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      啟動子元件及其在3-羥基丙酸生物合成中的應用

      文檔序號:39623038發(fā)布日期:2024-10-11 15:41閱讀:來源:國知局

      技術特征:

      1.一種啟動子元件,其特征在于,所述啟動子元件為如下(a)-(b)任一項所示:(a)如下表所示的啟動子:

      2.權利要求1所述啟動子元件在3-羥基丙酸生物合成中的應用。

      3.一株高產3-羥基丙酸工程菌,其特征在于,所述高產3-羥基丙酸工程菌以解脂耶氏酵母為底盤菌,表達c.aurantiacus來源的丙二酰-輔酶a還原酶,且構建不同強度啟動子組合平衡mcr-c與mcr-n的基因表達量,通過動態(tài)下調型啟動子動態(tài)下調fas1基因,并基于強啟動子促進前體供應基因表達。

      4.如權利要求3所述高產3-羥基丙酸工程菌,其特征在于,所述底盤菌為解脂耶氏酵母po1f。

      5.如權利要求3所述高產3-羥基丙酸工程菌,其特征在于,所述表達c.aurantiacus來源的丙二酰-輔酶a還原酶mcr,且構建不同強度啟動子組合平衡mcr-c與mcr-n的基因表達量的具體方法包括:將mcr拆分為mcr-n(第1-549個氨基酸殘基部分)和mcr-c(第550-1219個氨基酸殘基部分),mcr-c和mcr-n基因使用權利要求1所述啟動子進行調控,構建整合型表達載體,并將其整合到解脂耶氏酵母基因組中。

      6.如權利要求5所述高產3-羥基丙酸工程菌,其特征在于,對所述丙二酰-輔酶a還原酶mcr進行突變,所述突變位點為n940v,k1106w和s1114r。

      7.如權利要求3所述高產3-羥基丙酸工程菌,其特征在于,所述mcr-c由pc48啟動子調控;所述mcr-n基因由pc12、pc37、pu01、pu06、pu04中的任意一個啟動子調控,優(yōu)選啟動子為pc37。

      8.如權利要求3所述高產3-羥基丙酸工程菌,其特征在于,所述通過動態(tài)下調型啟動子動態(tài)下調fas1基因中,所述動態(tài)下調型啟動子包括pd19、pd20和pd21,優(yōu)選為pd19。

      9.如權利要求3所述高產3-羥基丙酸工程菌,其特征在于,基于強啟動子促進前體供應基因表達中,所述強啟動子包括pu12、pu13、pc48中的任意一個;

      10.一種生物合成3-羥基丙酸的方法,其特征在于,所述方法包括:對權利要求3-9任一項所述高產3-羥基丙酸工程菌進行發(fā)酵培養(yǎng);


      技術總結
      本發(fā)明屬于生物技術領域,具體涉及啟動子元件及其在3?羥基丙酸生物合成中的應用。具體的,本發(fā)明對不同培養(yǎng)條件和生長階段的解脂耶氏酵母野生菌株進行轉錄組分析,成功篩選得到一系列生長調節(jié)型啟動子和梯度強度型啟動子。同時,將篩選到的啟動子應用于解脂耶氏酵母中3?羥基丙酸生物合成途徑的模塊化構建,優(yōu)化解脂耶氏酵母的代謝途徑和生物過程。此外,通過對啟動子進行精細截短,挖掘潛在的新的上游激活序列(UAS),為構建人工合成的雜交啟動子提供了更多選擇??傊?,本發(fā)明豐富了解脂耶氏酵母的啟動子元件庫,從多角度實現了基因表達水平的精確調控,同時為動態(tài)調控代謝網絡和構建高效細胞工廠提供了參考。

      技術研發(fā)人員:梁泉峰,康方冰
      受保護的技術使用者:山東大學
      技術研發(fā)日:
      技術公布日:2024/10/10
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