1.一種多重pcr結(jié)合crispr-cas快速檢測(cè)呼吸道病原體的試劑盒,其特征在于所述試劑盒包括多重?cái)U(kuò)增引物組合、裝填sgrna的sgrna檢測(cè)板、dna聚合酶、rna逆轉(zhuǎn)錄酶、crispr/cas蛋白、熒光報(bào)告探針;
2.如權(quán)利要求1所述的試劑盒,其特征在于呼吸道病原體為以下178種呼吸道病原體中的一種或多種:
3.如權(quán)利要求1所述的試劑盒,其特征在于所述crispr/cas蛋白為cas12a蛋白。
4.如權(quán)利要求2所述的試劑盒,其特征在于所述呼吸道病原體和對(duì)應(yīng)的檢測(cè)該病原體靶標(biāo)序列的sgrna如下表所示:
5.如權(quán)利要求1所述的試劑盒,其特征在于所述的熒光報(bào)告探針為一段單鏈dna,其5’端標(biāo)記有熒光基團(tuán),3’端標(biāo)記有淬滅基團(tuán);
6.如權(quán)利要求1所述的試劑盒,其特征在于所述試劑盒包括多重?cái)U(kuò)增體系和檢測(cè)體系,所述多重?cái)U(kuò)增體系包括多重?cái)U(kuò)增引物組合、擴(kuò)增酶、擴(kuò)增緩沖液;所述擴(kuò)增酶包括dna聚合酶、rna逆轉(zhuǎn)錄酶;
7.如權(quán)利要求1所述的試劑盒,其特征在于所述試劑盒包括內(nèi)標(biāo)和陰性對(duì)照;
8.利用權(quán)利要求1~7之一任一項(xiàng)所述的多重pcr結(jié)合crispr-cas快速檢測(cè)呼吸道病原體的試劑盒,高通量檢測(cè)呼吸道病原體的方法,其特征在于所述方法包括以下步驟:
9.如權(quán)利要求8所述的方法,其特征在于所述步驟(3)的反應(yīng)條件為:避光條件下,37~42℃反應(yīng)20~30min。
10.如權(quán)利要求8所述的方法,其特征在于所述步驟(2)中,檢測(cè)板的每個(gè)檢測(cè)孔分別裝填seq?no?383~569所示序列,其中鳥分枝桿菌復(fù)合群擴(kuò)增2個(gè)靶標(biāo)序列,與其互補(bǔ)的兩條sgrna,序列如seq?id?no.415、seq?id?no.416所示,裝填于同一檢測(cè)孔中;