外顯子3中的至少一個突變導(dǎo)致在位置p88處帶有突變的多肽。在一個實施方案中，在p88處的突變是p88l或p88s。在一個實施方案中，遺傳工程化的hspc是使用包含引導(dǎo)核酸和核酸酶的crispr系統(tǒng)進行遺傳工程化的。在一個實施方案中，引導(dǎo)核酸選自由seq?id?no：24、seq?id?no：27、seq?id?no：30、seq?id?no：32、seqid?no：33和seq?id?no：34組成的組。在一個實施方案中，核酸酶是與堿基編輯器酶連接的催化受損的spcas9。在一個實施方案中，堿基編輯器酶是核苷酸脫氨酶。在一個實施方案中，堿基編輯器酶是胞嘧啶脫氨酶或腺苷脫氨酶。在一個實施方案中，催化受損的spcas9是ng-spcas9或spry-spcas9。在一個實施方案中，催化受損的spcas9包含在位置d10a處的突變。在一個實施方案中，催化受損的spcas9還包含在位置k918n處的突變。在一個實施方案中，遺傳工程化的cd123基因編碼包含氨基酸序列seq?id?no：54、seq?id?no：55、seq?idno：56、seq?id?no：57或seq?id?no：58的多肽。本文還提供了遺傳工程化的造血干細胞(hspc)群，其包含如上所述的遺傳工程化的hspc。還提供了一種治療造血系統(tǒng)惡性腫瘤的方法，所述方法包括向人受試者施用：(a)如上所述的遺傳工程化的造血干細胞群，和(b)治療有效量的包含有抗cd123抗體結(jié)合結(jié)構(gòu)域或包含抗cd123結(jié)合結(jié)構(gòu)域的抗體或抗體片段的至少一種劑。在一個實施方案中，至少一種劑包含有包含抗cd123抗體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的嵌合抗原受體-t(car-t)細胞。在一個實施方案中，造血系統(tǒng)惡性腫瘤是b淋巴母細胞白血病(bll)、急性髓系白血病(aml)、t細胞急性淋巴母細胞白血病(t-all)或母細胞性漿細胞樣樹突狀細胞白血病(bpcdn)。在一個實施方案中，所述方法還包括從來自人受試者的生物樣品中獲得hspc以及對來自人受試者的生物樣品中的hspc進行遺傳工程化，從而形成遺傳工程化的hspc群。在一個實施方案中，生物樣品是骨髓細胞、血液、臍帶血細胞、或動員的外周血衍生的cd34+造血干細胞和祖細胞。

4、在一些實施方案中，提供了一種遺傳工程化的造血干細胞(hspc)群，其包含：(i)遺傳工程化的flt3基因，其中遺傳工程化的flt3基因編碼與治療抗flt3抗體的結(jié)合降低的蛋白質(zhì)，和(ii)遺傳工程化的cd123基因，其中遺傳工程化的cd123基因編碼與治療抗cd123抗體的結(jié)合降低的蛋白質(zhì)。在一個實施方案中，遺傳工程化的flt3基因包含flt3基因的外顯子9中的至少一個突變。在一個實施方案中，遺傳工程化的flt3基因的外顯子9中的至少一個突變導(dǎo)致在位置n399處帶有突變的多肽。在一個實施方案中，遺傳工程化的cd123基因包含cd123基因的外顯子2中的至少一個突變。在一個實施方案中，遺傳工程化的cd123基因的外顯子2中的至少一個突變導(dǎo)致在位置s59處帶有突變的多肽。在一個實施方案中，治療抗flt3抗體是抗flt3克隆4g8抗體。在一個實施方案中，治療抗cd123抗體是抗cd123克隆7g3抗體或csl362抗體。在一個實施方案中，使用包含至少兩種引導(dǎo)核酸和一種核酸酶的crispr系統(tǒng)對hspc群進行遺傳工程化。在一個實施方案中，至少兩種引導(dǎo)核酸是1)seq?idno：18或seq?id?no：20和2)seq?id?no：seq?id?no：24或seq?id?no：27。在一個實施方案中，至少兩種引導(dǎo)核酸是seq?id?no：20和seq?id?no：27。在一個實施方案中，核酸酶是與堿基編輯器酶連接的催化受損的spcas9。在一個實施方案中，堿基編輯器酶是核苷酸脫氨酶。在一個實施方案中，堿基編輯器酶是胞嘧啶脫氨酶或腺苷脫氨酶。在一個實施方案中，催化受損的spcas9是ng-spcas9或spry-spcas9。在一個實施方案中，催化受損的spcas9包含在位置d10a處的突變。在一個實施方案中，spcas9還包含在位置k918n處的突變。還提供了一種治療造血系統(tǒng)惡性腫瘤的方法，所述方法包括向人受試者施用：(a)如上所述的hspc群，和(b)治療有效量的至少一種劑，其包含以下中的一者或兩者：(1)抗flt3抗體結(jié)合結(jié)構(gòu)域或包含抗flt3結(jié)合結(jié)構(gòu)域的抗體或抗體片段，和/或(2)抗cd123抗體結(jié)合結(jié)構(gòu)域或包含抗cd123結(jié)合結(jié)構(gòu)域的抗體或抗體片段。在一個實施方案中，至少一種劑包含有包含抗flt3抗體結(jié)合結(jié)構(gòu)域和/或抗cd123抗體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的嵌合抗原受體-t(car-t)細胞。在一個實施方案中，造血系統(tǒng)惡性腫瘤是b淋巴母細胞白血病(bll)、急性髓系白血病(aml)、t細胞急性淋巴母細胞白血病(t-all)或母細胞性漿細胞樣樹突狀細胞白血病(bpcdn)。在一個實施方案中，所述方法還包括從來自人受試者的生物樣品中獲得hspc以及對來自人受試者的生物樣品中的hspc進行遺傳工程化，從而形成遺傳工程化的hspc群。在一個實施方案中，生物樣品是骨髓細胞、血液、臍帶血細胞、或動員的外周血衍生的cd34+造血干細胞和祖細胞。

5、在一個實施方案中，還提供了一種遺傳工程化的造血干細胞(hspc)，其包含遺傳工程化的kit基因，其中遺傳工程化的kit基因被工程化使得其經(jīng)編碼的蛋白質(zhì)與治療抗kit抗體的結(jié)合降低。在一個實施方案中，遺傳工程化的kit基因包含kit基因的外顯子7中的至少一個突變。在一個實施方案中，遺傳工程化的kit基因的外顯子7中的至少一個突變導(dǎo)致在位置h378處帶有突變的多肽。在一個實施方案中，在位置h378處的突變是h378r。在一個實施方案中，治療抗kit抗體是抗kit克隆fab79d抗體。在一個實施方案中，遺傳工程化的hspc是使用包含引導(dǎo)核酸和核酸酶的crispr系統(tǒng)進行遺傳工程化的。在一個實施方案中，引導(dǎo)核酸選自由seq?id?no：36、seq?id?no：37、seq?id?no：38和seq?id?no：39組成的組。在一個實施方案中，核酸酶是與堿基編輯器酶連接的催化受損的spcas9。在一個實施方案中，其中堿基編輯器酶是核苷酸脫氨酶。在一個實施方案中，堿基編輯器酶是胞嘧啶脫氨酶或腺苷脫氨酶。在一個實施方案中，催化受損的spcas9是ng-spcas9或spry-spcas9。在一個實施方案中，催化受損的spcas9包含在位置d10a處的突變。在一個實施方案中，spcas9還包含在位置k918n處的突變。還提供了遺傳工程化的造血干細胞(hspc)群，其包含如上所述的遺傳工程化的hspc。還提供了一種治療造血系統(tǒng)惡性腫瘤的方法，所述方法包括向人受試者施用：(a)如上所述的遺傳工程化的造血干細胞群，和(b)治療有效量的包含有抗kit抗體結(jié)合結(jié)構(gòu)域或包含抗kit結(jié)合結(jié)構(gòu)域的抗體或抗體片段的至少一種劑。在一個實施方案中，至少一種劑包含有包含抗kit抗體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的嵌合抗原受體-t(car-t)細胞。在一個實施方案中，造血系統(tǒng)惡性腫瘤是b淋巴母細胞白血病(bll)、急性髓系白血病(aml)或t急性淋巴母細胞白血病(t-all)。在一個實施方案中，所述方法還包括從來自人受試者的生物樣品中獲得hspc以及對來自人受試者的生物樣品中的hspc進行遺傳工程化，從而形成遺傳工程化的hspc群。在一個實施方案中，生物樣品是骨髓細胞、血液、臍帶血細胞、或動員的外周血衍生的cd34+造血干細胞和祖細胞。

6、在一些實施方案中，還提供了一種遺傳工程化的造血干細胞(hspc)群，其包含：(i)遺傳工程化的kit基因，其中遺傳工程化的kit基因編碼與治療抗kit抗體的結(jié)合降低的蛋白質(zhì)，和(ii)遺傳工程化的cd123基因，其中遺傳工程化的cd123基因編碼與治療抗cd123抗體的結(jié)合降低的蛋白質(zhì)。在一個實施方案中，遺傳工程化的kit基因包含kit基因的外顯子7中的至少一個突變。在一個實施方案中，遺傳工程化的kit基因的外顯子7中的至少一個突變導(dǎo)致在位置h378處帶有突變的多肽。在一個實施方案中，遺傳工程化的cd123基因包含cd123基因的外顯子2中的至少一個突變。在一個實施方案中，遺傳工程化的cd123基因的外顯子2中的至少一個突變導(dǎo)致在位置s59處帶有突變的多肽。在一個實施方案中，治療抗kit抗體是抗kit克隆fab79d抗體。在一個實施方案中，治療抗cd123抗體是抗cd123克隆7g3抗體或csl362抗體。在一個實施方案中，使用包含至少兩種引導(dǎo)核酸和一種核酸酶的crispr系統(tǒng)對hspc群進行遺傳工程化。在一個實施方案中，至少兩種引導(dǎo)核酸是1)seq?id?no：36、seq?id?no：37、seq?id?no：38或seq?id?no：39和2)seq?id?no：24或seq?id?no：27。在一個實施方案中，至少兩種引導(dǎo)核酸是seq?id?no：37和seq?id?no：27。在一個實施方案中，核酸酶是與堿基編輯器酶連接的催化受損的spcas9。在一個實施方案中，堿基編輯器酶是核苷酸脫氨酶。在一個實施方案中，堿基編輯器酶是胞嘧啶脫氨酶或腺苷脫氨酶。在一個實施方案中，催化受損的spcas9是ng-spcas9或spry-spcas9。在一個實施方案中，催化受損的spcas9包含在位置d10a處的突變。在一個實施方案中，spcas9還包含在位置k918n處的突變。還提供了一種治療造血系統(tǒng)惡性腫瘤的方法，所述方法包括向人受試者施用：(a)如上所述的hspc群，和(b)治療有效量的至少一種劑，其包含以下中的一者或兩者：(1)抗kit抗體結(jié)合結(jié)構(gòu)域或包含抗kit結(jié)合結(jié)構(gòu)域的抗體或抗體片段，和/或(2)抗cd123抗體結(jié)合結(jié)構(gòu)域或包含抗cd123結(jié)合結(jié)構(gòu)域的抗體或抗體片段。在一個實施方案中，至少一種劑包含有包含抗kit抗體結(jié)合結(jié)構(gòu)域和/或抗cd123抗體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的嵌合抗原受體-t(car-t)細胞。在一個實施方案中，造血系統(tǒng)惡性腫瘤是b淋巴母細胞白血病(bll)、急性髓系白血病(aml)、t細胞急性淋巴母細胞白血病(t-all)或母細胞性漿細胞樣樹突狀細胞白血病(bpcdn)。在一個實施方案中，所述方法還包括從來自人受試者的生物樣品中獲得hspc以及對來自人受試者的生物樣品中的hspc進行遺傳工程化，從而形成遺傳工程化的hspc群。在一個實施方案中，生物樣品是骨髓細胞、血液、臍帶血細胞、或動員的外周血衍生的cd34+造血干細胞和祖細胞。

7、本文還提供了一種遺傳工程化的造血干細胞(hspc)群，其包含：(i)遺傳工程化的flt3基因，其中遺傳工程化的flt3基因編碼與治療抗flt3抗體的結(jié)合降低的蛋白質(zhì)，和(ii)遺傳工程化的kit基因，其中遺傳工程化的kit基因編碼與治療抗kit抗體的結(jié)合降低的蛋白質(zhì)。在一個實施方案中，遺傳工程化的flt3基因包含flt3基因的外顯子9中的至少一個突變。在一個實施方案中，遺傳工程化的flt3基因的外顯子9中的至少一個突變導(dǎo)致在位置n399處帶有突變的多肽。在一個實施方案中，遺傳工程化的kit基因包含kit基因的外顯子7中的至少一個突變。在一個實施方案中，遺傳工程化的kit基因的外顯子7中的至少一個突變導(dǎo)致在位置h378處帶有突變的多肽。在一個實施方案中，治療抗flt3抗體是抗flt3克隆4g8抗體。在一個實施方案中，治療抗kit抗體是抗kit克隆fab79d抗體。在一個實施方案中，使用包含至少兩種引導(dǎo)核酸和一種核酸酶的crispr系統(tǒng)對hspc群進行遺傳工程化。在一個實施方案中，至少兩種引導(dǎo)核酸是1)seq?id?no：18或seq?id?no：20和2)seq?id?no：36、seq?id?no：37，seq?id?no：38或seq?id?no：39。在一個實施方案中，至少兩種引導(dǎo)核酸是seq?id?no：20和seq?id?no：37。在一個實施方案中，核酸酶是與堿基編輯器酶連接的催化受損的spcas9。在一個實施方案中，堿基編輯器酶是核苷酸脫氨酶。在一個實施方案中，堿基編輯器酶是胞嘧啶脫氨酶或腺苷脫氨酶。在一個實施方案中，催化受損的spcas9是ng-spcas9或spry-spcas9。在一個實施方案中，催化受損的spcas9包含在位置d10a處的突變。在一個實施方案中，spcas9還包含在位置k918n處的突變。還提供了一種治療造血系統(tǒng)惡性腫瘤的方法，所述方法包括向人受試者施用：(a)如上所述的hspc群，和(b)治療有效量的至少一種劑，其包含以下中的一者或兩者：(1)抗flt3抗體結(jié)合結(jié)構(gòu)域或包含抗flt3結(jié)合結(jié)構(gòu)域的抗體或抗體片段，和/或(2)抗kit抗體結(jié)合結(jié)構(gòu)域或包含抗kit結(jié)合結(jié)構(gòu)域的抗體或抗體片段。在一個實施方案中，至少一種劑包含有包含抗flt3抗體結(jié)合結(jié)構(gòu)域和/或抗kit抗體結(jié)合結(jié)構(gòu)域的嵌合抗原受體-t(car-t)細胞。在一個實施方案中，造血系統(tǒng)惡性腫瘤是b淋巴母細胞白血病(bll)、急性髓系白血病(aml)、t細胞急性淋巴母細胞白血病(t-all)或母細胞性漿細胞樣樹突狀細胞白血病(bpcdn)。在一個實施方案中，所述方法還包括從來自人受試者的生物樣品中獲得hspc以及對來自人受試者的生物樣品中的hspc進行遺傳工程化，從而形成遺傳工程化的hspc群。在一個實施方案中，生物樣品是骨髓細胞、血液、臍帶血細胞、或動員的外周血衍生的cd34+造血干細胞和祖細胞。

8、在一些實施方案中，還提供了一種包含多肽的嵌合抗原受體(car)，所述多肽包含：(a)與一個或多個細胞表面譜系特異性蛋白的表位結(jié)合的一個或多個表位結(jié)合片段、(b)鉸鏈結(jié)構(gòu)域、(c)跨膜結(jié)構(gòu)域、(d)共刺激結(jié)構(gòu)域，和(e)細胞質(zhì)信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域，其中一個或多個細胞表面譜系特異性蛋白選自flt3、cd123和/或kit。

9、在一些實施方案中，細胞表面譜系特異性蛋白是flt3，并且car包含氨基酸序列seq?id?no：73。在一些實施方案中，細胞表面譜系特異性蛋白是flt3，并且一個或多個表位結(jié)合片段包括來自seq?id?no：73的一個或多個表位結(jié)合片段。在一些實施方案中，細胞表面譜系特異性蛋白是flt3，并且一個或多個表位結(jié)合片段包含以下cdr序列：gytftsywmh(seq?id?no：96)、eidpsdsykdynqkfk(seq?id?no：97)、raitttpfdf(seq?id?no：98)、rasqsisnnlh(seq?id?no：99)、yasqsis(seq?id?no：100)和qqsntwpyt(seq?id?no：101)。在一些實施方案中，細胞表面譜系特異性蛋白是cd123，并且car包含氨基酸序列seq?id?no：75、seq?id?no：86或seq?id?no：87。在一些實施方案中，細胞表面譜系特異性蛋白是cd123，并且一個或多個表位結(jié)合片段包括來自seq?id?no：75、seq?id?no：86或seq?id?no：87的一個或多個表位結(jié)合片段。在一些實施方案中，細胞表面譜系特異性蛋白是cd123，并且一個或多個表位結(jié)合片段包含以下cdr序列：gysftdyymk(seq?id?no：104)、diipsngatfynqkfkg(seq?id?no：105)、arshllraswfay(seq?id?no：106)、sqsllnsgnqknylt(seq?id?no：107)、wastres(seq?id?no：108)和qndysypyt(seq?id?no：109)。在一些實施方案中，細胞表面譜系特異性蛋白是cd123，并且一個或多個表位結(jié)合片段包含以下cdr序列：diipsngatfynqkfkg(seq?id?no：105)、sqsllnsgnqknylt(seq?id?no：107)、wastres(seqid?no：108)和qndysypyt(seq?id?no：109)。在一些實施方案中，細胞表面譜系特異性蛋白是kit，并且car包含氨基酸序列seq?id?no：69或seq?id?no：71。在一些實施方案中，細胞表面譜系特異性蛋白是kit，并且一個或多個表位結(jié)合片段包括來自seq?id?no：69或seq?idno：71的一個或多個表位結(jié)合片段。在一些實施方案中，細胞表面譜系特異性蛋白是kit，并且一個或多個表位結(jié)合片段包含以下cdr序列：gfnisvymmh(seq?id?no：88)、siypysgytyyadsvkg(seq?id?no：89)、aryvyhaldy(seq?id?no：90)、rasqrglrnvava(seq?idno：91)、sasslys(seq?id?no：92)和qqwavhslit(seq?id?no：93)。在一些實施方案中，一個或多個細胞表面譜系特異性蛋白是flt3和cd123，并且car包含氨基酸序列seq?id?no：77或seq?id?no：79。在一些實施方案中，一個或多個細胞表面譜系特異性蛋白是flt3和cd123，并且一個或多個表位結(jié)合片段包括來自seq?id?no：77或seq?id?no：79的一個或多個表位結(jié)合片段。在一些實施方案中，一個或多個細胞表面譜系特異性蛋白是flt3和cd123，并且一個或多個表位結(jié)合片段包含以下cdr序列：gytftsywmh(seq?id?no：96)、eidpsdsykdynqkfk(seq?id?no：97)、raitttpfdf(seq?id?no：98)、rasqsisnnlh(seq?idno：99)、yasqsis(seq?id?no：100)、qqsntwpyt(seq?id?no：101)、gysftdyymk(seq?id?no：104)、diipsngatfynqkfkg(seq?id?no：105)、arshllraswfay(seq?id?no：106)、sqsllnsgnqknylt(seq?id?no：107)、wastres(seq?id?no：108)和qndysypyt(seq?id?no：109)。在上述任何car的一些實施方案中，鉸鏈結(jié)構(gòu)域是cd28鉸鏈、igg4鉸鏈或cd8α鉸鏈。在上述任何car的一些實施方案中，跨膜結(jié)構(gòu)域是cd28?tm、cd8α?tm或4-1bb?tm。在上述任何car的一些實施方案中，共刺激結(jié)構(gòu)域是cd28z、4-1bb、icos或ox40。在上述任何car的一些實施方案中，其中細胞質(zhì)信號傳導(dǎo)結(jié)構(gòu)域是cd3z。

10、本文還提供了表達任何上述car的細胞。在一些實施方案中，所述細胞是免疫細胞。在一些實施方案中，所述免疫細胞是t細胞。

11、本文還提供了一種治療造血系統(tǒng)惡性腫瘤的方法，所述方法包括向人受試者施用：(a)遺傳工程化的造血干細胞群(諸如上述那些中的任一種)，和(b)表達任何上述car的細胞(諸如免疫細胞)。

12、本文還提供了一種包含與seq?id?no：51中所示的序列至少80％同一的多肽序列的多肽序列，其中多肽序列包含在n399d處的突變，并且其中多肽序列與治療抗flt3抗體的結(jié)合降低。

13、本文還提供了一種包含與seq?id?no：52中所示的序列至少80％同一的多肽序列的多肽序列，其中多肽序列包含在n399g處的突變，并且其中多肽序列與治療抗flt3抗體的結(jié)合降低。

14、本文還提供了一種包含與seq?id?no：54中所示的序列至少80％同一的多肽序列的多肽序列，其中多肽序列包含在s59p處的突變，并且其中多肽序列與治療抗cd123抗體的結(jié)合降低。

15、本文還提供了一種包含與seq?id?no：55中所示的序列至少80％同一的多肽序列的多肽序列，其中多肽序列包含在y58h和s59p處的突變，并且其中多肽序列與治療抗cd123抗體的結(jié)合降低。

16、本文還提供了一種包含與seq?id?no：56中所示的序列至少80％同一的多肽序列的多肽序列，其中多肽序列包含在s59f處的突變，并且其中多肽序列與治療抗cd123抗體的結(jié)合降低。

17、本文還提供了一種包含與seq?id?no：57中所示的序列至少80％同一的多肽序列的多肽序列，其中多肽序列包含在p88s處的突變，并且其中多肽序列與治療抗cd123抗體的結(jié)合降低。

18、本文還提供了一種包含與seq?id?no：58中所示的序列至少80％同一的多肽序列的多肽序列，其中多肽序列包含在p88l處的突變，并且其中多肽序列與治療抗cd123抗體的結(jié)合降低。

19、本文還提供了一種包含與seq?id?no：67中所示的序列至少80％同一的多肽序列的多肽序列，其中多肽序列包含在f316s、m318v、i319k、v323i、i334v、e360k、p363v、e366d、e376q和h378r處的突變，并且其中多肽序列與治療抗kit抗體的結(jié)合降低。

20、本文還提供了一種包含與seq?id?no：68中所示的序列至少80％同一的多肽序列的多肽序列，其中多肽序列包含在h378r處的突變，并且其中多肽序列與治療抗kit抗體的結(jié)合降低。

21、本文還提供了編碼任何上述多肽的核酸。

22、除非另有定義，本文使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通常理解的相同含義。本文描述了用于本發(fā)明的方法和材料；也可以使用本領(lǐng)域已知的其他適合的方法和材料。所述材料、方法和實例僅是說明性的而不是旨在限制。本文提到的所有出版物、專利申請、專利、序列、數(shù)據(jù)庫條目和其他參考文獻均通過引用整體并入。如有沖突，以本說明書(包括定義)為準。

23、本發(fā)明的其他特征和優(yōu)勢將從以下具體實施方式和附圖以及權(quán)利要求書中顯而易見。