技術(shù)特征：

1.一種肝臟ito細(xì)胞分離-凍存-復(fù)蘇的即用型體系構(gòu)建方法，其特征在于，包括以下步驟：

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肝臟ito細(xì)胞無損分離-凍存-復(fù)蘇的即用型體系構(gòu)建方法，其特征在于，所述ito細(xì)胞是按照以下步驟分離的：

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的肝臟ito細(xì)胞無損分離-凍存-復(fù)蘇的即用型體系構(gòu)建方法，其特征在于，將細(xì)胞懸液經(jīng)離心、重懸、獲取目標(biāo)層細(xì)胞，包括：

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的肝臟ito細(xì)胞分離-凍存-復(fù)蘇的即用型體系構(gòu)建方法，其特征在于，所述酶消化液是將iv型膠原酶、鏈酶蛋白酶e加入至d-hanks溶液中，混合均勻，調(diào)整ph值為7.0~7.5，過濾除菌而制得，其中，iv型膠原酶與鏈酶蛋白酶e的質(zhì)量比為1:1~2；

5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的肝臟ito細(xì)胞分離-凍存-復(fù)蘇的即用型體系構(gòu)建方法，其特征在于，所述肝臟基質(zhì)膠是按照以下步驟制得：

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肝臟ito細(xì)胞分離-凍存-復(fù)蘇的即用型體系構(gòu)建方法，其特征在于，配制目標(biāo)細(xì)胞凍存液時，所述高糖培養(yǎng)基、胰島素、羧甲基纖維素鈉以及肝臟基質(zhì)膠體積比為1:1~2:1~2:1~1.5；4x胰島素的濃度為0.02~4mg/ml。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肝臟ito細(xì)胞分離-凍存-復(fù)蘇的即用型體系構(gòu)建方法，其特征在于，4x高糖培養(yǎng)基是由以下組分配制而得：

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的肝臟ito細(xì)胞分離-凍存-復(fù)蘇的即用型體系構(gòu)建方法，其特征在于，4x濃度丙二醇，其濃度為4x母液濃度8%；2x羧甲基纖維素鈉母液濃度為3%，配制后的終濃度分別為2%和1.5%。

9.一種權(quán)利要求1~8任一項(xiàng)所述的方法獲得的含ito細(xì)胞凍存液。

10.一種權(quán)利要求9所述的含ito細(xì)胞凍存液在創(chuàng)面或毛囊損傷部位濕性愈合中的應(yīng)用。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了肝臟ITO細(xì)胞分離?凍存?復(fù)蘇的即用型體系構(gòu)建方法及應(yīng)用，涉及生物醫(yī)藥技術(shù)的細(xì)胞治療領(lǐng)域。該方法包括從哺乳動物肝臟中分離出未激活的原代ITO細(xì)胞；將ITO細(xì)胞與即用型細(xì)胞凍存液充分混合、程序降溫后液氮環(huán)境儲存；當(dāng)有治療需求時將凍存的原代ITO細(xì)胞快速復(fù)溫至液態(tài)，得到含高活力ITO細(xì)胞并連同細(xì)胞凍存液直接應(yīng)用于各種創(chuàng)面表皮或深部區(qū)域。本發(fā)明利用即用型細(xì)胞凍存液在創(chuàng)面區(qū)所形成的濕性愈合環(huán)境，ITO細(xì)胞在創(chuàng)面區(qū)快速活化過程中持續(xù)大量釋放的生長因子，以及ITO細(xì)胞自身壞死破裂所釋放的維生素A，實(shí)現(xiàn)促進(jìn)各類創(chuàng)面修復(fù)與毛囊再生。

技術(shù)研發(fā)人員：賈慶安,卜陽,張青林,張葉靜,徐子寒
受保護(hù)的技術(shù)使用者：西北工業(yè)大學(xué)
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/10