發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及包含抗間皮素抗原結(jié)合域的單克隆抗間皮素抗體和嵌合抗原受體(cars)、編碼該抗體和cars的核酸和表達(dá)載體、包含該載體的重組細(xì)胞以及組合物，該組合物包含上述抗體、cars和包含該cars的宿主細(xì)胞。本發(fā)明還提供了制備所述抗體和cars的方法，以及使用所述抗體和cars治療疾病的方法，所述疾病包括癌癥、炎癥性疾病、自身免疫性疾病和/或相關(guān)并發(fā)癥。電子提交的序列表的引用本技術(shù)包含以電子方式提交的序列表。該電子序列表(065799.37wo1序列表.xml，大?。?9,020字節(jié)，創(chuàng)建日期為2023年2月22日)在此通過(guò)引用完整地并入本文。

背景技術(shù)：

0、發(fā)明背景

1、間皮素(msln)是一種40kda的糖基磷脂酰肌醇(gpi)錨定糖蛋白，其正常表達(dá)嚴(yán)格限制在間皮細(xì)胞表面。msln的生理功能仍然難以捉摸，因?yàn)榍贸g皮素基因的小鼠沒(méi)有表現(xiàn)出顯著的表型，這表明該蛋白對(duì)于任何重要功能來(lái)說(shuō)是可有可無(wú)的(bera,t.k.等人，mol.cell.biol，2000,20:2902-2906)。另一方面，間皮素在許多癌細(xì)胞中過(guò)度表達(dá)，包括間皮瘤、胰腺癌、卵巢癌和肺腺癌(n.g.，am?jsurg?pathol，2003,27:1418-28)。間皮素的過(guò)度表達(dá)與疾病的不良預(yù)后有關(guān)。機(jī)制上，msln與ca125/muc16的相互作用與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移有關(guān)(rump,a.等人，jbiol?chem.2004,279:9190-9198；chen,s.h.等人,科學(xué)報(bào)道.2013,3:1870)。因此，選擇合適的msln單克隆抗體可以靶向腫瘤細(xì)胞進(jìn)行免疫細(xì)胞殺傷，同時(shí)降低腫瘤的侵襲性。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

0、發(fā)明概述

1、在一個(gè)總體方面，本發(fā)明涉及特異性結(jié)合間皮素的分離的單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段。

2、提供了分離的單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段，其包括包含重鏈互補(bǔ)決定區(qū)1(hcdr1)、hcdr2、hcdr3的重鏈可變區(qū)，以及包含輕鏈互補(bǔ)決定區(qū)1(lcdr1)、lcdr2和lcdr3的輕鏈可變區(qū)，其分別具有以下多肽序列:

3、(1)seq?id?no：3、4、5、6、7和8，或者，seq?id?no：9、10、11、12、13和14；

4、(2)seq?id?no：17、18、19、20、21和22，或者，seq?id?no：23、24、25、26、27和28；

5、(3)seq?id?no：31、32、33、34、35和36，或者，seq?id?no：37、38、39、40、41和42；

6、(4)seq?id?no：60、61、62、63、64和65，或者，seq?id?no：66、67、68、69、70和71；

7、其中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段特異性結(jié)合間皮素，優(yōu)選人間皮素。

8、在某些實(shí)施方式中，所述分離的單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段包括重鏈可變區(qū)，其多肽序列與seq?id?no:1、15、29或58有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性，或包括輕鏈可變區(qū)，其多肽序列與seq?id?no:2、16、30或59有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性。

9、在某些實(shí)施方式中，所述分離的單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段包括:

10、(a)具有seq?id?no:1多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:2多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

11、(b)具有seq?id?no:15多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:16多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

12、(c)具有seq?id?no:29多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:30多肽序列的輕鏈可變區(qū)；或

13、(d)具有seq?id?no:58多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:59多肽序列的輕鏈可變區(qū)。

14、在某些實(shí)施方式中，所述分離的單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段與間皮素結(jié)合，并能夠通過(guò)抗體依賴的細(xì)胞毒性(adcc)、抗體依賴的細(xì)胞吞噬(adcp)和/或補(bǔ)體依賴的細(xì)胞毒性(cdc)誘導(dǎo)效應(yīng)因子介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞裂解；和/或介導(dǎo)偶聯(lián)藥物的招募；和/或與具有癌癥殺傷作用的另一單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段形成雙特異性抗體。

15、在某些實(shí)施方式中，所述分離的單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段是嵌合的。

16、在某些實(shí)施方式中，所述分離的單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段為人源或人源化的。在某些實(shí)施方式中，所述人源化單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段包括重鏈可變區(qū)，其具有與seq?id?nos:43-46、52-55、72-75中的任意一個(gè)有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性的多肽序列；或輕鏈可變區(qū)，其具有與seq?id?nos:47-51、56-57、76-78中的任意一個(gè)有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性的多肽序列。

17、在某些實(shí)施方式中，人源化單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段包括:

18、(1)具有seq?id?no:43多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:47多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

19、(2)具有seq?id?no:43多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:48多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

20、(3)具有seq?id?no:43多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:49多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

21、(4)具有seq?id?no:43多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:50多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

22、(5)具有seq?id?no:43多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:51多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

23、(6)具有seq?id?no:44多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:47多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

24、(7)具有seq?id?no:44多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:48多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

25、(8)具有seq?id?no:44多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:49多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

26、(9)具有seq?id?no:44多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:50多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

27、(10)具有seq?id?no:44多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:51多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

28、(11)具有seq?id?no:45多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:47多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

29、(12)具有seq?id?no:45多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:48多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

30、(13)具有seq?id?no:45多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:49多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

31、(14)具有seq?id?no:45多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:50多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

32、(15)具有seq?id?no:45多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:51多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

33、(16)具有seq?id?no:46多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:47多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

34、(17)具有seq?id?no:46多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:48多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

35、(18)具有seq?id?no:46多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:49多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

36、(19)具有seq?id?no:46多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:50多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

37、(20)具有seq?id?no:46多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:51多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

38、(21)具有seq?id?no:52多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:56多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

39、(22)具有seq?id?no:52多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:57多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

40、(23)具有seq?id?no:53多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:56多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

41、(24)具有seq?id?no:53多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:57多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

42、(25)具有seq?id?no:54多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:56多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

43、(26)具有seq?id?no:54多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:57多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

44、(27)具有seq?id?no:55多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:56多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

45、(28)具有seq?id?no:55多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:57多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

46、(29)具有seq?id?no:72的多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:76的多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

47、(30)具有seq?id?no:72的多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:77的多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

48、(31)具有seq?id?no:72多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:78多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

49、(32)具有seq?id?no:73多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:76多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

50、(33)具有seq?id?no:73多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:77多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

51、(34)具有seq?id?no:73多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:78多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

52、(35)具有seq?id?no:74多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:76多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

53、(36)具有seq?id?no:74多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:77多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

54、(37)具有seq?id?no:74多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:78多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

55、(38)具有seq?id?no:75多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:76多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

56、(39)具有seq?id?no:75多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:77多肽序列的輕鏈可變區(qū)；或

57、(40)具有seq?id?no:75多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:78多肽序列的輕鏈可變區(qū)。

58、還提供了編碼本發(fā)明所述單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段或雙特異性抗體的分離核酸。

59、還提供了包含編碼本發(fā)明所述單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段或雙特異性抗體或其抗原結(jié)合片段的分離核酸的載體。

60、本發(fā)明還提供了包含載體的宿主細(xì)胞，其中，所述載體包含編碼本發(fā)明的單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段或雙特異性抗體或其抗原結(jié)合片段的分離核酸。

61、在某些實(shí)施方式中，提供了藥物組合物，所述藥物組合物包括本發(fā)明的分離的單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段或分離的雙特異性抗體或其抗原結(jié)合片段和藥學(xué)上可接受的載體。

62、本發(fā)明還提供了在有需要的受試者中特異性靶向癌細(xì)胞表面的間皮素的方法，所述方法包括將本發(fā)明的藥物組合物施用于所述受試者。

63、本發(fā)明還提供了在有需要的受試者中治療癌癥的方法，包括將本發(fā)明的藥物組合物施用于所述受試者。癌癥可以是任何液體或?qū)嶓w癌癥，例如，其可以選自但不限于肺癌、胃癌、食道癌、膽管癌、膽管細(xì)胞型肝癌、結(jié)腸癌、肝細(xì)胞癌、腎細(xì)胞癌、膀胱尿路上皮癌、轉(zhuǎn)移性黑色素瘤、乳腺癌、卵巢癌、宮頸癌、頭頸癌、胰腺癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、間皮瘤和其他實(shí)體腫瘤；以及非霍奇金淋巴瘤(nhl)、急性淋巴細(xì)胞白血病(all)、慢性淋巴細(xì)胞白血病(cll)、慢性髓性白血病(cml)、多發(fā)性骨髓瘤(mm)、急性髓性白血病(aml)和其他液體腫瘤。

64、本發(fā)明還提供了在有需要的受試者中治療炎癥和/或自身免疫性疾病的方法，所述方法包括將本發(fā)明的藥物組合物施用于所述受試者。

65、本發(fā)明還提供了制備本發(fā)明的單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段或雙特異性抗體或其抗原結(jié)合片段的方法，其包括在制備所述單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段或所述雙特異性抗體或其抗原結(jié)合片段的條件下，培養(yǎng)包含編碼所述單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段或所述雙特異性抗體或其抗原結(jié)合片段的核酸的細(xì)胞，并從所述細(xì)胞或培養(yǎng)物中回收所述單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段或所述雙特異性抗體或其抗原結(jié)合片段。

66、本發(fā)明還提供了制備本發(fā)明的包含單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段或所述雙特異性抗體或其抗原結(jié)合片段的藥物組合物的方法，包括將所述單克隆抗體或其抗原結(jié)合片段或所述雙特異性抗體或其抗原結(jié)合片段與藥學(xué)上可接受的載體組合以獲得所述藥物組合物。

67、本發(fā)明還提供了檢測(cè)受試者體內(nèi)間皮素水平的方法。所述方法包括(a)從受試者獲得樣品；(b)用本發(fā)明的抗體或抗原結(jié)合片段接觸樣品；(c)測(cè)定受試者體內(nèi)間皮素的水平。在某些實(shí)施方式中，所述樣品是組織樣品。例如，組織樣品可以是癌癥組織樣品。在某些實(shí)施方式中，所述樣品是血液樣品。

68、在另一個(gè)總體方面，本發(fā)明涉及誘導(dǎo)t細(xì)胞介導(dǎo)的癌癥殺傷的嵌合抗原受體(car)構(gòu)建體，其中所述car構(gòu)建體包括至少特異性結(jié)合人間皮素的抗原結(jié)合域、鉸鏈區(qū)、跨膜區(qū)和胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)域。

69、本發(fā)明提供了包含編碼嵌合抗原受體(car)的核酸序列的分離的多核苷酸。所述car可包括：(a)包含至少一個(gè)特異性結(jié)合間皮素的抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域；(b)鉸鏈區(qū)；(c)跨膜區(qū)；(d)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)域。

70、在某些實(shí)施方式中，所述抗原結(jié)合域包括包含重鏈互補(bǔ)決定區(qū)1(hcdr1)、hcdr2、hcdr3的重鏈可變區(qū)，以及包含輕鏈互補(bǔ)決定區(qū)1(lcdr1)、lcdr2和lcdr3的輕鏈可變區(qū)，其分別具有以下多肽序列：

71、(1)seq?id?no：3、4、5、6、7和8，或者，seq?id?no：9、10、11、12、13和14；

72、(2)seq?id?no：17、18、19、20、21和22，或者，seq?id?no：23、24、25、26、27和28；

73、(3)seq?id?no：31、32、33、34、35和36，或者，seq?id?no：37、38、39、40、41和42；

74、(4)seq?id?no：60、61、62、63、64和65，或者，seq?id?no：66、67、68、69、70和71；

75、其中，所述抗原結(jié)合域特異性結(jié)合間皮素，優(yōu)選人間皮素。

76、在某些實(shí)施方式中，所述抗原結(jié)合域包括重鏈可變區(qū)，其具有與seq?id?no:1、15、29或58有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性的多肽序列；或包括輕鏈可變區(qū)，其具有與seq?id?no:2、16、30或59有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性的多肽序列。

77、在某些實(shí)施方式中，所述抗原結(jié)合域包括：

78、(a)具有seq?id?no:1多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:2多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

79、(b)具有seq?id?no:15多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:16多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

80、(c)具有seq?id?no:29多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:30多肽序列的輕鏈可變區(qū)；或

81、(d)具有seq?id?no:58多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:59多肽序列的輕鏈可變區(qū)。

82、在某些實(shí)施方式中，所述抗原結(jié)合域?yàn)槿嗽椿?，并且包括重鏈可變區(qū)，其具有與seq?id?nos：43-46、52-55、或72-75有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性的多肽序列，或輕鏈可變區(qū)，其具有與seq?id?nos：47-51、56-57、或76-78中的任意一個(gè)有至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％的同一性的多肽序列。

83、在某些實(shí)施方式中，所述抗原結(jié)合域?yàn)槿嗽椿那野ǎ?/p>

84、(1)具有seq?id?no:43多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:47多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

85、(2)具有seq?id?no:43多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:48多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

86、(3)具有seq?id?no:43多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:49多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

87、(4)具有seq?id?no:43多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:50多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

88、(5)具有seq?id?no:43多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:51多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

89、(6)具有seq?id?no:44多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:47多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

90、(7)具有seq?id?no:44多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:48多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

91、(8)具有seq?id?no:44多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:49多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

92、(9)具有seq?id?no:44多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:50多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

93、(10)具有seq?id?no:44多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:51多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

94、(11)具有seq?id?no:45多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:47多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

95、(12)具有seq?id?no:45多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:48多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

96、(13)具有seq?id?no:45多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:49多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

97、(14)具有seq?id?no:45多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:50多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

98、(15)具有seq?id?no:45多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:51多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

99、(16)具有seq?id?no:46多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:47多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

100、(17)具有seq?id?no:46多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:48多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

101、(18)具有seq?id?no:46多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:49多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

102、(19)具有seq?id?no:46多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:50多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

103、(20)具有seq?id?no:46多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:51多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

104、(21)具有seq?id?no:52多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:56多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

105、(22)具有seq?id?no:52多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:57多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

106、(23)具有seq?id?no:53多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:56多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

107、(24)具有seq?id?no:53多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:57多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

108、(25)具有seq?id?no:54多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:56多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

109、(26)具有seq?id?no:54多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:57多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

110、(27)具有seq?id?no:55多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:56多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

111、(28)具有seq?id?no:55多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:57多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

112、(29)具有seq?id?no:72的多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:76的多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

113、(30)具有seq?id?no:72的多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:77的多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

114、(31)具有seq?id?no:72多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:78多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

115、(32)具有seq?id?no:73多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:76多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

116、(33)具有seq?id?no:73多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:77多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

117、(34)具有seq?id?no:73多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:78多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

118、(35)具有seq?id?no:74多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:76多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

119、(36)具有seq?id?no:74多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:77多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

120、(37)具有seq?id?no:74多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:78多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

121、(38)具有seq?id?no:75多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:76多肽序列的輕鏈可變區(qū)；

122、(39)具有seq?id?no:75多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:77多肽序列的輕鏈可變區(qū)；或

123、(40)具有seq?id?no:75多肽序列的重鏈可變區(qū)和具有seq?id?no:78多肽序列的輕鏈可變區(qū)。

124、在某些實(shí)施方式中，所述抗原結(jié)合域是單鏈可變片段(scfv)。

125、在某些實(shí)施方式中，所述抗原結(jié)合域是人源化單鏈可變片段(scfv)。

126、在某些實(shí)施方式中，所述嵌合抗原受體(car)包含一個(gè)或多個(gè)抗原結(jié)合域。

127、在某些實(shí)施方式中，所述胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)域包括一個(gè)或多個(gè)共刺激域和一個(gè)或多個(gè)激活域。

128、本發(fā)明還提供了由本發(fā)明的分離的多核苷酸編碼的嵌合抗原受體(cars)。

129、本發(fā)明還提供了包含分離的多核苷酸的載體，所述多核苷酸包含編碼cars的核酸。

130、本發(fā)明還提供了包含所述載體的宿主細(xì)胞。

131、在某些實(shí)施方式中，宿主細(xì)胞是t細(xì)胞，優(yōu)選地，人t細(xì)胞。在某些實(shí)施方式中，宿主細(xì)胞是nk細(xì)胞，優(yōu)選地，人nk細(xì)胞。例如，t細(xì)胞或nk細(xì)胞可以被改造為表達(dá)本發(fā)明的car的細(xì)胞來(lái)治療諸如癌癥之類的疾病。

132、本發(fā)明還提供了制備表達(dá)本發(fā)明嵌合抗原受體(car)的宿主細(xì)胞的方法。所述方法包括用含有編碼本發(fā)明所述cars的分離核酸的載體轉(zhuǎn)導(dǎo)t細(xì)胞或nk細(xì)胞。

133、本發(fā)明還提供了制備本發(fā)明car-t細(xì)胞或car-nk細(xì)胞的方法。所述方法包括在制備car-t細(xì)胞或car-nk細(xì)胞的條件下，培養(yǎng)含有分離的的多核苷酸的t細(xì)胞或nk細(xì)胞，該多核苷酸含有編碼本發(fā)明的嵌合抗原受體(car)的核酸，并且回收car-t細(xì)胞或car-nk細(xì)胞。

134、本發(fā)明還提供了制備包含本發(fā)明嵌合抗原受體(car)的rna工程化細(xì)胞群的方法。所述方法包括將細(xì)胞與含有編碼嵌合抗原受體(car)的核酸的分離多核苷酸接觸，其中分離的多核苷酸是體外轉(zhuǎn)錄的rna或合成rna。

135、本發(fā)明還提供了在有需要的受試者中治療癌癥的方法，包括給受試者施用本發(fā)明的car-t細(xì)胞和/或car-nk細(xì)胞。所述癌癥可以是任何液體或?qū)嶓w癌癥,例如，它可以選自但不限于肺癌、胃癌、結(jié)腸癌、肝細(xì)胞癌、腎細(xì)胞癌、膀胱尿路上皮癌、轉(zhuǎn)移性黑色素瘤、乳腺癌、卵巢癌、宮頸癌、頭頸癌、胰腺癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、間皮瘤和其他實(shí)體腫瘤，以及非霍奇金淋巴瘤(nhl)、急性淋巴細(xì)胞性白血病(all)、慢性淋巴細(xì)胞白血病(cll)、慢性髓性白血病(cml)、多發(fā)性骨髓瘤(mm)、急性髓性白血病(aml)和其他液體腫瘤。

136、在某些實(shí)施方式中，在有需要的受試者中治療癌癥的方法還包括向有需要的受試者施用藥物，所述藥物使細(xì)胞表達(dá)car分子的效率增加。

137、在某些實(shí)施方式中，在有需要的受試者中治療癌癥的方法進(jìn)一步包括向有需要的受試者施用藥物，所述藥物可改善一種或多種副作用，所述副作用與施用表達(dá)car分子的細(xì)胞有關(guān)。

138、在某些實(shí)施方式中，在有需要的受試者中治療癌癥的方法進(jìn)一步包括向有需要的受試者施用藥物，所述藥物用于治療與間皮素相關(guān)的疾病。