本公開一般地涉及snca-靶向rnai劑及方法。序列表本技術(shù)含有序列表，其以可擴(kuò)展標(biāo)示語言(xml)格式提交電子，且通過引用以其整體并入本文。該xml副本于2023年3月29日創(chuàng)建，名為aln-461wo.xml，大小為3242kb。

背景技術(shù)：

1、snca基因編碼突觸前神經(jīng)元蛋白質(zhì)，α-突觸核蛋白(本文中亦稱為alpha-突觸核蛋白或突觸核蛋白-α)，其在遺傳學(xué)上及神經(jīng)病理學(xué)上與帕金森氏病(pd)關(guān)聯(lián)(stefanis,l.cold?spring?harb?perspect?med.2:a009399)。α-突觸核蛋白被認(rèn)為以多種方式造成pd發(fā)病機(jī)制，但通常認(rèn)為α-突觸核蛋白的異常的可溶性寡聚體構(gòu)形(稱為原纖絲)是毒性物質(zhì)，其通過對各種細(xì)胞內(nèi)靶標(biāo)(包括突觸功能)的效應(yīng)來介導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)穩(wěn)態(tài)的破壞及神經(jīng)元死亡。此外，據(jù)信分泌的α-突觸核蛋白對于鄰近細(xì)胞發(fā)揮有害效應(yīng)，因此可能造成疾病擴(kuò)散。盡管α-突觸核蛋白牽涉到pd的全部病例中的程度尚不明確，但靶向在該蛋白失調(diào)時由該蛋白所賦予的毒性功能呈現(xiàn)潛在有價值的治療策略，不僅是對于pd，而且對于稱為突觸核蛋白病的其他神經(jīng)退化性病癥，其全部由于α-突觸核蛋白累積而表現(xiàn)常見的神經(jīng)病理學(xué)印記，稱為路易氏體(lb)及路易氏神經(jīng)突(ln)。除pd之外，這些證明或疑似的snca相關(guān)突觸核蛋白病包括而不限于，多系統(tǒng)萎縮(msa)、路易氏體癡呆(lbd)、單純性自主神經(jīng)衰竭(paf)、皮克氏病、進(jìn)行性核上性麻痹、拳擊員癡呆、與染色體17關(guān)聯(lián)的帕金森氏癥、lytico-bodig病、纏結(jié)優(yōu)勢型癡呆、嗜銀顆粒病、神經(jīng)節(jié)神經(jīng)膠質(zhì)瘤、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞瘤、腦膜血管瘤病、亞急性硬化性全腦炎、鉛中毒腦病、結(jié)節(jié)性硬化癥、hallervorden-spatz病、脂褐質(zhì)沉積、皮質(zhì)基底節(jié)變性、額顳葉癡呆、額顳葉變性、阿爾茲海默病、亨廷頓病、唐氏綜合征、精神錯亂、精神分裂癥和克雅氏病。

2、pd、lbd和msa是具有snca腦病理學(xué)的神經(jīng)退化性病癥的三種最普遍的實(shí)例。pd為最常見的運(yùn)動障礙，并且以僵直、運(yùn)動減退、震顫和姿勢不穩(wěn)為特征。據(jù)信pd在全世界范圍內(nèi)影響大約400至600萬人。lbd占到了全部癡呆的5-15％。除了健忘及經(jīng)常波動的其他癡呆癥狀之外，lbd患者通?；加蟹磸?fù)跌倒和視覺幻覺。msa為一種快速進(jìn)展的孤兒病癥，其在幾年內(nèi)導(dǎo)致受影響的受試者的嚴(yán)重運(yùn)動障礙。據(jù)報導(dǎo)，msa的發(fā)病率在每100,000人3.4-4.9例之間。

3、除了在α-突觸核蛋白病中觀察到的神經(jīng)病理學(xué)變化之外，在受影響的腦區(qū)中α-突觸核蛋白的水平通常也提高(klucken?et?al.,2006)。

4、α-突觸核蛋白單體、四聚體和纖維狀聚集體為具有腦鐵蓄積的神經(jīng)退化中的路易氏體(lb)樣神經(jīng)元內(nèi)包涵體、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞包涵體及軸突球體的主要組分。主要由α-突觸核蛋白組成的路易氏相關(guān)病理學(xué)(lrp)存在于大多數(shù)阿爾茲海默癥活檢中，并且患者中的較高α-突觸核蛋白水平與認(rèn)知能力下降關(guān)聯(lián)(twohig?et?al.(2019)molecularneurodegeneration)。snca基因中的常染色體顯性突變，特別地包括a53t、a30p、e46k和h50q(zarranz?et?al.(2004)ann.neurol.55,164-173，choi?et?al.(2004)febslett.576,363-368，及tsigelny?et?al.(2015)acs?chem.neurosci.6,403-416)、a53t(polymeropoulos?et?al.(1997)science)，以及三重和雙重，鑒定為在患有相關(guān)神經(jīng)退化性疾病的家庭中運(yùn)行。前述指明，不僅snca中的致病性突變，而且α-突觸核蛋白的增加也影響疾病結(jié)果。

5、snca突變在疾病發(fā)作中的作用尚未充分理解；但是，有證據(jù)指向正常α-突觸核蛋白超出特定水平(stefanis?et?al.(2012)cold?spring?harb?perspect?med.)和/或與細(xì)胞脂質(zhì)和囊泡異常相互作用(kiechler?et?al.(2020)front.cell?dev.biol中綜述)時，正常α-突觸核蛋白固有的功能獲得性毒性。顯然與此一致，與轉(zhuǎn)基因過表達(dá)者相反，snca無效小鼠顯示無明顯的神經(jīng)病理學(xué)或行為表型(abeliovich?et?al.(2000)neuron)。snca的轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)還顯示通過結(jié)合基因的3'端的內(nèi)源性microrna發(fā)生(junn?et?al.(2009)pnas106:13052-13057；doxakis(2010),jbc)。此外，對snca中的家族性點(diǎn)突變的研究表明受抑制的表達(dá)，尤其是在具有延長的疾病發(fā)作的情況中(markopoulou?et?al.(1999)annneurol.46(3):374-81及kobayashi?et?al.(2003)brain?126(pt?1):32-42)。類似地，voutsinas等人(2010)hum?mutat.31(6):685-91)發(fā)現(xiàn)，即便野生型snca信使rna(mrna)的過表達(dá)也為疾病發(fā)作的原因。這些數(shù)據(jù)表明，總snca水平的抑制會降低α-突觸核蛋白誘導(dǎo)的毒性。

6、對于突觸核蛋白病，包括pd、多系統(tǒng)萎縮及路易氏體癡呆，沒有疾病改善的治療，并且治療選項有限，例如，僅緩和性的。舉例而言，目前，僅對癥治療可用于pd患者(通過替代腦中活性多巴胺的損失)及ad患者(即，膽堿酯酶抑制劑)。用于α-突觸核蛋白病的現(xiàn)有治療策略無一針對基礎(chǔ)疾病過程。

7、因此，注意到在數(shù)種神經(jīng)退化性病癥(突觸核蛋白病)中所描述的snca的參與，但對于藥劑(鑒于α-突觸核蛋白在cns組織中的所描述的功能性，特別地針對中樞神經(jīng)系統(tǒng)(cns)的藥劑)仍存在需求，該藥劑可使用細(xì)胞自身的rnai機(jī)制來選擇性地且有效地沉默snca基因(例如，消除或降低毒性α-突觸核蛋白物質(zhì)的效應(yīng))，其具有高生物學(xué)活性和體內(nèi)穩(wěn)定性，并且可有效地抑制靶snca基因的表達(dá)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本公開提供rnai劑組合物，其實(shí)現(xiàn)突觸核蛋白α(snca)基因的rna轉(zhuǎn)錄物的rna誘導(dǎo)沉默復(fù)合體(risc)介導(dǎo)的切割。snca基因可處于細(xì)胞內(nèi)，例如受試者如人類體內(nèi)的細(xì)胞內(nèi)。在某些實(shí)施方案中，rnai劑被設(shè)計且針對cns的細(xì)胞和/或組織中snca的敲低。本公開還提供使用本公開的rnai劑組合物用于抑制snca基因的表達(dá)或用于治療將受益于抑制或降低snca基因的表達(dá)的受試者的方法，例如，罹患或易患snca相關(guān)神經(jīng)退化性疾病或病癥的受試者，該疾病或病癥為，例如，pd、多系統(tǒng)萎縮(msa)、路易氏體癡呆(lbd)、單純性自主神經(jīng)衰竭(paf)、皮克氏病、進(jìn)行性核上性麻痹、拳擊員癡呆、與染色體17關(guān)聯(lián)的帕金森氏癥、lytico-bodig氏病、纏結(jié)優(yōu)勢型癡呆、嗜銀顆粒疾病、神經(jīng)節(jié)神經(jīng)膠質(zhì)瘤、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞瘤、腦膜血管瘤病、亞急性硬化性全腦炎、鉛中毒腦病、結(jié)節(jié)性硬化癥、hallervorden-spatz病、脂褐質(zhì)沉積癥、皮質(zhì)基底節(jié)變性、額顳葉癡呆、額顳葉變性、阿爾茲海默病和亨廷頓病。

2、因此，在一個方面，本公開提供一種用于抑制snca的表達(dá)的雙鏈核糖核酸(dsrna)劑，其中該dsrna劑包括具有5'-末端和3'-末端的有義鏈以及具有5'-末端和3'-末端的反義鏈，其中該有義鏈和反義鏈形成雙鏈區(qū)，其中有義鏈包括表3的seq?id?no:150、seq?idno:157、seq?id?no:164或seq?id?no:142-149、151-156、158-163或165-184的核苷酸序列，具有0或1個錯配；dsrna劑的有義鏈包括附接于自有義鏈的5'-末端計數(shù)的位置6或16處的親脂性部分；反義鏈包括表3的seq?id?no:193、seq?id?no:200、seq?id?no:207或seq?idno:185-192、194-199、201-206或208-227的核苷酸序列，具有0或1個錯配；該dsrna劑不包括galnac修飾；并且該dsrna劑包括位于dsrna劑的有義鏈和反義鏈各自的相應(yīng)3'-末端和5'-末端倒數(shù)第二個及最后一個核苷酸間鍵處的八個硫代磷酸酯核苷酸間鍵。

3、因此，在一個方面，本公開提供一種用于抑制snca的表達(dá)的雙鏈核糖核酸(dsrna)劑，其中該dsrna劑包括具有5'-末端和3'-末端的有義鏈以及具有5'-末端和3'-末端的反義鏈，其中該有義鏈和反義鏈形成雙鏈區(qū)，其中：該有義鏈包括表3(seq?id?no:142-184)的核苷酸序列，具有0或1個錯配；該dsrna劑的有義鏈包括附接于自有義鏈的5'-末端計數(shù)的位置6或16處的親脂性部分；該反義鏈包括表3(seq?id?no:185-227)的核苷酸序列，具有0或1個錯配；該dsrna劑不包括galnac修飾；并且該dsrna劑包括六個硫代磷酸酯核苷酸間鍵，其中該六個硫代磷酸酯核苷酸間鍵位于反義鏈的5'端和3'端的倒數(shù)第二個和最后一個核苷酸間鍵處以及有義鏈的5'端的倒數(shù)第二個和最后一個核苷酸間鍵處。

4、在某些實(shí)施方案中，該親脂性部分為脂肪族、脂環(huán)族或多脂環(huán)族化合物。

5、在一些實(shí)施方案中，該親脂性部分為脂質(zhì)、膽固醇、視黃酸、膽酸、金剛烷乙酸、1-芘丁酸、二氫睪酮、1,3-雙-o(十六烷基)甘油、香葉氧基己醇、十六烷基甘油、冰片、薄荷醇、1,3-丙二醇、十七烷基、棕櫚酸、肉豆蔻酸、o3-(油?；?石膽酸、o3-(油?；?膽烯酸、二甲氧基三苯甲基或吩噁嗪。

6、在一個實(shí)施方案中，該親脂性部分含有飽和或不飽和c4-c30烴鏈及由羥基、胺、羧酸、磺酸酯、磷酸酯、硫醇、疊氮化物或炔組成的任選官能團(tuán)。

7、在一些實(shí)施方案中，該親脂性部分含有飽和或不飽和c6-c18烴鏈。任選地，該親脂性部分含有飽和或不飽和c16烴鏈。

8、在一個實(shí)施方案中，該親脂性部分為其中b為核苷酸堿基或核苷酸堿基類似物。任選地，b為腺嘌呤、鳥嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶或尿嘧啶。

9、在某些實(shí)施方案中，該親脂性部分經(jīng)由接頭或載體附接。任選地，該親脂性部分經(jīng)由替代有義鏈的位置6或16處(自該有義鏈的5'-末端核苷酸作為位置1計數(shù))的核苷酸的載體綴合。在相關(guān)實(shí)施方案中，載體為環(huán)狀基團(tuán)(例如，吡咯烷基、吡唑啉基、吡唑烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、哌啶基、哌嗪基、[1,3]二氧雜環(huán)戊烷基、噁唑烷基、異噁唑烷基、嗎啉基、噻唑烷基、異噻唑烷基、喹喔啉基、噠嗪酮基、四氫呋喃基或十氫萘基)或?yàn)榛诮z胺醇主鏈或二乙醇胺主鏈的非環(huán)狀部分。

10、在一些實(shí)施方案中，該親脂性部分經(jīng)由包含醚、硫醚、脲、碳酸酯、胺、酰胺、馬來亞酰胺-硫醚、二硫醚、磷酸二酯、磺酰胺連接、點(diǎn)擊反應(yīng)的產(chǎn)物或氨基甲酸酯的接頭綴合于dsrna劑。

11、在一個實(shí)施方案中，該親脂性部分經(jīng)由生物可裂解接頭綴合于dsrna劑，該接頭為dna、rna、二硫醚、酰胺、半乳糖胺、葡萄糖胺、半乳糖和/或甘露糖官能化的單糖或寡糖，或其組合。

12、在某些實(shí)施方案中，該有義鏈或該反義鏈或兩者的基本上全部的核苷酸為修飾的核苷酸。

13、在一個實(shí)施方案中，該有義鏈的全部核苷酸為修飾的核苷酸。

14、在另一實(shí)施方案中，該反義鏈的全部核苷酸為修飾的核苷酸。

15、在另外的實(shí)施方案中，該有義鏈的全部核苷酸和該反義鏈的全部核苷酸是修飾的核苷酸。

16、在某些實(shí)施方案中，該dsrna劑具有一個或多個修飾的核苷酸，其中該一個或多個修飾的核苷酸中的至少一個為脫氧核苷酸、3'-末端脫氧胸腺嘧啶(dt)核苷酸、2'-o-甲基修飾的核苷酸、2'-氟修飾的核苷酸、2'-脫氧修飾的核苷酸、鎖定的核苷酸、解鎖核苷酸、構(gòu)象限制的核苷酸、約束的乙基核苷酸、無堿基的核苷酸、2'-氨基修飾的核苷酸、2'-o-烯丙基修飾的核苷酸、2'-c-烷基修飾的核苷酸、2'-羥基修飾的核苷酸、2'-甲氧基乙基修飾的核苷酸、2'-o-烷基修飾的核苷酸、嗎啉代核苷酸、氨基磷酸酯、包含非天然堿基的核苷酸、四氫吡喃修飾的核苷酸、1,5-失水己糖醇修飾的核苷酸、環(huán)己烯基修飾的核苷酸、包含5'-硫代磷酸酯基團(tuán)的核苷酸、包含5'-甲基膦酸酯基團(tuán)的核苷酸、包含5'磷酸酯或5'磷酸酯模擬物的核苷酸、包含乙烯基磷酸酯的核苷酸、包含腺苷-二醇核酸(gna)的核苷酸、包含胸苷-二醇核苷(gna)s-異構(gòu)體的核苷酸、包含2-羥甲基-四氫呋喃-5-磷酸酯的核苷酸、包含2'-脫氧胸苷-3’-磷酸的核苷酸、包含2'-脫氧鳥苷-3’-磷酸的核苷酸或連接至膽固醇基衍生物和十二烷酸雙癸基酰胺基團(tuán)的末端核苷酸。

17、在另一實(shí)施方案中，該dsrna劑包括至少一個修飾的核苷酸，該修飾的核苷酸為2'-o-甲基修飾的核苷酸、2'-氟修飾的核苷酸、2'-c16(2'-o-十六烷基)修飾的核苷酸或包括乙烯基磷酸酯的核苷酸。任選地，該dsrna劑包括下列各修飾中的至少一個：2'-o-甲基修飾的核苷酸、2'-氟修飾的核苷酸、2'-c16(2'-o-十六烷基)修飾的核苷酸和包括乙烯基磷酸酯的核苷酸。

18、在某些實(shí)施方案中，dsrna劑還包括在反義鏈的5'-端的磷酸酯或磷酸酯模擬物。任選地，該磷酸酯模擬物為5'-乙烯基膦酸酯(vp)。

19、在一些實(shí)施方案中，dsrna劑包括如表2中所示的修飾核苷酸的模式(其中2'-c16、2'-o-甲基、2'-脫氧、gna、硫代磷酸酯、乙烯基膦酸酯和2'-氟修飾的位置如表2中所顯示，而與所顯示的dsrna劑的單個核苷酸堿基序列無關(guān))。

20、在一個實(shí)施方案中，該dsrna劑具有ad-1804698、ad-1804699、ad-1747575、ad-1747576、ad-1804700、ad-1747577、ad-1747578、ad-1747579、ad-1747580、ad-1747581、ad-1804701、ad-1747582、ad-1804702、ad-1804703、ad-1804704、ad-1747583、ad-1804705、ad-1804706、ad-1804707、ad-1804708、ad-1804709、ad-1747591、ad-1747585、ad-1804710、ad-1804711、ad-1747586、ad-1804712、ad-1747587、ad-1804713、ad-1804714、ad-1747588、ad-1804715、ad-1804716、ad-1804717、ad-1804718、ad-1804719、ad-1804720、ad-1804721、ad-1804722、ad-1804723、ad-1804724、ad-1804725或ad-1804726的有義鏈核苷酸序列。任選地，該dsrna劑具有ad-1747580、ad-1747583或ad-1747585的有義鏈核苷酸序列。

21、在某些實(shí)施方案中，該dsrna劑的有義鏈具有下列修飾模式中的一種：5'-nsnsnnn(nhd)nfnnfnfnfnnnnnnnnsnsn-3'、5'-nsnsnnnnnnnfnfnfnnnn(nhd)nnnsnsn-3'或5'-nsnsnnn(nhd)nnnfnfnfnnnnnnnnsnsn-3'，其中n為2'-o-甲基-核苷酸，s為硫代磷酸酯核苷酸間鍵，nf為2'-氟-核苷酸，并且(nhd)為2'-o-十六烷基-核苷酸。

22、在實(shí)施方案中，該dsrna劑的有義鏈具有下列修飾模式：5'-(l1)(inv)snnnnnnnnnfnfnfnnnnnnnnns(inv)(l2)-3'，其中各(inv)為反向核苷酸(例如，反向無堿基核苷酸，如反向無堿基核糖核苷酸)，以及(l1)和(l2)中的至少一個為包含親脂性基團(tuán)的配體(例如，包含c16烷基或c16烯基)，并且(l1)和(l2)中的另一個不存在或?yàn)闅洹?/p>

23、在一些實(shí)施方案中，該dsrna劑的反義鏈具有下列修飾模式中的一種：5'-vpnsdnsnndnndnnnnndnnnfnnnnnnnsnsn-3'、5'-vpnsnfsnndnn(ngn)nnnnnnnfnnfnnnnnsnsn-3'或5'-vpnsnfsnndnn(n2p)nnnnnnnfnnfnnnnnsnsn-3'，其中vp為乙烯基-膦酸酯，n為2'-o-甲基-核苷酸，s為硫代磷酸酯核苷酸間鍵，dn為2'-脫氧-核苷酸，nf為2'-氟-核苷酸，并且(ngn)為二醇核酸s-異構(gòu)體，并且n2p為2'-磷酸酯核苷酸。

24、在實(shí)施方案中，該dsrna劑的反義鏈具有下列修飾模式中的一種：5'-znsdnsnndnndnnnnndnnnfnnnnnsnsn-3'、5'-znsnfsnndnn(ngn)nnnnnnnfnnfnnnsnsn-3'、5'-znsnfsnnfnnfnnfnnfnnfnnfnnfnnfnsnfsn-3'、5'-znsnfsnnfnnfnnfnnfnnfnnfnnfnnfnsnsn-3'、5'-znsnfsnnfnnfnnnnnnfnnfnnfnnfnsnfsn-3'、5'-znsnfsnsnfnnfnnfnnfnnfnnfnnfnnfnnfsn-3'、5'-znsnfsnsnfnnfnnnnnnfnnfnnfnnfnnfsn-3'或5'-znsnfsnsnfnnfnnfnnfnnfnnfnnfnnfnnsn-3'，其中z為5'-磷酸酯模擬物，如5'-環(huán)丙基膦酸酯(5'-cp)。(如本文中所用，5'-cp的結(jié)構(gòu)為)

25、在某些實(shí)施方案中，該dsrna劑的有義鏈包含修飾模式：5'-nsnsnnn(nhd)nfnnfnfnfnnnnnnnnsnsn-3'；并且反義鏈包含修飾模式：5'-vpnsdnsnndnndnnnnndnnnfnnnnnnnsnsn-3'，其中vp為乙烯基膦酸酯，n為2'-o-甲基-核苷酸，s為硫代磷酸酯核苷酸間鍵，nf為2'-氟-核苷酸，dn為2'-脫氧-核苷酸，并且(nhd)為2'-o-十六烷基-核苷酸。

26、在某些實(shí)施方案中，該dsrna劑的有義鏈包含修飾模式：5'-nsnsnnn(nhd)nfnnfnfnfnnnnnnnnsnsn-3'；并且反義鏈包含修飾模式：5'-vpnsnfsnndnn(ngn)nnnnnnnfnnfnnnnnsnsn-3'，其中vp為乙烯基膦酸酯，n為2'-o-甲基-核苷酸，s為硫代磷酸酯核苷酸間鍵，nf為2'-氟-核苷酸，dn為2'-脫氧-核苷酸，(nhd)為2'-o-十六烷基-核苷酸，并且(ngn)為二醇核酸s-異構(gòu)體。

27、在某些實(shí)施方案中，該dsrna劑的有義鏈包含修飾模式：5'-nsnsnnn(nhd)nfnnfnfnfnnnnnnnnsnsn-3'；并且反義鏈包含修飾模式：5'-vpnsnfsnndnn(n2p)nnnnnnnfnnfnnnnnsnsn-3'，其中vp為乙烯基膦酸酯，n為2'-o-甲基-核苷酸，s為硫代磷酸酯核苷酸間鍵，nf為2'-氟-核苷酸，dn為2'-脫氧-核苷酸，(nhd)為2'-o-十六烷基-核苷酸，(ngn)為二醇核酸s-異構(gòu)體，并且n2p為2'-磷酸酯核苷酸。

28、在某些實(shí)施方案中，該dsrna劑的有義鏈包含修飾模式：5'-nsnsnnnnnnnfnfnfnnnn(nhd)nnnsnsn-3'；并且反義鏈包含修飾模式：5'-vpnsdnsnndnndnnnnndnnnfnnnnnnnsnsn-3'，其中vp為乙烯基膦酸酯，n為2'-o-甲基-核苷酸，s為硫代磷酸酯核苷酸間鍵，nf為2'-氟-核苷酸，dn為2'-脫氧-核苷酸，并且(nhd)為2'-o-十六烷基-核苷酸。

29、在某些實(shí)施方案中，該dsrna劑的有義鏈包含修飾模式：5'-nsnsnnnnnnnfnfnfnnnn(nhd)nnnsnsn-3'；并且反義鏈包含修飾模式：5'-vpnsnfsnndnn(ngn)nnnnnnnfnnfnnnnnsnsn-3'，其中vp為乙烯基膦酸酯，n為2'-o-甲基-核苷酸，s為硫代磷酸酯核苷酸間鍵，nf為2'-氟-核苷酸，dn為2'-脫氧-核苷酸，(nhd)為2'-o-十六烷基-核苷酸，并且(ngn)為二醇核酸s-異構(gòu)體。

30、在某些實(shí)施方案中，該dsrna劑的有義鏈包含修飾模式：5'-nsnsnnnnnnnfnfnfnnnn(nhd)nnnsnsn-3'；并且反義鏈包含修飾模式：5'-vpnsnfsnndnn(n2p)nnnnnnnfnnfnnnnnsnsn-3'，其中vp為乙烯基膦酸酯，n為2'-o-甲基-核苷酸，s為硫代磷酸酯核苷酸間鍵，nf為2'-氟-核苷酸，dn為2'-脫氧-核苷酸，(nhd)為2'-o-十六烷基-核苷酸，(ngn)為二醇核酸s-異構(gòu)體，并且n2p為2'-磷酸酯核苷酸。

31、在某些實(shí)施方案中，該dsrna劑的有義鏈包含修飾模式：5'-nsnsnnn(nhd)nnnfnfnfnnnnnnnnsnsn-3'；并且反義鏈包含修飾模式：5'-vpnsdnsnndnndnnnnndnnnfnnnnnnnsnsn-3'，其中vp為乙烯基膦酸酯，n為2'-o-甲基-核苷酸，s為硫代磷酸酯核苷酸間鍵，nf為2'-氟-核苷酸，dn為2'-脫氧-核苷酸，(nhd)為2'-o-十六烷基-核苷酸，并且(ngn)為二醇核酸s-異構(gòu)體。

32、在某些實(shí)施方案中，該dsrna劑的有義鏈包含修飾模式：5'-nsnsnnn(nhd)nnnfnfnfnnnnnnnnsnsn-3'；并且反義鏈包含修飾模式：5'-vpnsnfsnndnn(ngn)nnnnnnnfnnfnnnnnsnsn-3'，其中vp為乙烯基膦酸酯，n為2'-o-甲基-核苷酸，s為硫代磷酸酯核苷酸間鍵，nf為2'-氟-核苷酸，dn為2'-脫氧-核苷酸，(nhd)為2'-o-十六烷基-核苷酸，并且(ngn)為二醇核酸s-異構(gòu)體。

33、在某些實(shí)施方案中，該dsrna劑的有義鏈包含修飾模式：5'-nsnsnnn(nhd)nnnfnfnfnnnnnnnnsnsn-3'；并且反義鏈包含修飾模式：5'-vpnsnfsnndnn(n2p)nnnnnnnfnnfnnnnnsnsn-3'，其中vp為乙烯基膦酸酯，n為2'-o-甲基-核苷酸，s為硫代磷酸酯核苷酸間鍵，nf為2'-氟-核苷酸，dn為2'-脫氧-核苷酸，(nhd)為2'-o-十六烷基-核苷酸，(ngn)為二醇核酸s-異構(gòu)體，并且n2p為2'-磷酸酯核苷酸。

34、本公開的另一方面提供一種用于抑制snca的表達(dá)的dsrna劑，其中該dsrna劑包括具有5'-末端和3'-末端的有義鏈以及具有5'-末端和3'-末端的反義鏈，其中該有義鏈和反義鏈形成雙鏈區(qū)，其中：該有義鏈包括表2(seq?id?no:13至55)的核苷酸序列及修飾，具有0或1個錯配；并且反義鏈包括表2(seq?id?no:56至98)的核苷酸序列及修飾，具有0或1個錯配。

35、在一個實(shí)施方案中，該dsrna劑具有下列有義鏈核苷酸序列中的一個：5'-asasgug(chd)ucafgfufuccaaugusgsa-3'(seq?id?no:35)、5'-uscsuuugcucfcfcfaguu(uhd)cuusgsa-3'(seq?id?no:28)、5'-gsasgca(ahd)gugfafcfaaauguugsgsa-3'(seq?id?no:21)、5'-gsusaca(ahd)gfugfcfufcaguuccasasa-3'(seq?id?no:34)、5'-cscsauc(ahd)gcafgfufgauugaagsusa-3'(seq?id?no:43)、5'-uscsccag(uhd)uufcfufugagaucusgsa-3'(seq?id?no:261)或5'-uscsaug(ahd)aagfgfafcuuucaaasgsa-3'(seq?id?no:19)，其中a為2'-o-甲基腺苷-3’-磷酸，u為2'-o-甲基尿苷-3’-磷酸，g為2'-o-甲基鳥苷-3’-磷酸，c為2'-o-甲基胞苷-3’-磷酸，s為硫代磷酸酯核苷酸間鍵，af為2'-氟腺苷-3’-磷酸，gf為2'-氟鳥苷-3’-磷酸，uf為2'-氟尿苷-3’-磷酸，cf為2'-氟胞苷-3’-磷酸，(ahd)為2'-o-十六烷基腺苷-3’-磷酸，(uhd)為2'-o-十六烷基尿苷-3’-磷酸，并且(chd)為2'-o-十六烷基胞苷-3’-磷酸。

36、在另一實(shí)施方案中，該dsrna劑具有下列反義鏈核苷酸序列中的一個：5'-vpusdcsacdaudtggaadcugfagcacuusgsu-3'(seq?id?no:78)、5'-vpusdcsaadgadaacugdggafgcaaagasusa-3'(seq?id?no:71)、5'-vpusdcscadacdauuugdtcafcuugcucsusu-3'(seq?id?no:64)、5'-vpusufsugdga(agn)cugagcafcufuguacsasg-3'(seq?id?no:77)、5'-vpusdascudtcdaaucadcugfcugauggsasa-3'(seq?id?no:86)、5'-vpusdcsagdaudcucaadgaafacugggasgsc-3'(seq?id?no:262)或5'-vpusdcsuudtgdaaagudccufuucaugasasu-3'(seq?id?no:62)，其中vp為乙烯基膦酸酯，a為2'-o-甲基腺苷-3’-磷酸，u為2'-o-甲基尿苷-3’-磷酸，g為2'-o-甲基鳥苷-3’-磷酸，c為2'-o-甲基胞苷-3’-磷酸，s為硫代磷酸酯核苷酸間鍵，af為2'-氟腺苷-3’-磷酸，gf為2'-氟鳥苷-3’-磷酸，uf為2'-氟尿苷-3’-磷酸，cf為2'-氟胞苷-3’-磷酸，da為2'-脫氧腺苷-3’-磷酸，dc為2'-脫氧胞苷-3’-磷酸，dg為2'-脫氧鳥苷-3’-磷酸，dt為2'-脫氧胸苷-3’-磷酸，并且(agn)為腺苷-二醇核酸(gna)s-異構(gòu)體。

37、在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，該dsrna劑具有下列核苷酸序列的雙鏈體對中的一種：(i)有義鏈：5'-asasgug(chd)ucafgfufuccaaugusgsa-3'(seq?id?no:35)和反義鏈：5'-vpusdcsacdaudtggaadcugfagcacuusgsu-3'(seq?id?no:78)；(ii)有義鏈：5'-uscsuuugcucfcfcfaguu(uhd)cuusgsa-3'(seq?id?no:28)和反義鏈：5'-vpusdcsaadgadaacugdggafgcaaagasusa-3'(seq?id?no:71)；(iii)有義鏈：5'-gsasgca(ahd)gugfafcfaaauguugsgsa-3'(seq?id?no:21)和反義鏈：5'-vpusdcscadacdauuugdtcafcuugcucsusu-3'(seq?id?no:64)；(iv)有義鏈：5'-gsusaca(ahd)gfugfcfufcaguuccasasa-3'(seq?id?no:34)和反義鏈：5'-vpusufsugdga(agn)cugagcafcufuguacsasg-3'(seq?id?no:77)；(v)有義鏈：5'-cscsauc(ahd)gcafgfufgauugaagsusa-3'(seq?id?no:43)和反義鏈：5'-vpusdascudtcdaaucadcugfcugauggsasa-3'(seq?id?no:86)；(vi)有義鏈：5'-uscsccag(uhd)uufcfufugagaucusgsa-3'(seq?id?no:261)和反義鏈：5'-vpusdcsagdaudcucaadgaafacugggasgsc-3'(seq?id?no:262)；或(vii)有義鏈：5'-uscsaug(ahd)aagfgfafcuuucaaasgsa-3'(seq?id?no:19)和反義鏈：5'-vpusdcsuudtgdaaagudccufuucaugasasu-3'(seq?id?no:62)，其中vp為乙烯基膦酸酯，a為2'-o-甲基腺苷-3’-磷酸，u為2'-o-甲基尿苷-3’-磷酸，g為2'-o-甲基鳥苷-3’-磷酸，c為2'-o-甲基胞苷-3’-磷酸，s為硫代磷酸酯核苷酸間鍵，af為2'-氟腺苷-3’-磷酸，gf為2'-氟鳥苷-3’-磷酸，uf為2'-氟尿苷-3’-磷酸，cf為2'-氟尿苷-3’-磷酸，da為2'-脫氧腺苷-3’-磷酸，dc為2'-脫氧胞苷-3’-磷酸，dg為2'-脫氧鳥苷-3’-磷酸，dt為2'-脫氧胸苷-3’-磷酸，(agn)為腺苷-二醇核酸(gna)s-異構(gòu)體，(ahd)為2'-o-十六烷基腺苷-3’-磷酸，(uhd)為2'-o-十六烷基尿苷-3’-磷酸，并且(chd)為2'-o-十六烷基胞苷-3’-磷酸。

38、本公開的另外的方面提供一種用于抑制snca的表達(dá)的dsrna劑，該dsrna劑具有有義鏈序列5'-asasgug(chd)ucafgfufuccaaugusgsa-3'(seq?id?no:35)和反義鏈序列5'-vpusdcsacdaudtggaadcugfagcacuusgsu-3'(seq?id?no:78)，其中vp為乙烯基膦酸酯，a為2'-o-甲基腺苷-3’-磷酸，u為2'-o-甲基尿苷-3’-磷酸，g為2'-o-甲基鳥苷-3’-磷酸，c為2'-o-甲基胞苷-3’-磷酸，s為硫代磷酸酯核苷酸間鍵，af為2'-氟腺苷-3’-磷酸，gf為2'-氟鳥苷-3’-磷酸，uf為2'-氟尿苷-3’-磷酸，da為2'-脫氧腺苷-3’-磷酸，dc為2'-脫氧胞苷-3’-磷酸，dt為2'-脫氧胸苷-3’-磷酸，并且(chd)為2'-o-十六烷基胞苷-3’-磷酸。

39、本公開的另一方面提供一種用于抑制snca的表達(dá)的dsrna劑，該dsrna劑具有有義鏈序列5'-uscsuuugcucfcfcfaguu(uhd)cuusgsa-3'(seq?id?no:28)和反義鏈序列5'-vpusdcsaadgadaacugdggafgcaaagasusa-3'(seq?id?no:71)，其中vp為乙烯基膦酸酯，a為2'-o-甲基腺苷-3’-磷酸，u為2'-o-甲基尿苷-3’-磷酸，g為2'-o-甲基鳥苷-3’-磷酸，c為2'-o-甲基胞苷-3’-磷酸，s為硫代磷酸酯核苷酸間鍵，af為2'-氟腺苷-3’-磷酸，cf為2'-氟胞苷-3’-磷酸，da為2'-脫氧腺苷-3’-磷酸，dc為2'-脫氧胞苷-3’-磷酸，dg為2'-脫氧鳥苷-3’-磷酸，并且(uhd)為2'-o-十六烷基尿苷-3’-磷酸。

40、本公開的進(jìn)一步方面提供一種用于抑制snca的表達(dá)的dsrna劑，該dsrna劑具有有義鏈序列5'-gsasgca(ahd)gugfafcfaaauguugsgsa-3'(seq?id?no:21)和反義鏈序列5'-vpusdcscadacdauuugdtcafcuugcucsusu-3'(seq?id?no:64)，其中vp為乙烯基膦酸酯，a為2'-o-甲基腺苷-3’-磷酸，u為2'-o-甲基尿苷-3’-磷酸，g為2'-o-甲基鳥苷-3’-磷酸，c為2'-o-甲基胞苷-3’-磷酸，s為硫代磷酸酯核苷酸間鍵，af為2'-氟腺苷-3’-磷酸，gf為2'-氟鳥苷-3’-磷酸，cf為2'-氟胞苷-3’-磷酸，da為2'-脫氧腺苷-3’-磷酸，dc為2'-脫氧胞苷-3’-磷酸，dt為2'-脫氧胸苷-3’-磷酸，并且(ahd)為2'-o-十六烷基腺苷-3’-磷酸。

41、在另一實(shí)施方案中，該rnai劑為其藥學(xué)上可接受的鹽。本文的各rnai劑的“藥學(xué)上可接受的鹽”包括但不限于，鈉鹽、鈣鹽、鋰鹽、鉀鹽、銨鹽、鎂鹽及其混合物。本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解，rnai劑可作為多陽離子鹽提供，其具有任選地修飾的磷酸二酯主鏈和/或任何其他酸性修飾的每個游離酸基團(tuán)(例如，5'-末端磷酸酯基團(tuán))的一個陽離子。例如，“n”個核苷酸長度的寡核苷酸含有n-1個任選地修飾的磷酸二酯，使得21nt長度的寡核苷酸可提供為具有至多20個陽離子(例如，20個鈉陽離子)的鹽。類似地，具有21nt長度的有義鏈和23nt長度的反義鏈的rnai劑可提供為具有至多42個陽離子(例如，42個鈉離子)的鹽。在前述實(shí)例中，在該rnai劑還包括5'-末端磷酸酯或5'-末端乙烯基膦酸酯基團(tuán)的情況下，該rnai劑可提供為具有至多44個陽離子(例如，44個鈉陽離子)的鹽。

42、本公開的另一方面提供含有本文所公開的dsrna劑的細(xì)胞。

43、本公開的另外的方面提供一種用于抑制α-突觸核蛋白的表達(dá)的藥物組合物，該藥物組合物包括本文所公開的dsrna劑。

44、在某些實(shí)施方案中，該dsrna劑和/或藥物組合物在非緩沖溶液中施用。任選地，非緩沖溶液為鹽水或水。

45、在一些實(shí)施方案中，該dsrna劑與緩沖溶液一起施用。任選地，緩沖溶液包括乙酸鹽、檸檬酸鹽、醇溶谷蛋白、碳酸鹽或磷酸鹽，或其組合。在某些實(shí)施方案中，緩沖溶液為磷酸鹽緩沖鹽水(pbs)。

46、本公開的進(jìn)一步方面提供一種藥物組合物，其包括本文所公開的dsrna劑及脂質(zhì)制劑。

47、在一個實(shí)施方案中，該脂質(zhì)制劑包括或者為脂質(zhì)納米顆粒(lnp)。

48、本公開的另一方面提供一種抑制細(xì)胞中α-突觸核蛋白(snca)基因的表達(dá)和/或預(yù)防細(xì)胞或受試者中α-突觸核蛋白聚集體的形成的方法，該方法包括：(a)使細(xì)胞或受試者與本文所公開的drna劑或藥物組合物接觸；以及(b)將步驟(a)中產(chǎn)生的細(xì)胞或受試者維持足以獲得snca基因的mrna轉(zhuǎn)錄物降解的時間，從而抑制該細(xì)胞中snca基因的表達(dá)和/或預(yù)防細(xì)胞或受試者中α-突觸核蛋白聚集體的形成。

49、在一個實(shí)施方案中，細(xì)胞處于受試者體內(nèi)。任選地，受試者為人類?；蛘?，受試者為恒河猴、食蟹猴、小鼠或大鼠。

50、在某些實(shí)施方案中，人類受試者罹患snca相關(guān)疾病。任選地，snca相關(guān)疾病為突觸核蛋白病。任選地，該突觸核蛋白病為pd、多系統(tǒng)萎縮(msa)、路易氏體癡呆(lbd)、單純性自主神經(jīng)衰竭(paf)、皮克氏病、進(jìn)行性核上性麻痹、拳擊員癡呆、與染色體17關(guān)聯(lián)的帕金森氏癥、lytico-bodig氏病、纏結(jié)優(yōu)勢型癡呆、嗜銀顆粒疾病、神經(jīng)節(jié)神經(jīng)膠質(zhì)瘤、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞瘤、腦膜血管瘤病、亞急性硬化性全腦炎、鉛中毒腦病、結(jié)節(jié)性硬化癥、hallervorden-spatz病、脂褐質(zhì)沉積癥、皮質(zhì)基底節(jié)變性、額顳葉癡呆、額顳葉變性、阿爾茲海默病、亨廷頓病、唐氏綜合征、精神錯亂、精神分裂癥和/或克雅氏病。

51、在一些實(shí)施方案中，與對照細(xì)胞或?qū)φ帐茉囌呦啾?，該?xì)胞或受試者中的snca表達(dá)被dsrna劑抑制至少約50％、至少約40％、至少約30％、至少約20％或至少約10％。

52、本公開的另外的方面提供一種治療被診斷為患有snca相關(guān)神經(jīng)退化性疾病的受試者的方法，該方法涉及向該受試者施用治療有效量的本文所公開的dsrna劑或藥物組合物，任選地其中該受試者用治療有效量的本文所公開的dsrna劑或藥物組合物重新給藥，從而治療該受試者。

53、在某些實(shí)施方案中，治療包括snca相關(guān)神經(jīng)退化性疾病的至少一種體征或癥狀的改善。

54、在一些實(shí)施方案中，治療包括預(yù)防疾病的進(jìn)展。

55、在一個實(shí)施方案中，snca相關(guān)神經(jīng)退化性疾病的特征為下列癥狀中的一種或多種：震顫、緩慢運(yùn)動(動作遲緩)、肌肉僵硬、姿勢和平衡受損、自發(fā)運(yùn)動的損失、語音變化、字跡變化、幻視、幻聽、幻嗅、幻觸、身體機(jī)能(自主神經(jīng)系統(tǒng))調(diào)節(jié)不良如暈眩、跌倒和腸問題、認(rèn)知問題如意識模糊、注意力不集中、視空間問題及記憶力損失、睡眠困難如快速眼動(rem)睡眠行為障礙(其中夢在睡眠時以身體表現(xiàn)出來)、注意力波動(包括嗜睡發(fā)作、長時間凝視空處、白天長時間小睡或言語紊亂、抑郁及冷漠)、直立性低血壓(當(dāng)人站起時發(fā)生血壓的突然下降，導(dǎo)致人感覺暈眩和頭暈，并且需要坐、蹲或躺下以便防止昏迷)、動作笨拙或不協(xié)調(diào)、膀胱控制問題、手或肢的攣縮(關(guān)節(jié)周圍的肌肉或肌腱的慢性縮短，其阻止關(guān)節(jié)自由動作)、pisa綜合征(其中身體表現(xiàn)為向一側(cè)傾斜的異常姿勢)、頸項前屈(其中頸部向前彎曲且頭部下垂)以及不由自主且不可控制的嘆息或喘息。

56、在某些實(shí)施方案中，該dsrna劑以約0.01mg/kg至約50mg/kg的劑量向受試者施用。

57、在一些實(shí)施方案中，該dsrna劑或藥物組合物向受試者鞘內(nèi)施用。

58、在一個實(shí)施方案中，該方法還涉及向受試者施用適用于治療或預(yù)防snca相關(guān)神經(jīng)退化性疾病或病癥的另外的藥劑或療法。

59、在某些實(shí)施方案中，該snca相關(guān)神經(jīng)退化性疾病為帕金森氏病(pd)。

60、在一個實(shí)施方案中，該snca相關(guān)神經(jīng)退化性疾病為路易氏體癡呆(lbd)或多系統(tǒng)萎縮(msa)。

61、在一些實(shí)施方案中，snca表達(dá)被抑制至少約30％。

62、在另一實(shí)施方案中，該方法還涉及向受試者施用另外的治療劑。

63、在某些實(shí)施方案中，該方法降低腦或脊髓組織中的snca的表達(dá)。任選地，該腦或脊髓組織為腦皮層、小腦、基底節(jié)、海馬、杏仁核、丘腦、腦干、頸部脊髓、腰部脊髓和/或胸部脊髓。

64、本公開的另一方面提供一種抑制受試者中snca的表達(dá)的方法，該方法涉及向該受試者施用治療有效量的本文所公開的dsrna劑或藥物組合物，從而抑制該受試者中的snca的表達(dá)。

65、本公開的另外的方面提供一種用于治療或預(yù)防受試者的snca相關(guān)疾病的方法，該方法涉及向受試者施用治療有效量的本文所公開的dsrna劑或藥物組合物，從而治療或預(yù)防受試者的snca相關(guān)疾病。

66、在某些實(shí)施方案中，施用步驟在受試者的一個或多個組織中產(chǎn)生snca?mrna或α-突觸核蛋白的至少60％敲低。任選地，該受試者的一個或多個組織包括csf、前額葉皮質(zhì)、中腦、胸椎、海馬、髓質(zhì)腦橋、紋狀體尾狀核和/或小腦。

67、本公開的進(jìn)一步方面提供一種用于進(jìn)行本文所公開的方法的試劑盒，該試劑盒包括本文所公開的dsrna劑及其使用說明。任選地，該試劑盒還包括用于向受試者施用該dsrna劑的裝置。

68、定義

69、為了更容易地理解本公開，首先定義某些術(shù)語。此外，應(yīng)注意，無論何時陳述參數(shù)的數(shù)值或數(shù)值范圍，處于所述的值中間的值和范圍也旨在作為本公開的部分。

70、在此使用冠詞“一個”和“一”是指一個或多于一個(即，至少一個)該冠詞的語法對象。通過舉例，“一個元件”意指一個元件或多于一個元件，例如多個元件。

71、在此使用術(shù)語“包括”意指短語“包括但不限于”，并且可與該短語互換使用。

72、在此使用術(shù)語“或”意指術(shù)語“和/或”，并且可與該術(shù)語互換使用，除非上下文清楚地另外指明。

73、術(shù)語“約”在本文中用于指在本領(lǐng)域的典型公差范圍內(nèi)。例如，“約”可以被理解為平均值的約2個標(biāo)準(zhǔn)偏差。在某些實(shí)施方案中，“約”意指+10％。在某些實(shí)施方案中，“約”意指+5％。當(dāng)“約”存在于一系列數(shù)字或范圍之前時，應(yīng)當(dāng)理解“約”可以修飾所述系列或范圍中的數(shù)字中的每個數(shù)字。

74、在數(shù)字或一系列數(shù)字之前的術(shù)語“至少”應(yīng)理解為包括與術(shù)語“至少”相鄰的數(shù)字，以及邏輯上可包括的所有后續(xù)數(shù)字或整數(shù)，如從上下文清楚的。例如，核酸分子中的核苷酸數(shù)目必須是整數(shù)。例如，“21個核苷酸的核酸分子的至少18個核苷酸”是指18、19、20或21個核苷酸具有指定的性質(zhì)。當(dāng)“至少”存在于一系列數(shù)字或范圍之前時，應(yīng)理解“至少”可以修飾該系列或范圍中的每個數(shù)字。

75、如本文使用的，“不大于”或“小于”被理解為與該短語相鄰的值以及邏輯上較低的值或整數(shù)，如從上下文的邏輯理解的，直至零。例如，具有“不超過2個核苷酸”的突出端的雙鏈體具有2、1或0個核苷酸的突出端。當(dāng)在一系列數(shù)字或范圍之前存在“不多于”時，應(yīng)理解“不多于”可以修飾該系列或范圍中的每個數(shù)字。如本文所使用的，范圍包括上限和下限兩者。

76、如本文所使用的，檢測方法可包括確定存在的分析物的量低于該方法的檢測水平。

77、在所示靶位點(diǎn)與有義或反義鏈的核苷酸序列之間沖突的情況下，所示序列優(yōu)先。

78、在化學(xué)結(jié)構(gòu)與化學(xué)名稱之間沖突的情況下，以化學(xué)結(jié)構(gòu)為準(zhǔn)。

79、術(shù)語“snca”、“α-突觸核蛋白”、“突觸核蛋白α”或“alpha-突觸核蛋白”指與稱為“突觸核蛋白病”的神經(jīng)退化性疾病相關(guān)的基因以及由該基因編碼的蛋白質(zhì)。人類snca基因區(qū)域覆蓋大約114kb。snca轉(zhuǎn)錄物含有13個外顯子，且15種mrna亞型已鑒定或以其他方式預(yù)測為產(chǎn)生的。snca的核苷酸和氨基酸序列可見于，例如，genbank登錄號nm_007308.3(人類(homo?sapiens)snca，seq?id?no:1，反向互補(bǔ)序列seq?id?no:2)；genbank登錄號：xm_005555421(食蟹猴(macaca?fascicularis)snca，seq?id?no:3，反向互補(bǔ)序列seq?id?no:4)；genbank登錄號：nm_009221(小鼠(mus?musculus)snca，seq?id?no:5，反向互補(bǔ)序列seqid?no:6)；genbank登錄號nm_019169.2(大鼠(rattus?norvegicus)snca,seq?id?no:7，反向互補(bǔ)序列seq?id?no:8)及genbank登錄號：xm_535656.7(家犬(canis?lupusfamiliaris)snca，seq?id?no:228，反向互補(bǔ)序列seq?id?no:229)。

80、如本文所用，術(shù)語“snca”也指snca基因的變型，包括所提供的天然存在的序列變體，例如，亞型1轉(zhuǎn)錄物nm_000345.4(seq?id?no:232)，其編碼多肽np_000336.1；亞型2轉(zhuǎn)錄物nm_001146054.2(seq?id?no:230)，其編碼多肽np_001139526.1；亞型3轉(zhuǎn)錄物nm_001146055.2(seq?id?no:231)，其編碼多肽np_001139527.1；如上文所述的亞型4轉(zhuǎn)錄物nm_007308.3(seq?id?no:1)，其編碼多肽np_009292.1；亞型5轉(zhuǎn)錄物nm_001375285.1(seqid?no:233)，其編碼多肽np_001362214.1；亞型6轉(zhuǎn)錄物nm_001375286.1(seq?id?no:234)，其編碼多肽np_001362215.1；亞型7轉(zhuǎn)錄物nm_001375287.1(seq?id?no:235)，其編碼多肽np_001362216.1；亞型8轉(zhuǎn)錄物nm_001375288.1(seq?id?no:236)，其編碼多肽np_001362217.1；亞型9轉(zhuǎn)錄物nm_001375290.1(seq?id?no:237)，其編碼多肽np_001362219.1；以及預(yù)測的亞型x1轉(zhuǎn)錄物xm_011532203.1(seq?id?no:238)，其編碼多肽xp_011530505.1；預(yù)測的亞型x2轉(zhuǎn)錄物xm_011532204.3(seq?id?no:239)，其編碼多肽xp_011530506.1；預(yù)測的亞型x3轉(zhuǎn)錄物xm_011532205.2(seq?id?no:240)，其編碼多肽xp_011530507.1；預(yù)測的亞型x4轉(zhuǎn)錄物xm_011532206.1(seq?id?no:241)，其編碼多肽xp_011530508.1；預(yù)測的亞型x5轉(zhuǎn)錄物xm_011532207.1(seq?id?no:242)，其編碼多肽xp_011530509.1；及預(yù)測的亞型x8轉(zhuǎn)錄物xm_017008563.1(seq?id?no:243)，其編碼多肽xp_016864052.1(與前述各登錄號相關(guān)的獨(dú)特序列通過引用以其在本技術(shù)提交日時可獲得的形式并入本文)。snca序列的額外實(shí)例可見于公開可得的數(shù)據(jù)庫，例如，genbank、omim、uniprot、ncbi?dbsnp(參見，例如，www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/6622)及macaca基因組項目網(wǎng)址(macaque.genomics.org.cn/page/species/index.jsp)。關(guān)于snca的額外信息可見于，例如，www.ncbi.nlm.nih.gov/gene/6622。至本技術(shù)提交之日，前述各genbank登錄號及基因數(shù)據(jù)庫編號的整體內(nèi)容通過引用并入本文。

81、α-突觸核蛋白的三種蛋白質(zhì)異形體描述于uniprot中。最長的α-突觸核蛋白異形體為大約14kda的蛋白質(zhì)(異形體1uniprot，140個氨基酸的p37840)。uniprot中的其他α-突觸核蛋白異形體包括：異形體2-4，112個氨基酸的p37840-2；及異形體2-5，126個氨基酸的p37840-3。140個氨基酸的α-突觸核蛋白由映射至染色體位點(diǎn)4q21.3-q22的5個外顯子對編碼。α-突觸核蛋白具有由不完全kxkegv(seq?id?no:244)基序構(gòu)成的n末端區(qū)域、極度疏水的nac結(jié)構(gòu)域和高酸性c末端結(jié)構(gòu)域。在生理條件下，據(jù)信snca為固有無序的單體或螺旋折疊的四聚體。α-突觸核蛋白占腦細(xì)胞的細(xì)胞溶質(zhì)中所有蛋白質(zhì)的1％，并且主要在新皮質(zhì)、海馬、黑質(zhì)、丘腦和小腦中表達(dá)。α-突觸核蛋白也以較低量在心臟、骨骼肌、胰腺、淋巴及血細(xì)胞中表達(dá)。盡管尚未充分理解snca的功能，但有證據(jù)表明，其在維持突觸前末梢中突觸囊泡的充足供應(yīng)中發(fā)揮重要作用。通過調(diào)節(jié)p53表達(dá)和促凋亡基因的反式激活兩者的抑制，α-突觸蛋白涉及多巴胺釋放和轉(zhuǎn)運(yùn)的調(diào)節(jié)、微管相關(guān)蛋白tau的原纖維化及非多巴胺能神經(jīng)元中神經(jīng)保護(hù)表型的調(diào)節(jié)，從而導(dǎo)致減少的半胱天冬酶-3激活。α-突觸核蛋白通過其誘導(dǎo)神經(jīng)退化性疾病如帕金森氏病、路易氏體癡呆和多系統(tǒng)萎縮的主要機(jī)制表現(xiàn)為α-突觸核蛋白的水平升高，從而產(chǎn)生α-突觸核蛋白原纖維聚集體。

82、如本文中所用，“靶序列”是指在snca基因的轉(zhuǎn)錄過程中形成的mrna分子的核苷酸序列的連續(xù)部分，包括作為初級轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的rna加工產(chǎn)物的mrna。在一個實(shí)施方案中，序列的靶標(biāo)部分至少足夠長以用作在snca基因的轉(zhuǎn)錄過程中形成的mrna分子的核苷酸序列的該部分處或附近rnai指導(dǎo)切割的底物。在一個實(shí)施方案中，靶序列在snca基因的蛋白質(zhì)編碼區(qū)域內(nèi)。在另一實(shí)施方案中，靶序列在snca基因的3'-utr內(nèi)。

83、靶序列可為約9至36個核苷酸的長度，例如，約15至30個核苷酸的長度。例如，靶序列可為約15至30個核苷酸的長度，如15至29、15至28、15至27、15至26、15至25、15至24、15至23、15至22、15至21、15至20、15至19、15至18、15至17、18至30、18至29、18至28、18至27、18至26、18至25、18至24、18至23、18至22、18至21、18至20、19至30、19至29、19至28、19至27、19至26、19至25、19至24、19至23、19至22、19至21、19至20、20至30、20至29、20至28、20至27、20至26、20至25、20至24、20至23、20至22、20至21、21至30、21至29、21至28、21至27、21至26、21至25、21至24、21至23或21至22個核苷酸的長度。在一些實(shí)施方案中，靶序列為約19至約30個核苷酸的長度。在其他實(shí)施方案中，靶序列為約19至約25個核苷酸的長度。在再其他的實(shí)施方案中，靶序列為約19至約23個核苷酸的長度。在一些實(shí)施方案中，靶序列為約21至約23個核苷酸的長度。上文述及的范圍和長度中間的范圍和長度也考慮為本公開的部分。

84、如本文所使用的，術(shù)語“包含序列的鏈”是指包含核苷酸的鏈的寡核苷酸，該核苷酸鏈通過使用標(biāo)準(zhǔn)核苷酸命名法提到的順序來描述。

85、在修飾或未修飾的核苷酸的情況中，“g”、“c”、“a”、“t”和“u”各自通常代表分別含有鳥嘌呤、胞嘧啶、腺嘌呤、胸腺嘧啶和尿嘧啶作為堿基的核苷酸。然而，將理解的是，術(shù)語“核糖核苷酸”或“核苷酸”還可以指如下進(jìn)一步詳細(xì)描述的修飾的核苷酸、或代理替代部分(參見，例如表1)。技術(shù)人員應(yīng)很好地認(rèn)識到，鳥嘌呤、胞嘧啶、腺嘌呤、胸腺嘧啶和尿嘧啶可以被其他部分替代而基本上不改變包含攜帶這種替代部分的核苷酸的寡核苷酸的堿基配對特性。例如而非限制性地，包含肌苷作為其堿基的核苷酸可以與含有腺嘌呤、胞嘧啶或尿嘧啶的核苷酸進(jìn)行堿基配對。因此，含有尿嘧啶、鳥嘌呤或腺嘌呤的核苷酸可以在本公開中所述的dsrna的核苷酸序列中由含有例如肌苷的核苷酸替代。在另一個實(shí)例中，寡核苷酸中任何地方的腺嘌呤和胞嘧啶可以分別地由鳥嘌呤和尿嘧啶替換，以形成與靶mrna的g-u搖擺堿基配對。含有這類替代部分的序列適用于在本公開中所述的組合物和方法。

86、如在此可互換使用的術(shù)語“irna”、“rnai劑”、“irna劑”、“rna干擾劑”是指含有如該術(shù)語在此定義的rna的試劑，并且其通過rna誘導(dǎo)沉默復(fù)合體(risc)途徑介導(dǎo)rna轉(zhuǎn)錄物的靶向切割。rna干擾(rnai)是指導(dǎo)mrna的序列特異性降解的過程。rnai調(diào)節(jié)(例如抑制)細(xì)胞(例如受試者如哺乳動物受試者體內(nèi)的細(xì)胞)中snca的表達(dá)。

87、在一個實(shí)施方案中，本公開的rnai劑包括單鏈rnai，其與靶rna序列例如snca靶mrna序列相互作用以指導(dǎo)靶rna的切割。不希望受限于理論，據(jù)信引入細(xì)胞內(nèi)的長雙鏈rna通過被稱為dicer的iii型核酸內(nèi)切酶降解為包含有義鏈和反義鏈的雙鏈短干擾rna(sirna)(sharp?et?al.(2001)genes?dev.15:485)。dicer(核糖核酸酶iii樣酶)使這些dsrna加工成具有特征性的兩個堿基的3'突出端的19-23個堿基對短干擾rna(bernstein等(2001)nature?409:363)。然后將這些sirna并入rna誘導(dǎo)沉默復(fù)合體(risc)中，其中一種或多種解旋酶使sirna雙鏈體展開，從而使互補(bǔ)反義鏈能夠指導(dǎo)靶標(biāo)識別(nykanen等(2001)cell?107:309)。當(dāng)結(jié)合至適當(dāng)?shù)陌衜rna時，risc內(nèi)的一種或多種核酸內(nèi)切酶切割靶標(biāo)以誘導(dǎo)沉默(elbashir等(2001)genes?dev.15:188)。因此，在一個方面中，本公開涉及在細(xì)胞內(nèi)產(chǎn)生的單鏈rna(ssrna)(sirna雙鏈體的反義鏈)并且該單鏈rna促進(jìn)risc復(fù)合體的形成以實(shí)現(xiàn)靶基因(即snca基因)的沉默。因此，術(shù)語“sirna”在本文中還用于指如上所述的rnai。

88、在另一實(shí)施方案中，rnai劑可以是引入到細(xì)胞或生物體中以抑制靶mrna的單鏈rna。單鏈rnai劑結(jié)合risc核酸內(nèi)切酶(argonaute?2)，然后其切割靶mrna。單鏈sirna通常是15-30個核苷酸并且是化學(xué)修飾的。單鏈rna的設(shè)計和測試被描述于美國專利號8,101,348和lima等(2012)cell?150:883-894中，這些參考文獻(xiàn)中每一個的全部內(nèi)容特此通過引用結(jié)合在此。本文描述的任何反義核苷酸序列可以被用作如本文所描述或如通過描述于lima等(2012)cell?150:883-894中的方法化學(xué)修飾的單鏈sirna。

89、在另一實(shí)施方案中，用于本公開的組合物和方法中的“rnai劑”是雙鏈rna，并且在此稱為“雙鏈rnai劑”、“雙鏈rna(dsrna)分子”、“dsrna劑”或“dsrna”。術(shù)語“dsrna”是指核糖核酸分子的復(fù)合體，其具有包含兩個反平行和基本上互補(bǔ)的核酸鏈的雙鏈體結(jié)構(gòu)，稱為相對于靶rna(即snca基因)具有“有義”和“反義”取向。在本公開的一些實(shí)施方案中，雙鏈rna(dsrna)通過在此稱為rna干擾或rnai的轉(zhuǎn)錄后基因沉默機(jī)制來引發(fā)靶rna(例如mrna)的降解。

90、通常，dsrna分子可包括核糖核苷酸，但如本文中所詳述的，各鏈或兩條鏈也可包括一個或多個非核糖核苷酸，例如，脫氧核糖核苷酸和/或修飾的核苷酸。此外，如本說明書中所用，“rnai劑”可包括具有化學(xué)修飾的核糖核苷酸；rnai劑可包括多個核苷酸處的實(shí)質(zhì)性修飾。

91、如本文所使用的，術(shù)語“修飾的核苷酸”是指獨(dú)立地具有修飾的糖部分、修飾的核苷酸間鍵或修飾的核堿基的核苷酸。因此，術(shù)語“修飾的核苷酸”涵蓋對核苷間鍵、糖部分或核堿基的例如官能團(tuán)或原子的置換、添加或去除。適用于本公開的藥劑的修飾包括本文公開的或本領(lǐng)域已知的所有類型的修飾。出于本說明書和權(quán)利要求書的目的，“rnai劑”涵蓋在sirna型分子中使用的任何此類修飾。

92、在本公開的某些實(shí)施方案中，如果存在于rnai劑內(nèi)，包含脫氧核苷酸(其被公認(rèn)為核苷酸的天然存在形式)可以被認(rèn)為構(gòu)成修飾的核苷酸。

93、雙鏈體區(qū)域可為允許所需的靶rna通過risc途徑的特異性降解的任意長度，且可以為約9至36個堿基對的長度范圍，例如約15至30個堿基對的長度，例如，約9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35或36個堿基對的長度，如約15至30、15至29、15至28、15至27、15至26、15至25、15至24、15至23、15至22、15至21、15至20、15至19、15至18、15至17、18至30、18至29、18至28、18至27、18至26、18至25、18至24、18至23、18至22、18至21、18至20、19至30、19至29、19至28、19至27、19至26、19至25、19至24、19至23、19至22、19至21、19至20、20至30、20至29、20至28、20至27、20至26、20至25、20至24、20至23、20至22、20至21、21至30、21至29、21至28、21至27、21至26、21至25、21至24、21至23或21至22個堿基對的長度。上文所述的范圍和長度中間的范圍和長度也考慮為本發(fā)明的部分。

94、形成雙鏈體結(jié)構(gòu)的兩條鏈可為一個較大rna分子的不同部分，或它們可為獨(dú)立的rna分子。在兩條鏈為一個較大分子的部分，且因此通過形成雙鏈體結(jié)構(gòu)的一條鏈的3'-端與相應(yīng)的另一條鏈的5'-端之間的不間斷核苷酸鏈連接的情況中，連接rna鏈稱為“發(fā)夾環(huán)”。發(fā)夾環(huán)可以包含至少一個未配對的核苷酸。在一些實(shí)施方案中，發(fā)夾環(huán)可包含至少4、至少5、至少6、至少7、至少8、至少9、至少10、至少20、至少23個或更多個未配對的核苷酸或不指向dsrna的靶位點(diǎn)的核苷酸。在一些實(shí)施方案中，發(fā)夾環(huán)可以是10個或更少的核苷酸。在一些實(shí)施方案中，發(fā)夾環(huán)可以是8個或更少的未配對核苷酸。在一些實(shí)施方案中，發(fā)夾環(huán)可以是4-10個未配對的核苷酸。在一些實(shí)施方案中，發(fā)夾環(huán)可以是4-8個核苷酸。

95、在某些實(shí)施方案中，雙鏈寡聚化合物的兩條鏈可以連接在一起。兩條鏈可在兩端或僅僅在一端彼此連接。在一端連接是指第一鏈的5'-端連接至第二鏈的3'-端或第一鏈的3'-端連接至第二鏈的5'-端。當(dāng)兩條鏈在兩端彼此連接時，第一鏈的5'-端連接至第二鏈的3'-端并且第一鏈的3'-端連接至第二鏈的5'-端。兩條鏈可以通過寡核苷酸接頭連接在一起，其包括但不限于(n)n；其中n獨(dú)立地是修飾的或未修飾的核苷酸并且n是3-23。在一些實(shí)施方案中，n為3-10，例如3、4、5、6、7、8、9或10。在一些實(shí)施方案中，寡核苷酸接頭選自gnra、(g)4、(u)4和(dt)4，其中n是修飾的或未修飾的核苷酸，且r是修飾的或未修飾的嘌呤核苷酸。接頭中的一些核苷酸可參與與接頭中的其它核苷酸的堿基配對相互作用。兩條鏈也可以通過非核苷接頭，例如本文所述的接頭連接在一起。本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解，本文描述的任何寡核苷酸化學(xué)修飾或變異可用于寡核苷酸接頭中。

96、發(fā)夾和啞鈴型寡聚化合物具有等于或至少14、15、15、16、17、18、19、29、21、22、23、24或25個核苷酸對的雙鏈體區(qū)域。雙鏈體區(qū)域的長度可以等于或小于200、100或50。在一些實(shí)施方案中，雙鏈體區(qū)域的長度范圍為15-30、17-23、19-23和19-21個核苷酸對。

97、發(fā)夾寡聚化合物可具有單鏈突出端或末端未配對區(qū)域，在一些實(shí)施方案中在3'側(cè)，并且在一些實(shí)施方案中，在發(fā)夾的反義側(cè)上。在一些實(shí)施方案中，突出端長度為1-4個，更通常2-3個核苷酸?？烧T導(dǎo)rna干擾的發(fā)夾寡聚化合物在本文中也稱為“shrna”。

98、當(dāng)dsrna的兩條基本上互補(bǔ)的鏈由單獨(dú)的rna分子組成時，這些分子不是必須，而是可以共價連接。當(dāng)兩條鏈通過除了形成雙鏈體結(jié)構(gòu)的一條鏈的3’-端與對應(yīng)的另一條鏈的5’-端之間的不間斷核苷酸鏈以外的方式共價連接時，連接結(jié)構(gòu)稱為“接頭”。rna鏈可以具有相同或不同數(shù)目的核苷酸。堿基對的最大數(shù)目是dsrna的最短鏈中的核苷酸數(shù)目減去存在于雙鏈體中的任何突出端。除了雙鏈體結(jié)構(gòu)外，rnai可包含一個或多個核苷酸突出端。

99、在一個實(shí)施方案中，本公開的rnai劑為其中每一條鏈為24至30個核苷酸的長度的dsrna，其與靶rna序列(例如snca靶mrna序列)相互作用以指導(dǎo)靶rna的切割。不希望受限于理論，引入細(xì)胞中的長雙鏈rna通過稱為dicer的iii型核酸內(nèi)切酶而降解為sirna(sharpetal.(2001)genes?dev.15:485)。dicer，一種核酸酶iii樣酶，將dsrna加工為19至23個堿基對的短干擾rna，其具有特征性的兩個堿基的3'突出端(bernstein,et?al.,(2001)nature?409:363)。隨后，sirna并入rna誘導(dǎo)沉默復(fù)合體(risc)中，其中一種或多種解旋酶使sirna雙鏈體展開，使得互補(bǔ)反義鏈能夠指導(dǎo)靶標(biāo)識別(nykanen,et?al.,(2001)cell107:309)。當(dāng)與適宜的靶mrna結(jié)合時，risc內(nèi)的一種或多種核酸內(nèi)切酶切割靶標(biāo)以誘導(dǎo)沉默(elbashir,et?al.,(2001)genes?dev.15:188)。在一個實(shí)施方案中，本公開的rnai劑為24至30個核苷酸的dsrna劑，其與snca?rna序列相互作用以指導(dǎo)靶rna的切割。

100、在一個實(shí)施方案中，本公開的rnai劑為其中各鏈包含19至23個核苷酸的dsrna劑，其與snca?rna序列相互作用以指導(dǎo)靶rna的切割。不希望受限于理論，引入細(xì)胞中的長雙鏈rna通過稱為dicer的iii型核酸內(nèi)切酶降解為sirna(sharp?et?al.(2001)genes?dev.15:485)。dicer，一種核酸酶iii樣酶，將dsrna加工為19至23個堿基對的短干擾rna，其具有特征性的兩個堿基的3'突出端(bernstein,et?al.,(2001)nature?409:363)。隨后，sirna并入rna誘導(dǎo)沉默復(fù)合體(risc)中，其中一種或多種解旋酶使sirna雙鏈體展開，使得互補(bǔ)反義鏈能夠指導(dǎo)靶標(biāo)識別(nykanen,et?al.,(2001)cell?107:309)。當(dāng)與適宜的靶mrna結(jié)合時，risc內(nèi)的一種或多種核酸內(nèi)切酶切割靶標(biāo)以誘導(dǎo)沉默(elbashir,et?al.,(2001)genesdev.15:188)。在一個實(shí)施方案中，本公開的rnai劑為19至23個核苷酸的dsrna，其與sncarna序列相互作用以指導(dǎo)靶rna的切割。

101、如本文所使用的，術(shù)語“核苷酸突出端”是指從rnai劑(例如，dsrna)的雙鏈體結(jié)構(gòu)突出的至少一個未配對的核苷酸。例如，當(dāng)dsrna的一條鏈的3'端延伸超過另一條鏈的5'端，或反之時，存在核苷酸突出端。dsrna可以包含具有至少一個核苷酸的突出端；替代地，突出端可以包含至少兩個核苷酸、至少三個核苷酸、至少四個核苷酸、至少五個核苷酸或更多。核苷酸突出端可以包含核苷酸/核苷類似物(包括脫氧核苷酸/核苷)或由其組成。突出端可以處于有義鏈、反義鏈或其任何組合上。此外，突出端的核苷酸可以存在于dsrna的反義鏈或有義鏈的5'-端、3'-端或兩端上。

102、在dsrna的一個實(shí)施方案中，至少一條鏈包含至少1個核苷酸的3'突出端。在另一個實(shí)施方案中，至少一條鏈包含至少2個核苷酸，例如2、3、4、5、6、7、9、10、11、12、13、14或15個核苷酸的3'突出端。在其他實(shí)施方案中，rnai劑的至少一條鏈包含至少1個核苷酸的5'突出端。在某些實(shí)施方案中，至少一條鏈包含至少2個核苷酸，例如2、3、4、5、6、7、9、10、11、12、13、14或15個核苷酸的5'突出端。還在其他實(shí)施方案中，rnai劑的一條鏈的3'端和5'端都包含至少1個核苷酸的突出端。

103、在一個實(shí)施方案中，dsrna的反義鏈具有3'端、5'端、兩端或任一端的1至10個核苷酸，例如，0至3、1至3、2至4、2至5、4至10、5至10個，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個核苷酸的突出端。在一個實(shí)施方案中，dsrna的有義鏈具有3'端、5'端、兩端或任一端的1至10個核苷酸，例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個核苷酸的突出端。在另一實(shí)施方案中，突出端中的一個或多個核苷酸用核苷硫代磷酸酯替換。

104、在某些實(shí)施方案中，有義鏈或反義鏈或兩者上的突出端可包括長于10個核苷酸的延伸的長度，例如1至30個核苷酸、2至30個核苷酸、10至30個核苷酸或10至15個核苷酸的長度。在某些實(shí)施方案中，延伸的突出端在雙鏈體的有義鏈上。在某些實(shí)施方案中，延伸的突出端存在于雙鏈體的有義鏈的3'端。在某些實(shí)施方案中，延伸的突出端存在于雙鏈體的有義鏈的5'端。在某些實(shí)施方案中，延伸的突出端在雙鏈體的反義鏈上。在某些實(shí)施方案中，延伸的突出端存在于雙鏈體反義鏈的3'端。在某些實(shí)施方案中，延伸的突出端存在于雙鏈體反義鏈的5'端。在某些實(shí)施方案中，突出端中的一個或多個核苷酸被核苷硫代磷酸替代。在某些實(shí)施方案中，突出端包括自身互補(bǔ)部分，使得突出端能夠形成在生理條件下穩(wěn)定的發(fā)夾結(jié)構(gòu)。

105、如本文中所用，涉及dsrna的術(shù)語“鈍端”或“平端”意指在dsrna的給定末端不存在未配對的核苷酸或核苷酸類似物，即，無核苷酸突出端。dsrna的一端或兩端可為鈍端。在dsrna的兩端為鈍端的情況中，dsrna被稱為鈍端的。為清楚起見，“鈍端的”dsrna為兩端均為鈍端的dsrna，即，在分子的任一端無核苷酸突出端。最通常這種分子在其整個長度上為雙鏈的。

106、在一些實(shí)施方案中，dsrna包含3’突出端。在一些實(shí)施方案中，dsrna包含1個核苷酸的3’突出端。在一些實(shí)施方案中，dsrna包含2個核苷酸的3’突出端。在一些實(shí)施方案中，dsrna包含5’突出端。在一些實(shí)施方案中，dsrna包含1個核苷酸的5’突出端。在一些實(shí)施方案中，dsrna包含2個核苷酸的5’突出端。

107、在一些實(shí)施方案中，dsrna的一端具有突出端和一端具有鈍端。突出端可以為有義鏈3’突出端、有義鏈5’突出端、反義鏈3'突出端或反義鏈5’突出端。在一些實(shí)施方案中，突出端為1個核苷酸的突出端。在一些實(shí)施方案中，突出端為2個核苷酸的突出端。在一些實(shí)施方案中，dsrna具有兩個鈍端。在一些實(shí)施方案中，dsrna在兩端具有突出端。在各端的突出端獨(dú)立地為有義鏈3’突出端、有義鏈5’突出端、反義鏈3'突出或反義鏈5’突出端。在一些實(shí)施方案中，突出端為1個核苷酸的突出端。在一些實(shí)施方案中，突出端為2個核苷酸的突出端。一個或多個突出端核苷酸可是修飾的核苷酸、反向核苷酸、無堿基核苷酸或反向無堿基核苷酸。反向核苷酸可經(jīng)由3'-3'磷酸二酯鍵連接。

108、在一些實(shí)施方案中，有義鏈為23個核苷酸的長度，且反義鏈為21個核苷酸的長度。在一些實(shí)施方案中，有義鏈為23個核苷酸的長度，且反義鏈為21個核苷酸的長度，其中有義鏈的3'和5'末端核苷酸位置為反向無堿基殘基。有義鏈3'和5'末端反向無堿基殘基可以為突出端。

109、在一些實(shí)施方案中，有義鏈為21個核苷酸的長度，且反義鏈為23個核苷酸的長度，其中反義鏈含有2個核堿基的3’突出端。

110、術(shù)語“反義鏈”或“引導(dǎo)鏈”是指rnai劑(例如，dsrna)的鏈，其包含與靶序列(例如snca?mrna)基本上互補(bǔ)的區(qū)域。

111、如本文所使用的，術(shù)語“互補(bǔ)區(qū)”是指反義鏈上與如本文所定義的序列(例如靶序列，例如snca核苷酸序列)基本上互補(bǔ)的區(qū)域。在互補(bǔ)區(qū)與靶序列不完全互補(bǔ)的情況下，錯配可以處于分子的內(nèi)部或末端區(qū)域中。通常，最耐受的錯配在末端區(qū)域中，例如在rnai劑的5'-或3'-末端的5個、4個、3個或2個核苷酸內(nèi)。

112、在一些實(shí)施方案中，本公開的雙鏈rna劑包括反義鏈中的核苷酸錯配。

113、在一些實(shí)施方案中，本公開的雙鏈rna劑的反義鏈包含與靶mrna的不超過4個錯配，例如，反義鏈包含與靶mrna的4個、3個、2個、1個或0個錯配。在一些實(shí)施方案中，本公開的雙鏈rna劑的反義鏈包含與有義鏈的不超過4個錯配，例如，反義鏈包含與有義鏈的4個、3個、2個、1個或0個錯配。在一些實(shí)施方案中，本公開的雙鏈rna劑包含有義鏈中的核苷酸錯配。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的雙鏈rna劑的有義鏈包含與反義鏈的不超過4個錯配，例如，有義鏈包含與反義鏈的4個、3個、2個、1個或0個錯配。在一些實(shí)施方案中，核苷酸錯配在例如irna的3'端的5個、4個、3個核苷酸內(nèi)。在另一個實(shí)施方案中，核苷酸錯配在例如irna劑的3'-末端核苷酸中。在一些實(shí)施方案中，錯配不在種子區(qū)中。

114、因此，如本文所描述的rnai劑可以含有與靶序列的一個或多個錯配。在一個實(shí)施方案中，如本文所描述的rnai劑含有不超過3個錯配(即，3個、2個、1個或0個錯配)。在一個實(shí)施方案中，如本文所描述的rnai劑含有不超過2個錯配。在一個實(shí)施方案中，如本文所描述的rnai劑含有不超過1個錯配。在一個實(shí)施方案中，如本文所描述的rnai劑含有0個錯配。在某些實(shí)施方案中，如果rnai劑的反義鏈含有與靶序列的錯配，則錯配可以任選地限制在互補(bǔ)區(qū)的5'-或3'-端的最后5個核苷酸內(nèi)。例如，在此類實(shí)施方案中，對于23個核苷酸的rnai劑，與snca基因的區(qū)域互補(bǔ)的鏈通常在中心13個核苷酸內(nèi)不含任何錯配。本文所描述的方法或本領(lǐng)域已知的方法可以用于確定含有與靶序列的錯配的rnai劑是否有效抑制snca基因的表達(dá)?？紤]具有錯配的rnai劑在抑制snca基因表達(dá)方面的功效是重要的，特別是如果已知snca基因中的特定互補(bǔ)區(qū)在群體內(nèi)具有多態(tài)性序列變異。

115、如本文所使用的，術(shù)語“有義鏈”或“隨從鏈”是指包含與如本文中該術(shù)語所定義的反義鏈的區(qū)域基本上互補(bǔ)的區(qū)域的rnai劑的鏈。

116、如本文所使用的，“基本上所有核苷酸是修飾的”在很大程度上但不是完全為修飾的，并且可以包括不超過5個、4個、3個、2個或1個未修飾的核苷酸。

117、如本文所使用的，術(shù)語“切割區(qū)”是指緊鄰切割位點(diǎn)的區(qū)域。切割位點(diǎn)是靶標(biāo)上切割發(fā)生的位點(diǎn)。在一些實(shí)施方案中，切割區(qū)在切割位點(diǎn)的任一端上并緊鄰切割位點(diǎn)包括三個堿基。在一些實(shí)施方案中，切割區(qū)在切割位點(diǎn)的任一端上并緊鄰切割位點(diǎn)包括兩個堿基。在一些實(shí)施方案中，切割位點(diǎn)特別地出現(xiàn)在反義鏈的核苷酸10和11結(jié)合的位點(diǎn)處，并且切割區(qū)包含核苷酸11、12和13。

118、如本文所使用的，并且除非另外指明，術(shù)語“互補(bǔ)”當(dāng)用于相對于第二核苷酸序列描述第一核苷酸序列時，是指包含第一核苷酸序列的寡核苷酸或多核苷酸在特定條件下與包含第二核苷酸序列的寡核苷酸或多核苷酸雜交并且形成雙鏈體結(jié)構(gòu)的能力，如技術(shù)人員理解的。例如，此類條件可以是嚴(yán)格條件，其中嚴(yán)格條件可以包括：400mm?nacl，40mmpipes，ph?6.4，1mm?edta，50℃或70℃，12小時至16小時，然后洗滌(參見例如，molecularcloning:a?laboratory?manual,sambrook等人(1989)cold?spring?harbor?laboratorypress)。可以應(yīng)用其它條件，如生物體內(nèi)部可能遇到的生理學(xué)相關(guān)的條件。技術(shù)人員將能夠根據(jù)雜交核苷酸的最終應(yīng)用確定最適合于兩個序列的互補(bǔ)性測試的條件集合。

119、如本文所描述的rnai劑內(nèi)(例如，dsrna內(nèi))的互補(bǔ)序列包括包含第一核苷酸序列的寡核苷酸或多核苷酸與包含第二核苷酸序列的寡核苷酸或多核苷酸在一個或兩個核苷酸序列的全長上的堿基配對。此類序列在本文中可以被稱為彼此“完全互補(bǔ)”。然而，當(dāng)?shù)谝恍蛄性诒疚闹斜环Q為相對于第二序列“基本上互補(bǔ)”時，這兩個序列可以是完全互補(bǔ)的，或?qū)τ谥炼?0個堿基對的雙鏈體，其可以形成一個或多個，但通常不超過5個、4個、3個或2個雜交時錯配的堿基對，同時保留在與其最終應(yīng)用最相關(guān)的條件下雜交的能力，例如通過risc途徑抑制基因表達(dá)。然而，在兩個寡核苷酸被設(shè)計為在雜交時形成一個或多個單鏈突出端的情況下，此類突出端不應(yīng)視為對于互補(bǔ)性的確定的錯配。例如，包含長度為21個核苷酸的一個寡核苷酸和長度為23個核苷酸的另一個寡核苷酸的dsrna，其中較長的寡核苷酸包含與較短的寡核苷酸完全互補(bǔ)的21個核苷酸的序列，仍可以被稱為出于本文所描述的目的的“完全互補(bǔ)”。

120、如本文所使用的，“互補(bǔ)”序列還可以包含非沃森-克里克堿基對或由非天然的和修飾的核苷酸形成的堿基對，或者完全由其形成，只要滿足關(guān)于其雜交能力的以上要求即可。此類非沃森-克里克堿基對包括但不限于g:u擺動堿基配對或hoogstein堿基配對。

121、本文中的術(shù)語“互補(bǔ)”、“完全互補(bǔ)”和“基本上互補(bǔ)”可以相對于dsrna的有義鏈和反義鏈之間的堿基匹配，或rnai劑的反義鏈和靶序列之間的堿基匹配來使用，如根據(jù)其使用的上下文所理解的。

122、如本文所使用的，與信使rna(mrna)的“至少部分基本上互補(bǔ)”的多核苷酸是指與所關(guān)注的mrna(例如，編碼snca的mrna)的連續(xù)部分基本上互補(bǔ)的多核苷酸。例如，如果序列與編碼scna的mrna的不間斷部分基本上互補(bǔ)，則多核苷酸與scna?mrna的至少一部分互補(bǔ)。

123、因此，在一些實(shí)施方案中，本文公開的反義鏈多核苷酸與靶snca序列完全互補(bǔ)。

124、在某些實(shí)施方案中，本文中公開的反義鏈多核苷酸與靶snca序列基本上互補(bǔ)且包含在整個長度上與seq?id?no:1、3、5、7或228(對于snca)或者seq?id?no:1、3、5、7或228的片段的核苷酸序列的等同區(qū)域至少約80％互補(bǔ)的連續(xù)核苷酸序列，如約85％、約86％、約87％、約88％、約89％、約90％、約91％、約92％、約93％、約94％、約95％、約96％、約97％、約98％或約99％互補(bǔ)。

125、在其他實(shí)施方案中，本文所公開的反義多核苷酸與靶snca序列基本上互補(bǔ)且包含在其整個長度上與表2或3中任一有義鏈核苷酸序列或表2或3中任一有義鏈核苷酸序列的片段至少約80％互補(bǔ)的連續(xù)核苷酸序列，如約85％、約86％、約87％、約88％、約89％、約90％、約91％、約92％、約93％、約94％、約95％、約96％、約97％、約98％或約99％互補(bǔ)。

126、在一個實(shí)施方案中，本公開的rnai劑包括與反義多核苷酸基本上互補(bǔ)的有義鏈，該反義多核苷酸又與靶snca序列相同，并且其中有義鏈多核苷酸包含在其整個長度上與seq?id?no:2、4、6、8或229的核苷酸序列或者seq?id?no:2、4、6、8或229任一的片段的核苷酸序列的等同區(qū)域至少約80％互補(bǔ)的連續(xù)核苷酸序列，如約85％、約86％、約87％、約88％、約89％、約90％、約91％、約92％、約93％、約94％、約95％、約96％、約97％、約98％或約99％互補(bǔ)。

127、在一些實(shí)施方案中，本公開的irna包括與反義多核苷酸基本上互補(bǔ)的有義鏈，該反義多核苷酸又與靶snca序列互補(bǔ)，并且其中有義鏈多核苷酸包含在其整個長度上與表2或3中的任一反義鏈核苷酸序列或者表2或3中的任一反義鏈核苷酸序列的片段至少約80％互補(bǔ)的連續(xù)核苷酸序列，如約85％、約90％、約91％、約92％、約93％、約94％、約95％、約96％、約97％、約98％、約99％或100％互補(bǔ)。

128、在一些實(shí)施方案中，雙鏈irna劑的雙鏈區(qū)長度為等于或至少10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、23、24、25、26、27、28、29、30個或更多個核苷酸對。

129、在一些實(shí)施方案中，雙鏈irna劑的反義鏈的長度為等于或至少14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、23、24、25、26、27、28、29或30個核苷酸。

130、在一些實(shí)施方案中，雙鏈irna劑的有義鏈的長度為等于或至少10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、23、24、25、26、27、28、29或30個核苷酸。

131、在一個實(shí)施方案中，雙鏈irna劑的有義和反義鏈長度各自為15至30個核苷酸。

132、在一個實(shí)施方案中，雙鏈irna劑的有義和反義鏈各自為19至25個核苷酸的長度。

133、在一個實(shí)施方案中，雙鏈irna劑的有義和反義鏈各自為21至23個核苷酸的長度。

134、在一個實(shí)施方案中，雙鏈irna劑的有義和反義鏈分別為21至23個核苷酸的長度。

135、在一個實(shí)施方案中，雙鏈irna劑的有義和反義鏈分別為23至21個核苷酸的長度。

136、在一個實(shí)施方案中，irna劑的有義鏈為21個核苷酸的長度，且反義鏈為23個核苷酸的長度，其中該鏈形成21個連續(xù)堿基對的雙鏈區(qū)，其具有在3'端的2個核苷酸長的單鏈突出端。

137、在一個實(shí)施方案中，irna劑的有義鏈為23個核苷酸的長度，且反義鏈為21個核苷酸的長度，其中該鏈形成21個連續(xù)堿基對的雙鏈區(qū)，其具有在3'和5'端的1個核苷酸長的單鏈突出端。

138、在一些實(shí)施方案中，各鏈的大多數(shù)核苷酸為核糖核苷酸，但如本文中所詳述的，各鏈或兩條鏈也可包括一個或多個非核糖核苷酸，例如，脫氧核糖核苷酸和/或修飾的核苷酸。此外，“irna”可包括具有化學(xué)修飾的核糖核苷酸。此類修飾可包括本文所公開或本領(lǐng)域中已知的所有類型的修飾。對于本說明書和權(quán)利要求的目的，任何此類修飾，如在irna分子中使用的，被“irna”涵蓋。

139、在本公開的一個方面，用于本公開的方法和組合物中的藥劑為單鏈反義核酸分子，其經(jīng)由反義抑制機(jī)制來抑制靶mrna。單鏈反義rna分子與靶mrna內(nèi)的序列互補(bǔ)。單鏈反義寡核苷酸可通過與mrna堿基配對并物理阻礙翻譯機(jī)制而以化學(xué)計量方式抑制翻譯，參見dias,n.et?al.,(2002)mol?cancer?ther?1:347-355。單鏈反義rna分子可為約15至約30個核苷酸的長度，且具有與靶序列互補(bǔ)的序列。例如，單鏈反義rna分子可包含作為來自本文所述任一反義序列的至少約14、15、16、17、18、19、20個或更多個連續(xù)核苷酸的序列。

140、在一個實(shí)施方案中，對snca基因表達(dá)的至少部分抑制通過可以從其中snca被轉(zhuǎn)錄且被處理以使得snca基因的表達(dá)被抑制的第一細(xì)胞或細(xì)胞組分離或檢測的snca?mrna量的減少來評估，如與基本上與該第一細(xì)胞或細(xì)胞組相同但未如此處理的第二細(xì)胞或細(xì)胞組(對照細(xì)胞)相比的。抑制的程度可以如下式表示：

141、

142、如本文所使用的，短語“使細(xì)胞與rnai劑(如dsrna)接觸”包括通過任何可能的方式接觸細(xì)胞。使細(xì)胞與rnai劑接觸包括使細(xì)胞在體外與rnai劑接觸或使細(xì)胞在體內(nèi)與rnai劑接觸。接觸可以直接或間接地進(jìn)行。因此，例如，可以通過執(zhí)行所述方法的個體使rnai劑與細(xì)胞物理接觸，或可替代地，可以使rnai劑處于允許或使其隨后與細(xì)胞接觸的情況中。

143、體外接觸細(xì)胞例如可通過使細(xì)胞與rnai劑一起溫育進(jìn)行。體內(nèi)接觸細(xì)胞例如可通過將rnai劑注射至細(xì)胞所處的組織內(nèi)或附近，或通過任選地經(jīng)由鞘內(nèi)、玻璃體內(nèi)或其他注射將rnai劑注射至另一區(qū)域(例如中樞神經(jīng)系統(tǒng)(cns))，或注射至血流或皮下空間以使得該藥劑后續(xù)到達(dá)其中待接觸的細(xì)胞所處的組織來進(jìn)行。例如，rnai劑可含有或偶聯(lián)至配體，例如下文所述且進(jìn)一步詳述于例如通過引用并入本文的pct/us2019/031170中的一個或多個親脂性部分，該部分將rnai劑引導(dǎo)至目標(biāo)位點(diǎn)例如cns或者以其他方式在目標(biāo)位點(diǎn)處穩(wěn)定。在一些實(shí)施方案中，rnai劑可含有或偶聯(lián)至一個或多個親脂性部分，任選地在galnac衍生物不存在的情況下。體外和體內(nèi)接觸方法的組合也是可能的。例如，細(xì)胞可在體外與rnai劑接觸，并隨后移植到受試者體內(nèi)。

144、在一個實(shí)施方案中，細(xì)胞與rnai劑接觸包括通過促進(jìn)或?qū)崿F(xiàn)至細(xì)胞中的攝取或吸收而將“rnai劑引入或遞送至細(xì)胞中”。rnai劑的吸收或攝取可通過無輔助的擴(kuò)散或主動細(xì)胞過程進(jìn)行，或通過輔助劑或裝置進(jìn)行。將rnai劑引入細(xì)胞中可以是體外和/或體內(nèi)的。例如，對于體內(nèi)引入，可將rnai劑注射至組織部位中或全身性施用。體外引入細(xì)胞中包括本領(lǐng)域已知的方法，如電穿孔和脂質(zhì)轉(zhuǎn)染。進(jìn)一步的途徑描述于下文中和/或是本領(lǐng)域中已知的。

145、術(shù)語“親脂性”或“親脂性部分”廣泛地指對脂質(zhì)具有親和力的任何化合物或化學(xué)部分。用于表征親脂性部分的親脂性的一種方式是通過辛醇-水分配系數(shù)logkow，其中kow是處于平衡狀態(tài)的兩相系統(tǒng)的辛醇相中化學(xué)品的濃度與其在水相中的濃度的比率。辛醇-水分配系數(shù)是實(shí)驗(yàn)室測量的物質(zhì)特性。然而，其也可以通過使用歸因于化學(xué)品的結(jié)構(gòu)成分的系數(shù)來預(yù)測，所述系數(shù)是使用第一性原則或經(jīng)驗(yàn)方法計算的(參見例如，tetko等人,j.chem.inf.comput.sci.41:1407-21(2001)，其通過引用整體并入本文)。其提供了物質(zhì)偏好非水性或油性環(huán)境而不是水的傾向的熱力學(xué)量度(即其親水/親油平衡)。原則上，當(dāng)化學(xué)物質(zhì)的logkow超過0時，其為親脂性的。通常，親脂性部分具有超過1、超過1.5、超過2、超過3、超過4、超過5或超過10的logkow。例如，6-氨基己醇的logkow預(yù)測為大約0.7。使用相同的方法，n-(己-6-醇)氨基甲酸膽固醇酯的logkow預(yù)測為10.7。

146、分子的親脂性可根據(jù)其攜帶的官能團(tuán)而改變。例如，將羥基或胺基添加到親脂性部分的末端可以增加或降低親脂性部分的分配系數(shù)(例如，logkow)值。

147、可選地，與一個或多個親脂性部分綴合的雙鏈rnai劑的疏水性可通過其蛋白質(zhì)結(jié)合特征來測量。例如，在某些實(shí)施方案中，雙鏈rnai劑的血漿蛋白結(jié)合測定中的未結(jié)合分?jǐn)?shù)可以被確定為與雙鏈rnai劑的相對疏水性正相關(guān)，其可能與雙鏈rnai劑的沉默活性正相關(guān)。

148、在一個實(shí)施方案中，所確定的血漿蛋白結(jié)合測定是使用人血清白蛋白的電泳遷移率變動測定(emsa)。此結(jié)合測定的示例性方案在例如pct/us2019/031170中詳細(xì)說明。通過結(jié)合測定中未結(jié)合的sirna的分?jǐn)?shù)測量的雙鏈rnai劑的疏水性超過0.15、超過0.2、超過0.25、超過0.3、超過0.35、超過0.4、超過0.45或超過0.5以用于sirna的增強(qiáng)的體內(nèi)遞送。

149、因此，將親脂性部分綴合于雙鏈rnai劑的內(nèi)部位置對于sirna的增強(qiáng)的體內(nèi)遞送提供了最佳的疏水性。

150、術(shù)語“脂質(zhì)納米顆?！被颉發(fā)np”是指包含脂質(zhì)層的囊泡，所述脂質(zhì)層包封藥物活性分子，如核酸分子，例如，rnai劑或rnai劑從其轉(zhuǎn)錄的質(zhì)粒。lnp在例如美國專利第6,858,225號、第6,815,432號、第8,158,601號和第8,058,069號中進(jìn)行了描述，其全部內(nèi)容在此通過引用并入本文。

151、如本文所使用的，“受試者”是動物，如哺乳動物，包括靈長類動物(如人、非人類靈長動物，例如猴子和黑猩猩)或非靈長類動物(如大鼠或小鼠)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，受試者是人，如正在治療或評估受益于snca的表達(dá)減少的疾病、病癥或病狀的人；處于受益于snca的表達(dá)減少的疾病、病癥或病狀的風(fēng)險中的人；患有受益于snca的表達(dá)減少的疾病、病癥或病狀的人；或正在治療受益于snca的表達(dá)減少的疾病、病癥或病狀的人，如本文所描述的。

152、如本文所用，術(shù)語“治療”或“處理”指在患有神經(jīng)退化性疾病的受試者中有益或希望的結(jié)果，包括但不限于與snca基因表達(dá)或snca蛋白質(zhì)產(chǎn)生相關(guān)的一種或多種體征或癥狀的緩解或改善，例如，snca相關(guān)神經(jīng)退化性疾病，例如突觸核蛋白病，如pd、多系統(tǒng)萎縮(msa)、路易氏體癡呆(lbd)、單純性自主神經(jīng)衰竭(paf)、皮克氏病、進(jìn)行性核上性麻痹、拳擊員癡呆、與染色體17關(guān)聯(lián)的帕金森氏癥、lytico-bodig氏病、纏結(jié)優(yōu)勢型癡呆、嗜銀顆粒疾病、神經(jīng)節(jié)神經(jīng)膠質(zhì)瘤、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞瘤、腦膜血管瘤病、亞急性硬化性全腦炎、鉛中毒腦病、結(jié)節(jié)性硬化癥、hallervorden-spatz病、脂褐質(zhì)沉積癥、皮質(zhì)基底節(jié)變性、額顳葉癡呆、額顳葉變性、阿爾茲海默病、亨廷頓病、唐氏綜合征、精神錯亂、精神分裂癥和克雅氏??；在增加的神經(jīng)元功能障礙或死亡的區(qū)域中降低的snca表達(dá)或活性?！爸委煛币部芍赶啾扔谠诓淮嬖谥委煹那闆r下預(yù)期的存活而延長存活期。

153、在受試者中的snca水平或者疾病標(biāo)志物或癥狀的上下文中，術(shù)語“降低”是指這種水平的統(tǒng)計學(xué)顯著的降低。降低可以是例如至少10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或更多。在某些實(shí)施方案中，降低為至少20％。在某些實(shí)施方案中，降低為疾病標(biāo)志物(例如，蛋白質(zhì)或基因表達(dá)水平)的至少50％的降低。在受試者的snca水平的情況中的“降低”是任選地降低到公認(rèn)為在沒有此類病癥的個體的正常范圍內(nèi)的水平。在某些實(shí)施方案中，“降低”是患有疾病的受試者的標(biāo)志物或癥狀的水平與公認(rèn)在個體的正常范圍內(nèi)的水平之間的差異的降低，例如，在患有帕金森氏癥的個體與未患帕金森氏癥或具有處于正常范圍內(nèi)的癥狀的個體中的運(yùn)動速度降低的水平(運(yùn)動遲緩)和調(diào)節(jié)姿勢和平衡的能力。

154、如本文所用，當(dāng)用于提及受益于snca基因表達(dá)或snca蛋白產(chǎn)生的減少的疾病或病癥時，例如，在由于例如遺傳因素或年齡而易患snca相關(guān)病癥的受試者中，預(yù)防”或“防止”是指，其中該受試者尚不符合snca相關(guān)病癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)。如本文所用，預(yù)防可理解為向尚不符合snca相關(guān)病癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)的受試者施用藥劑以延遲或降低受試者將發(fā)生snca相關(guān)病癥的可能性。由于該藥劑為藥用試劑，應(yīng)理解施用通常處于能夠?qū)⑸胁环蟬nca相關(guān)病癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)的受試者鑒定為易發(fā)生snca相關(guān)病癥的健康護(hù)理專業(yè)人士的指導(dǎo)下。

155、術(shù)語“突觸核蛋白病”指以α-突觸核蛋白的原纖維聚集體為特征的一組神經(jīng)退化性病癥，該聚集體傾向于在選擇性的神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞群體的胞質(zhì)中累積。因此，突觸核蛋白病為一類snca相關(guān)神經(jīng)退化性疾病和病癥，其包括帕金森氏病(pd)、路易氏體癡呆(lbd)、單純性自主神經(jīng)衰竭(paf)和多系統(tǒng)萎縮(msa)，以及其它神經(jīng)退化性疾病。臨床上，突觸核蛋白病以運(yùn)動、認(rèn)知、行為和自主功能的慢性和進(jìn)行性下降為特征，這取決于腦中病變的分布。因?yàn)榕R床上的重疊，差異性診斷有時非常困難。帕金森氏癥為pd的主要癥狀，但其可能難以與lbd和msa的帕金森氏癥區(qū)分開來。自主神經(jīng)功能障礙(其為在paf中的孤立發(fā)現(xiàn))可能存在于pd和lbd中，但在msa中通常更為突出且出現(xiàn)得更早。lbd可為與pd相同的疾病，但具有廣泛的皮質(zhì)病理學(xué)狀態(tài)，從而導(dǎo)致癡呆、認(rèn)知波動和特征性的幻視。

156、發(fā)生突觸核蛋白病(例如pd、lbd等)的可能性降低，例如，當(dāng)具有對于pd或lbd(或其他突觸核蛋白病)的風(fēng)險因子的個體未發(fā)生pd或lbd(或其他突觸核蛋白病)或者發(fā)生pd或lbd(或其他突觸核蛋白病)而相對于具有相同風(fēng)險因子且未接受本文所述治療的群體具有較低嚴(yán)重程度。不發(fā)生snca相關(guān)病癥，例如pd或lbd(或其他突觸核蛋白病)，或者發(fā)生pd或lbd(或其他突觸核蛋白病)的時間延遲數(shù)月或數(shù)年被視為有效預(yù)防。預(yù)防可能需要施用超過一個劑量的irna劑。提供合適的方法以鑒定受試者處于發(fā)生任何上述snca相關(guān)疾病的風(fēng)險下，本文所提供的irna劑可作為用于或在預(yù)防snca相關(guān)疾病的方法中使用的藥用試劑使用。對于各種snca相關(guān)疾病的風(fēng)險因子在本文中討論。

157、如本文所用，術(shù)語“帕金森氏病”或“pd”指一種影響運(yùn)動的進(jìn)行性神經(jīng)系統(tǒng)病癥。pd的主要病理學(xué)特征為大腦基底節(jié)中的細(xì)胞死亡(到生命終結(jié)時，影響黑質(zhì)致密部中高達(dá)70％的多巴胺分泌神經(jīng)元)和路易氏體(snca編碼的α-突觸核蛋白的累積)在許多剩余神經(jīng)元中的存在。癥狀逐漸開始，有時伴有恰一只手的幾乎不明顯的震顫或者僵硬或運(yùn)動遲緩。其他早期癥狀包括缺少面部表情，在行走時缺少手臂運(yùn)動以及言語不清。帕金森氏病癥狀隨時間惡化。pd的平均發(fā)作年齡為60歲，并且晚期發(fā)作與更高的癥狀嚴(yán)重程度相關(guān)。臨床特征包括但不限于，更嚴(yán)重的震顫、運(yùn)動緩慢(動作遲緩)、肌肉僵直、姿勢和平衡受損、自主運(yùn)動的損失、言語變化及最終地癡呆、幻覺和囿于輪椅。

158、如本文所用，“路易氏體癡呆(lbd)”指由于α-突觸核蛋白在患病腦神經(jīng)元中的累積(稱為路易氏體和路易氏神經(jīng)突)而導(dǎo)致思維、推理和獨(dú)立功能的下降的一種類型的進(jìn)行性癡呆。α-突觸核蛋白的聚集體導(dǎo)致受影響的神經(jīng)元的次優(yōu)功能性及最終死亡。癥狀包括視覺、聽覺、嗅覺或觸覺的幻覺；帕金森氏病的體征(帕金森氏病樣征兆)；身體機(jī)能(自主神經(jīng)系統(tǒng))調(diào)節(jié)不良如意識模糊、跌倒和腸問題；認(rèn)知問題如精神錯亂、注意力不集中、視覺-空間問題及記憶力損失；睡眠困難如快速眼動(rem)睡眠行為障礙(其中夢在睡眠時以身體表現(xiàn)出來)；注意力波動，包括嗜睡發(fā)作、長時間凝視空處、白天長時間小睡或言語紊亂、抑郁和冷漠。

159、如本文所用，術(shù)語“多系統(tǒng)萎縮(msa)”指一種罕見的退化性神經(jīng)病癥，其影響受試者的無意識(自主神經(jīng))功能，包括血壓、呼吸、膀胱功能和運(yùn)動控制。先前稱為shy-drager綜合征、橄欖體橋腦小腦萎縮或紋狀黑質(zhì)退化，msa共有許多帕金森氏病樣癥狀，如動作遲緩、肌肉僵直和平衡不良。msa治療包括用藥和改變生活習(xí)慣以幫助管理癥狀，但無法治愈。msa造成調(diào)節(jié)內(nèi)部身體機(jī)能、消化和運(yùn)動控制的腦部分(小腦、基底節(jié)和腦干)的劣化和收縮(萎縮)。msa受試者的受損腦組織顯示含有異常量的α-突觸核蛋白的神經(jīng)細(xì)胞(神經(jīng)元)。msa受試者通常在msa癥狀首次出現(xiàn)后生存約7至10年。但是，患msa的存活率變化很大。偶爾，msa受試者可帶病存活15年或更長。死亡通常是由于呼吸問題。msa逐步進(jìn)展并最終導(dǎo)致死亡。影響身體的很多部分。msa癥狀典型地在成人期發(fā)生，往往在五十幾歲或六十幾歲。msa以兩種類型分類：帕金森氏病型和小腦型。類型取決于在診斷時觀察到的癥狀。帕金森氏病型msa為最常見的msa類型，其體征和癥狀類似于帕金森氏病的那些，如肌肉僵直、手臂和腿彎曲困難、緩慢運(yùn)動(動作遲緩)、震顫(與經(jīng)典帕金森氏病相比，在msa中罕見)以及姿勢和平衡的問題。小腦型msa體征和癥狀包括肌肉協(xié)調(diào)的問題(共濟(jì)失調(diào))，也可能包括運(yùn)動和協(xié)調(diào)受損，如步態(tài)不穩(wěn)和失去平衡、口齒不清、言語遲緩或音量低(口吃)、視覺障礙如視線模糊或復(fù)視以及眼睛聚焦困難、難以吞咽(吞咽困難)或咀嚼困難，以及一般體征和癥狀。此外，多系統(tǒng)萎縮的主要征兆為姿勢性(直立性)低血壓，一種低血壓形式，其中當(dāng)受試者從坐姿或臥姿站立時使得受試者感覺眩暈或頭暈，或甚至昏迷。msa受試者也可發(fā)生在躺下時危險地高的血壓水平(仰臥位高血壓)。與msa相關(guān)的其他困難包括無意識(自主神經(jīng))身體功能，如尿道和腸道功能障礙、便秘、膀胱或腸道控制的損失(失禁)、出汗異常、減少的汗液、淚液和唾液產(chǎn)生、由于出汗減少導(dǎo)致的熱不耐受、體溫控制受損(往往造成手腳冰冷)、睡眠障礙、由于“表演”夢境導(dǎo)致的煩躁不安的睡眠、夜間呼吸異常、性功能障礙、無法實(shí)現(xiàn)或維持勃起(陽痿)、性欲喪失、心血管問題、由于血液淤積導(dǎo)致的手腳顏色變化、手腳冰冷、精神問題和難以控制情緒，如不適當(dāng)?shù)男蚩?。msa的可能并發(fā)癥包括睡眠期間呼吸異常；由于平衡不佳或昏迷導(dǎo)致的跌倒的損傷；進(jìn)行性不動癥，其可能導(dǎo)致繼發(fā)性問題如皮膚破裂、在日?；顒又惺プ晕艺兆o(hù)能力、導(dǎo)致言語和呼吸困難的聲帶麻痹及增加的吞咽困難。

160、在一個實(shí)施方案中，snca相關(guān)疾病或病癥(突觸核蛋白病)為帕金森氏病、路易氏體癡呆、多系統(tǒng)萎縮(msa)和單純性自主神經(jīng)衰竭(paf)之一。

161、如本文所使用的，“治療有效量”旨在包括當(dāng)向患有snca相關(guān)疾病的受試者施用時，足以影響疾病的治療(例如，通過減少、改善或維持現(xiàn)有疾病或一種或多種疾病癥狀)的rnai劑的量?！爸委熡行Я俊笨筛鶕?jù)rnai劑、藥劑如何施用、疾病和其嚴(yán)重程度以及待治療受試者的病史、年齡、體重、家族史、遺傳組成、先前或伴隨治療的類型(如果有的話)以及其它個體特征而變化。

162、如本文所使用的，“預(yù)防有效量”旨在包括當(dāng)向患有snca相關(guān)病癥的受試者施用時，足以預(yù)防或改善疾病或疾病的一種或多種癥狀的rnai劑的量。改善疾病包括減緩疾病的進(jìn)程或降低后期發(fā)生疾病的嚴(yán)重程度。“預(yù)防有效量”可根據(jù)rnai劑、藥劑如何施用、疾病的風(fēng)險程度以及病史、年齡、體重、家族史、遺傳組成、先前或伴隨治療的類型(如果有的話)以及待治療患者的其它個體特征而變化。

163、“治療有效量”或“預(yù)防有效量”還包括以適用于任何治療的合理收益/風(fēng)險比產(chǎn)生一些期望的局部或全身性效應(yīng)的rnai劑的量。本公開的方法中采用的rnai劑可以以足夠的量施用，以產(chǎn)生適用于此類治療的合理益處/風(fēng)險比。

164、短語“藥學(xué)上可接受的”在本文中用于指在合理醫(yī)學(xué)判斷的范圍內(nèi)適合用于與人類受試者和動物受試者的組織接觸而沒有過度毒性、刺激、過敏反應(yīng)或其它問題或并發(fā)癥的、與合理的益處/風(fēng)險比相稱的那些化合物、材料、組合物或劑型。

165、如本文所使用的，短語“藥學(xué)上可接受的載體”是指藥學(xué)上可接受的材料、組合物或媒劑，如液體或固體填充劑、稀釋劑、賦形劑、制造助劑(例如，潤滑劑、滑石鎂、鈣或鋅硬脂酸鹽或者硬脂酸)、或溶劑包封材料，其涉及將主題化合物從身體的一個器官或部分?jǐn)y帶或運(yùn)送到身體的另一個器官或部分。在與制劑的其它成分相容并且對被治療的受試者無害的意義上，每種載體必須是“可接受的”。可用作藥學(xué)上可接受的載體的材料的一些實(shí)例包括：(1)糖，如乳糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉，如玉米淀粉和馬鈴薯淀粉；(3)纖維素以及其衍生物，如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素和醋酸纖維素；(4)粉狀黃蓍膠；(5)麥芽；(6)明膠；(7)潤滑劑，如硬脂酸鎂、十二烷基硫酸鈉和滑石；(8)賦形劑，如可可脂和栓劑蠟；(9)油，如花生油、棉籽油、紅花油、芝麻油、橄欖油、玉米油和大豆油；(10)二醇，如丙二醇；(11)多元醇，如甘油、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇；(12)酯，如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)瓊脂；(14)緩沖劑，如氫氧化鎂和氫氧化鋁；(15)藻酸；(16)無熱原水；(17)等滲鹽水；(18)林格氏溶液；(19)乙醇；(20)ph緩沖溶液；(21)聚酯、聚碳酸酯或聚酸酐；(22)增量劑，如多肽和氨基酸；(23)血清組分，如血清白蛋白、hdl和ldl；以及(22)藥物制劑中所用的其它非毒性相容物質(zhì)。

166、如本文所使用的，術(shù)語“樣品”包含從受試者分離的類似流體、細(xì)胞或組織的集合，以及受試者體內(nèi)存在的流體、細(xì)胞或組織。生物流體的實(shí)例包括血液、血清和漿膜流體、血漿、腦脊液、眼流體、淋巴、尿液、唾液等。組織樣品可以包括來自組織、器官或局部區(qū)域的樣品。例如，樣品可以源自特定的器官、器官的部分或這些器官內(nèi)的流體或細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，樣品可以源自腦(例如，全腦或腦的某些區(qū)段，例如紋狀體，或腦中的某些類型的細(xì)胞，例如神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞(星形膠質(zhì)細(xì)胞、少突膠質(zhì)細(xì)胞、小膠質(zhì)細(xì)胞))。在其他實(shí)施方案中，“源自受試者的樣品”指的是從受試者抽取的血液或由其衍生的血漿或血清。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，“源自受試者的樣品”是指源自受試者的腦組織(或其子組分)或視網(wǎng)膜組織(或其子組分)。

167、應(yīng)理解，盡管表2中的序列描述為修飾或綴合的序列，但在某些實(shí)施方案中，本公開的rnai劑(例如，本公開的dsrna)的rna可包含表2或3中示出的任一序列，其與表中所述不同地修飾或綴合。親脂性配體可包括在本技術(shù)中提供的任何位置中，除非在指明具體位置/定位的情況下。